產(chan)品系(xi)統(tong)PRODUCT CENTER
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首頁(ye)-產(chan)品系(xi)統(tong)--合作(zuo)品牌(pai)-Euro Diagnostica AB
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有效保修(xiu)
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質量保(bao)障
Quality Assurance產(chan)品分(fen)類(lei)
PRODUCT CLASSIFICATION技術文章(zhang)
TECHNICAL ARTICLES
詳(xiang)細(xi)介紹
Euro Diagnostica AB
上海(hai)乾思生物(wu)Euro Diagnostica AB品牌(pai)代理專業經營進口(kou)胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing)、細(xi)胞因(yin)子、ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)、細(xi)胞、抗(kang)體(ti)、生物(wu)試(shi)劑(ji)、耗(hao)材、培(pei)養(yang)基、壹抗、二(er)抗(kang)、其(qi)產(chan)品吸附(fu)均(jun)勻，吸附(fu)性(xing)好，空白(bai)值低，孔(kong)底透(tou)明(ming)度高，代做(zuo)ELISA實驗等(deng)。完(wan)善(shan)的庫存(cun)及(ji)供(gong)應體(ti)系(xi)以(yi)及(ji)高效穩(wen)定的(de)純化技術，保(bao)證(zheng)產(chan)品均(jun)能現貨供應和產(chan)品質量的(de)穩(wen)定性(xing)。
怎(zen)樣查(zha)到壹個(ge)特定細(xi)胞株(zhu)的相(xiang)關(guan)知(zhi)識(shi)和培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)？
ATCC（American Type Culture Collection）收集了絕大多(duo)數(shu)細(xi)胞的(de)詳(xiang)細(xi)資(zi)料(liao)。打(da)開(kai)ATCC網(wang)頁的(de)Cells and hybridomas鏈接(jie)，輸入細(xi)胞名(ming)稱(cheng)就(jiu)可(ke)以(yi)搜索ATCC的(de)細(xi)胞數(shu)據(ju)庫。數(shu)據(ju)庫中(zhong)有(you)每壹種(zhong)細(xi)胞的(de)詳(xiang)細(xi)描述，包(bao)括(kuo)細(xi)胞的(de)來(lai)源，培(pei)養(yang)和凍(dong)存(cun)條件(jian)，以及(ji)相關(guan)文獻(xian)等(deng)資(zi)料(liao)。
如(ru)何選用(yong)特殊(shu)細(xi)胞系(xi)培(pei)養(yang)基？
培(pei)養(yang)某類(lei)型(xing)細(xi)胞沒(mei)有(you)固(gu)定的(de)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)。MEM中(zhong)培(pei)養(yang)的(de)細(xi)胞，很(hen)可(ke)能在(zai)DMEM或M199中(zhong)同樣容(rong)易生長(chang)。總之，*MEM、DMEM做(zuo)貼壁細(xi)胞培(pei)養(yang)；RPMI1640做(zuo)懸浮細(xi)胞培(pei)養(yang)；各(ge)種(zhong)目(mu)的無血(xue)清(qing)培(pei)養(yang)*AIMV培(pei)養(yang)基（SFM）。
測(ce)序(xu)實驗流程(cheng)：
1 收集樣品
2 相關(guan)試劑(ji) 總RNA提(ti)取(qu)試(shi)劑TREzol Reagent (RNA提(ti)取(qu)試(shi)劑), M-MLV(cDNA逆(ni)轉錄酶(mei)), RNA 純(chun)化試劑(ji), RealqPCR MasterMix (熒光(guang)定量PCR預(yu)混試劑(ji))。
3 實驗儀器(qi) 熒光(guang)定量PCR儀(yi); PCR儀(yi);低溫離(li)心(xin)機。
4 總RNA提(ti)取(qu)
5 cDNA合(he)成 在0.5ml的(de)離(li)心(xin)管中(zhong)加(jia)入1µl模(mo)板總RNA(1µg/µl); 2µl隨機引(yin)物(wu)(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加(jia)水(shui)至15µl體系(xi)。混勻後70℃變(bian)性(xing)RNA 5分(fen)鐘，冰(bing)上(shang)速(su)冷1分(fen)鐘，離(li)心(xin)將溶液收集至管底(di)加入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加(jia)水(shui)至30µl體系(xi)。PCR儀(yi)中(zhong)反(fan)應條(tiao)件(jian)設置 37℃延(yan)伸(shen)60min，70℃保(bao)溫15min終(zhong)止反應。合(he)成好的(de)cDNA置(zhi)於 -20 ℃保(bao)存備(bei)用(yong)。
6 引物(wu)設(she)計(ji)與(yu)thermal cycler protocol thermal cycler protocol合(he)成
7 實時定量PCR 按(an)以下(xia)反(fan)應體(ti)系(xi)進行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上遊引物(wu)F 1 ul，下(xia)遊引物(wu)R 1 ul;cDNA template 2ul。定量PCR儀(yi)擴增反應條(tiao)件(jian)設置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個(ge)循(xun)環(huan))。
8 PCR產(chan)物(wu)溶解(jie)曲線分(fen)析 將所擴增的PCR 產(chan)物(wu)進行溶解(jie)曲線分(fen)析，單(dan)峰溶解(jie)曲線表(biao)示擴增產(chan)物(wu)單(dan)壹，無非特異性(xing)擴增產(chan)物(wu)。溶解(jie)曲線生成的反(fan)應程(cheng)序(xu)為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。
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