IBT
IBT（Immunoblotting Technique）免疫(yi)印跡(ji)技術(shu)，又(you)稱蛋(dan)白(bai)質印跡（Western Blot），是生(sheng)物(wu)學研究(jiu)中(zhong)壹(yi)種極(ji)為(wei)重(zhong)要的(de)分析(xi)技(ji)術，在蛋(dan)白(bai)質檢測(ce)與(yu)分(fen)析領域(yu)發(fa)揮著(zhe)關(guan)鍵(jian)作用。
該(gai)技術的(de)操作(zuo)流程較(jiao)為(wei)復雜且(qie)精(jing)細(xi)。首先(xian)是蛋白(bai)質樣(yang)品(pin)的(de)制備，需要(yao)從細(xi)胞、組(zu)織等生(sheng)物(wu)樣(yang)本(ben)中(zhong)提(ti)取蛋白(bai)質，並通過壹(yi)系(xi)列處(chu)理(li)，如裂解、離(li)心(xin)等，獲得(de)純(chun)度(du)較(jiao)高(gao)且(qie)具(ju)有(you)活性(xing)的(de)蛋白(bai)質提(ti)取物(wu)。隨後，利用聚丙烯(xi)酰(xian)胺(an)凝(ning)膠(jiao)電(dian)泳(yong)（PAGE）技(ji)術，根據蛋(dan)白(bai)質分子的(de)大小(xiao)和電(dian)荷差(cha)異(yi)，將混(hun)合的(de)蛋白(bai)質樣(yang)品(pin)進行(xing)分離。在電(dian)場(chang)作(zuo)用下，不同(tong)分子(zi)量(liang)的(de)蛋白(bai)質在凝(ning)膠(jiao)中(zhong)遷移(yi)速度(du)不(bu)同，從而(er)在凝(ning)膠(jiao)上(shang)形(xing)成(cheng)各自(zi)du特的(de)條帶(dai)。接著(zhe)，通(tong)過電轉印技(ji)術(shu)，將凝膠(jiao)上(shang)已(yi)分(fen)離的(de)蛋白(bai)質條帶(dai)轉移(yi)到(dao)固相載體，如硝酸(suan)纖維(wei)素(su)膜(mo)或(huo)聚偏二氟(fu)乙烯(xi)膜(mo)上。這(zhe)壹(yi)步(bu)確(que)保(bao)了蛋白(bai)質在後(hou)續(xu)檢測(ce)過程中(zhong)的(de)穩定(ding)性(xing)和可(ke)操作(zuo)性。最後，進行(xing)免疫(yi)檢測(ce)。將膜(mo)與(yu)特異性的(de)抗體(ti)進行(xing)孵育(yu)，抗體(ti)能夠與(yu)目(mu)標蛋(dan)白(bai)質特異性結(jie)合。再(zai)加(jia)入(ru)帶有(you)標記(ji)的(de)二抗，二(er)抗與(yu)壹(yi)抗結(jie)合後，通過檢測(ce)標(biao)記(ji)物(wu)，如酶標記的(de)二抗可(ke)催(cui)化(hua)底物(wu)顯色(se)，或(huo)者放射(she)性(xing)標(biao)記(ji)的(de)二抗通(tong)過放射(she)自(zi)顯影(ying)等方(fang)法(fa)，來確(que)定(ding)目(mu)標蛋(dan)白(bai)質的(de)存在與(yu)位(wei)置，並根據條帶(dai)的(de)強弱進行(xing)半(ban)定(ding)量分析。
免疫(yi)印跡(ji)技術(shu)具(ju)有(you)諸多(duo)顯著優勢(shi)。其特異性ji高(gao)，利用抗原(yuan) - 抗體(ti)的(de)特異性結(jie)合，能夠準(zhun)確(que)識別和檢測(ce)復(fu)雜(za)樣(yang)品(pin)中(zhong)的(de)目(mu)標蛋(dan)白(bai)質，有(you)效排除其他(ta)無(wu)關蛋白(bai)質的(de)幹擾。靈(ling)敏度(du)也(ye)相(xiang)當(dang)出色(se)，能夠檢測(ce)出低豐度(du)的(de)蛋白(bai)質，即(ji)使樣(yang)品(pin)中(zhong)目(mu)標蛋(dan)白(bai)質含(han)量極(ji)少(shao)，也(ye)能通過合適的(de)檢測(ce)手段清(qing)晰(xi)呈現。同時，該(gai)技(ji)術還(hai)具(ju)備良(liang)好的(de)分辨率(lv)，能夠區分分(fen)子量(liang)相(xiang)近(jin)的(de)蛋白(bai)質，為(wei)科(ke)研人(ren)員提(ti)供詳(xiang)細(xi)、準確(que)的(de)蛋白(bai)質信(xin)息。
在科(ke)研領(ling)域(yu)，免疫(yi)印跡(ji)技術(shu)應(ying)用廣(guang)泛。在基(ji)礎生(sheng)物(wu)學研究(jiu)中(zhong)，用於(yu)研究(jiu)蛋白(bai)質的(de)表達(da)水(shui)平變化(hua)、蛋(dan)白(bai)質的(de)修飾(shi)狀(zhuang)態(tai)以(yi)及(ji)蛋(dan)白(bai)質 - 蛋白(bai)質相互作用等。在醫學(xue)研究(jiu)中(zhong)，可用於(yu)疾病標誌物(wu)的(de)篩選(xuan)與(yu)鑒定(ding)，如在腫瘤研究(jiu)中(zhong)，檢測(ce)腫瘤相關蛋白(bai)質的(de)表達(da)情(qing)況(kuang)，為(wei)腫瘤的(de)早(zao)期診斷(duan)、病(bing)情(qing)監測(ce)和(he)治(zhi)療(liao)方(fang)案制定提(ti)供重(zhong)要依(yi)據；在病(bing)毒學研究(jiu)中(zhong)，可用於(yu)檢測(ce)病(bing)毒感染(ran)後(hou)宿(xiu)主(zhu)細胞內蛋(dan)白(bai)質的(de)變化(hua)，助(zhu)力病毒致病(bing)機(ji)制的(de)探究(jiu) 。
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