人急(ji)性白血病(bing)細胞(bao)_ 實(shi)驗

非常讓(rang)人著(zhe)迷的(de)實(shi)驗，其(qi)成功關鍵之(zhi)壹(yi)是(shi)選擇可(ke)信的(de)實(shi)驗試劑(ji)。

我(wo)司細胞(bao)近3000種，來(lai)源於(yu)美(mei)國(guo)ATCC,細胞(bao)都(dou)是經過(guo)嚴(yan)格(ge)質量(liang)控制，在(zai)中(zhong)國(guo)大(da)陸(lu)努(nu)力搭建正牌(pai)細胞(bao)與(yu)國(guo)內廣(guang)大(da)科研人員(yuan)之(zhi)間的(de)溝通橋(qiao)梁(liang)。為(wei)您(nin)提(ti)供(gong)人(ren)急(ji)性白血病(bing)細胞(bao)外，還有更(geng)多(duo)相(xiang)關(guan)實(shi)驗產品(pin)，標(biao)準品(pin)，細胞(bao)株(zhu)和(he)實(shi)驗技術(shu)服(fu)務等(deng)等(deng)前期後續服(fu)務。

人(ren)急(ji)性白血病(bing)細胞(bao)的(de)產品(pin)介(jie)紹(shao)

人(ren)急(ji)性白血病(bing)細胞(bao)由(you)我司(si)*銷(xiao)售(shou)人急(ji)性白血病(bing)細胞(bao)。

人(ren)急(ji)性白血病(bing)細胞(bao)細胞(bao)株(zhu)

　　Q1. 人急(ji)性白血病(bing)細胞(bao)液(ye)體培(pei)養(yang)基(ji)的(de)保(bao)存是(shi)冷(leng)藏(zang)好？還是冷(leng)凍(dong)好？

　　要(yao)冷(leng)藏(zang)！！因(yin)為液(ye)體培(pei)養(yang)基(ji)經冷(leng)凍(dong)後再(zai)經溶化時，其(qi)溶液(ye)的(de)pH值會發生(sheng)改變(bian)，溶液(ye)往(wang)往(wang)變(bian)堿，某(mou)些成分溶解(jie)也(ye)會受(shou)到影響對細胞(bao)生(sheng)長(chang)不(bu)利。故液體培(pei)養(yang)基(ji)壹(yi)定(ding)要(yao)存(cun)放在(zai)冷(leng)藏(zang)箱中，通常液(ye)體培(pei)養(yang)基(ji)在(zai)冷(leng)藏(zang)條(tiao)件(jian)下可(ke)存放6個月(yue) ~ 壹(yi)年(nian)。

　　Q2.人急(ji)性白血病(bing)細胞(bao) 液(ye)體培(pei)養(yang)基(ji)中谷氨酰胺的(de)作(zuo)用，及(ji)使用方法(fa)。

　　幾乎所有的(de)細胞(bao)對谷氨酰胺有較(jiao)高(gao)的(de)要(yao)求，細胞(bao)需(xu)要(yao)谷(gu)氨酰胺合成蛋白質，在(zai)缺少(shao)谷(gu)氨酰胺時，細胞(bao)生(sheng)長(chang)不(bu)良而死(si)亡。所(suo)以，各(ge)種培(pei)養(yang)液(ye)中都(dou)含(han)有較(jiao)大(da)量(liang)的(de)谷氨酰胺。谷氨酰胺在(zai)溶液(ye)中(zhong)很不(bu)穩(wen)定，應置-20 ?C冰(bing)凍(dong)保(bao)存，用前加入培(pei)養(yang)基(ji)中。加有谷(gu)氨酰胺的(de)液體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)4 ?C 冰(bing)箱儲(chu)存兩周以上(shang)時，應重新加入原來量的(de)谷氨酰胺。基(ji)礎(chu)醫學(xue)細胞(bao)中(zhong)心在(zai)其(qi)服(fu)務項目中配制分(fen)裝了(le)高(gao)濃(nong)度(du)（100倍）的(de)谷氨酰胺溶液(ye)（1ml/支）。每(mei)支1ml的(de)谷氨酰胺加到(dao)99ml*培(pei)養(yang)基(ji)中，其(qi)終(zhong)濃(nong)度(du)為2mM/ml培(pei)養(yang)基(ji)。包裝為粉(fen)紅色(se)，-24?C保(bao)存。

