產(chan)品(pin)系統PRODUCT CENTER
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首頁(ye)-產(chan)品(pin)系統--合(he)作(zuo)品牌(pai)-TED PELLA,INC
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詳(xiang)細介(jie)紹
TED PELLA,INC
上海乾思生物(wu)TED PELLA,INC品(pin)牌(pai)代(dai)理專(zhuan)業經營進口(kou)胎牛血清、細胞因(yin)子(zi)、ELISA試劑盒(he)、細(xi)胞、抗體、生物(wu)試劑、耗(hao)材(cai)、培(pei)養(yang)基、壹抗(kang)、二抗、其(qi)產(chan)品(pin)吸(xi)附均勻，吸(xi)附性好，空白(bai)值低(di)，孔底透明度高(gao)，代做(zuo)ELISA實驗等。完(wan)善(shan)的庫(ku)存及供應(ying)體(ti)系以(yi)及高(gao)效穩定(ding)的(de)純化技術，保(bao)證(zheng)產(chan)品(pin)均(jun)能(neng)現(xian)貨(huo)供應(ying)和(he)產(chan)品(pin)質(zhi)量的穩(wen)定(ding)性。
怎樣查到(dao)壹個特定(ding)細(xi)胞株(zhu)的相關知(zhi)識和(he)培(pei)養(yang)條件(jian)？
ATCC（American Type Culture Collection）收(shou)集(ji)了(le)絕大(da)多數(shu)細胞的詳(xiang)細資料。打開ATCC網頁的(de)Cells and hybridomas鏈接(jie)，輸入(ru)細(xi)胞名稱(cheng)就可(ke)以(yi)搜索ATCC的細胞數據(ju)庫(ku)。數據(ju)庫(ku)中(zhong)有(you)每(mei)壹種(zhong)細胞的詳(xiang)細描述，包括細胞的來源，培(pei)養(yang)和(he)凍(dong)存條件(jian)，以(yi)及相關文(wen)獻(xian)等資(zi)料。
如(ru)何選(xuan)用特殊細(xi)胞系培養基(ji)？
培(pei)養某類(lei)型(xing)細胞沒(mei)有(you)固定(ding)的(de)培養(yang)條件(jian)。MEM中(zhong)培(pei)養的(de)細胞，很可能(neng)在DMEM或M199中(zhong)同(tong)樣容易(yi)生長。總之，*MEM、DMEM做(zuo)貼(tie)壁細(xi)胞培養；RPMI1640做(zuo)懸(xuan)浮細(xi)胞培養；各(ge)種(zhong)目(mu)的無血清培養*AIMV培養(yang)基(ji)（SFM）。
測(ce)序(xu)實驗流(liu)程：
1 收(shou)集(ji)樣品
2 相關試劑 總(zong)RNA提(ti)取(qu)試劑TREzol Reagent (RNA提(ti)取(qu)試劑), M-MLV(cDNA逆轉(zhuan)錄(lu)酶), RNA 純化試劑, RealqPCR MasterMix (熒(ying)光(guang)定(ding)量PCR預混試劑)。
3 實驗儀(yi)器(qi) 熒光(guang)定(ding)量PCR儀(yi); PCR儀(yi);低(di)溫(wen)離(li)心(xin)機(ji)。
4 總RNA提取(qu)
5 cDNA合(he)成(cheng) 在(zai)0.5ml的(de)離心(xin)管中(zhong)加(jia)入(ru)1µl模(mo)板(ban)總(zong)RNA(1µg/µl); 2µl隨機(ji)引(yin)物(wu)(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加(jia)水(shui)至15µl體系。混勻後70℃變性RNA 5分(fen)鐘(zhong)，冰(bing)上速冷1分(fen)鐘(zhong)，離心(xin)將(jiang)溶液(ye)收(shou)集(ji)至管底加(jia)入(ru)6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加(jia)水(shui)至30µl體系。PCR儀(yi)中(zhong)反應條件(jian)設(she)置(zhi) 37℃延(yan)伸(shen)60min，70℃保(bao)溫(wen)15min終(zhong)止反應。合(he)成(cheng)好的(de)cDNA置(zhi)於(yu) -20 ℃保存(cun)備(bei)用。
6 引(yin)物(wu)設(she)計與(yu)thermal cycler protocol thermal cycler protocol合(he)成(cheng)
7 實時(shi)定(ding)量PCR 按(an)以(yi)下(xia)反應體系進行(xing): 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上遊引(yin)物(wu)F 1 ul，下(xia)遊(you)引(yin)物(wu)R 1 ul;cDNA template 2ul。定(ding)量PCR儀(yi)擴(kuo)增(zeng)反應條件(jian)設(she)置(zhi):50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個循環)。
8 PCR產(chan)物(wu)溶(rong)解曲線分(fen)析(xi) 將(jiang)所擴(kuo)增(zeng)的PCR 產(chan)物(wu)進(jin)行(xing)溶(rong)解曲線分(fen)析(xi)，單(dan)峰溶解曲線表(biao)示(shi)擴增(zeng)產(chan)物(wu)單(dan)壹，無非(fei)特異性擴增(zeng)產(chan)物(wu)。溶(rong)解曲線生成(cheng)的(de)反應程序(xu)為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。
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