　　Q3.細胞(bao)計數(shu)及(ji)存活(huo)測(ce)試
1、原理：
(1)計算(suan)細胞(bao)數(shu)目可(ke)用血球(qiu)計數(shu)盤或(huo)是(shi)Coultercounter粒(li)子(zi)計數(shu)器自動(dong)計數(shu)。
(2)血球(qiu)計數(shu)盤壹(yi)般有(you)二個chambers，每(mei)個chamber中(zhong)細刻9個1mm2大(da)正方形(xing)，其(qi)中(zhong)4個角(jiao)落(luo)之(zhi)正方形(xing)再(zai)細刻16個小格(ge)，深度(du)均為(wei)0.1mm。當(dang)chamber上(shang)方蓋(gai)上(shang)蓋(gai)玻(bo)片後，每(mei)個大(da)正方形(xing)之(zhi)體積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用時，計數(shu)每(mei)個大(da)正方形(xing)內(nei)之(zhi)細胞(bao)數(shu)目，乘以稀釋倍數(shu)，再(zai)乘以104，即為每(mei)ml中(zhong)之(zhi)細胞(bao)數(shu)目。
(3)存(cun)活(huo)測試之(zhi)步(bu)驟為(wei)dyeexclusion，利用染(ran)料會滲入死細胞(bao)中(zhong)而呈(cheng)色(se)，而活(huo)細胞(bao)因(yin)細胞(bao)膜(mo)完(wan)整(zheng)，染(ran)料無法滲入而不(bu)會呈色(se)。壹(yi)般使用藍(lan)色(se)之(zhi)trypan blue染(ran)料，如(ru)果(guo)細胞(bao)不(bu)易(yi)吸(xi)收trypan blue，則用紅色(se)之(zhi)Erythrosin bluish。計算(suan)細胞(bao)活(huo)率：活細胞(bao)數(shu)/(活細胞(bao)數(shu)+死細胞(bao)數(shu))×100%。計數(shu)應在(zai)臺(tai)盼蘭染(ran)色(se)後數(shu)分鐘(zhong)內(nei)完成，隨(sui)時間(jian)延長(chang)，部(bu)分活(huo)細胞(bao)也(ye)開始攝取(qu)染(ran)料;因為臺盼蘭對蛋白質有(you)很強(qiang)的(de)親(qin)和(he)力，用不含(han)血清的(de)稀釋液(ye)，可(ke)以使染(ran)色(se)計數(shu)更(geng)為(wei)準確(que)。

　　Q4.細胞(bao)特(te)性
在(zai)細胞(bao)培(pei)養(yang)之(zhi)前，我們(men)要(yao)了(le)解壹(yi)下妳所(suo)要(yao)養(yang)細胞(bao)的(de)基(ji)本特性，這點可(ke)以從細胞(bao)的(de)產品(pin)說(shuo)明(ming)書或者從(cong)ATCC細胞(bao)庫(ku)查詢(xun)。除此之(zhi)外我(wo)們(men)還要(yao)知道(dao)每(mei)管(guan)細胞(bao)的(de)數(shu)量，建(jian)議(yi)分裂(lie)或(huo)傳(chuan)代(dai)的(de)比例(li)，和(he)已知細胞(bao)的(de)傳(chuan)代(dai)代(dai)次(ci)等(deng)信息。

　　Q5.準備(bei)培(pei)養(yang)基(ji)
復蘇細胞(bao)時需(xu)要(yao)準備(bei)合適(shi)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)，血清和(he)細胞(bao)生(sheng)長(chang)所(suo)需的(de)添加(jia)劑。大(da)部(bu)分(fen)培(pei)養(yang)細胞(bao)所(suo)用的(de)培(pei)養(yang)體(ti)系(xi)，可(ke)以在(zai)訂(ding)購(gou)細胞(bao)系(xi)時獲(huo)得(de)。
雖然大(da)多(duo)數(shu)細胞(bao)系(xi)可(ke)以在(zai)不(bu)止(zhi)壹(yi)種培(pei)養(yang)基(ji)中生長(chang)，但(dan)是當(dang)培(pei)養(yang)基(ji)改變時，細胞(bao)的(de)性質也會變化。因此(ci)，使用細胞(bao)庫(ku)推薦(jian)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)來培(pei)養(yang)細胞(bao)會獲得(de)的(de)效果(guo)。

　　Q6.開啟(qi)凍(dong)存(cun)管
1.準備(bei)壹(yi)個培(pei)養(yang)瓶(ping)，加入適宜(yi)細胞(bao)培(pei)養(yang)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)，液體體積按照(zhao)說(shuo)明(ming)書的(de)推薦(jian)配置，並平衡培(pei)養(yang)基(ji)的(de)溫度(du)和(he)pH（CO2）。　
2.在(zai)37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)或(huo)細胞(bao)的(de)正常生(sheng)長(chang)溫度(du)下將(jiang)凍(dong)存(cun)管輕輕搖(yao)動(dong)。解凍(dong)要(yao)快(kuai)，約(yue)2分鐘(zhong)或(huo)直到冰(bing)晶(jing)融化即可(ke)。
3.從水(shui)浴(yu)中(zhong)取(qu)出凍(dong)存(cun)管並用浸泡(pao)或噴灑(sa)70%乙醇的(de)方式(shi)來消毒(du)。進壹(yi)步(bu)的(de)操作(zuo)均需在(zai)無菌操作(zuo)臺中嚴(yan)格(ge)無菌條件(jian)下進行。
4.擰開凍(dong)存(cun)管的(de)管帽並將(jiang)內(nei)容(rong)物轉移(yi)到(dao)壹(yi)個含(han)有9 ml推薦(jian)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)無菌離心(xin)管中(zhong)。通過(guo)溫和(he)離心(xin)（125×g 10 min）除去冷(leng)凍(dong)保(bao)護(hu)劑（DMSO）。棄去上(shang)清(qing)，並用1或2 ml*培(pei)養(yang)基(ji)重懸細胞(bao)。將(jiang)這(zhe)些細胞(bao)懸液(ye)轉移(yi)到(dao)含(han)有*培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)中並輕輕搖(yao)動(dong)以*混(hun)勻(yun)。
5.培(pei)養(yang)24小時後檢(jian)查(zha)細胞(bao)狀態並在(zai)需(xu)要(yao)時進行傳(chuan)代(dai)。

　　Q7. 人(ren)急(ji)性白血病(bing)細胞(bao) 培(pei)養(yang)用液pH對細胞(bao)生(sheng)長(chang)的(de)影響

　　由(you)於(yu)，大(da)多(duo)數(shu)細胞(bao)適(shi)宜pH為7.2~7.4，偏(pian)離此(ci)範圍對細胞(bao)將(jiang)產生(sheng)有(you)害(hai)的(de)影響。各(ge)種細胞(bao)對pH的(de)要(yao)求也(ye)不(bu)*相(xiang)同(tong)，原代(dai)培(pei)養(yang)細胞(bao)壹(yi)般對pH變動(dong)耐(nai)受(shou)差(cha)，無限(xian)細胞(bao)系(xi)耐(nai)受(shou)力強。

　　但總體(ti)來(lai)說(shuo)，細胞(bao)耐(nai)酸(suan)性比耐(nai)堿性強壹(yi)些，偏(pian)酸(suan)環境中更(geng)利於(yu)細胞(bao)生(sheng)長(chang)。因(yin)此，我(wo)們(men)在(zai)配(pei)制培(pei)養(yang)用液時，可(ke)把液(ye)體(ti)的(de)pH稍微(wei)調得(de)偏(pian)酸(suan)壹(yi)些。液體在(zai)經過(guo)0.10um或(huo)0.22um濾(lv)膜(mo)過(guo)濾(lv)時，溶液(ye)的(de)pH還會向上(shang)浮(fu)動(dong)0.2左右(you)。

　　人急(ji)性白血病(bing)細胞(bao)質(zhi)量可(ke)靠(kao)，售後有保(bao)障（編(bian)輯：tanxi）