人(ren)急性(xing)單核細胞(bao)白(bai)血(xue)病單(dan)核細胞(bao)_ 實驗

非常(chang)讓人(ren)著迷的(de)實驗，其成(cheng)功(gong)關鍵(jian)之壹(yi)是選(xuan)擇可(ke)信(xin)的(de)實驗試(shi)劑(ji)。

我司細(xi)胞近(jin)3000種(zhong)，來源(yuan)於(yu)美國ATCC,細胞都(dou)是經過(guo)嚴(yan)格(ge)質(zhi)量(liang)控制，在中(zhong)國(guo)大(da)陸努(nu)力(li)搭(da)建正(zheng)牌細(xi)胞(bao)與(yu)國(guo)內廣(guang)大(da)科(ke)研(yan)人(ren)員之間的(de)溝通橋梁。為您(nin)提(ti)供人(ren)急性(xing)單核細胞(bao)白(bai)血(xue)病單(dan)核細胞(bao)外(wai)，還(hai)有更多相關實驗產(chan)品(pin)，標準(zhun)品，細(xi)胞(bao)株(zhu)和(he)實驗技術服務(wu)等等前(qian)期(qi)後續服務(wu)。

人(ren)急性(xing)單核細胞(bao)白(bai)血(xue)病單(dan)核細胞(bao)的(de)產品(pin)介紹(shao)

人(ren)急性(xing)單核細胞(bao)白(bai)血(xue)病單(dan)核細胞(bao)由(you)我司*銷售(shou)人(ren)急性(xing)單核細胞(bao)白(bai)血(xue)病單(dan)核細胞(bao)。

人(ren)急性(xing)單核細胞(bao)白(bai)血(xue)病單(dan)核細胞(bao)細(xi)胞株(zhu)

　　Q1. 人(ren)急性(xing)單核細胞(bao)白(bai)血(xue)病單(dan)核細胞(bao)液(ye)體培養(yang)基(ji)的保(bao)存是冷(leng)藏好(hao)？還(hai)是冷(leng)凍(dong)好(hao)？

　　要(yao)冷(leng)藏！！因(yin)為液(ye)體培養(yang)基(ji)經冷(leng)凍(dong)後再(zai)經溶化(hua)時(shi)，其溶液的pH值(zhi)會(hui)發(fa)生(sheng)改(gai)變，溶液往往變堿(jian)，某(mou)些(xie)成(cheng)分溶解也(ye)會(hui)受(shou)到影響對細胞生(sheng)長(chang)不利。故(gu)液(ye)體培養(yang)基(ji)壹定要(yao)存放在(zai)冷(leng)藏箱(xiang)中，通常(chang)液體培養(yang)基(ji)在冷(leng)藏條件(jian)下(xia)可(ke)存放6個(ge)月(yue) ~ 壹年(nian)。

　　Q2.人(ren)急性(xing)單核細胞(bao)白(bai)血(xue)病單(dan)核細胞(bao) 液(ye)體培養(yang)基(ji)中谷(gu)氨酰胺(an)的作用(yong)，及使用(yong)方(fang)法(fa)。

　　幾(ji)乎所有的細(xi)胞對谷(gu)氨酰胺(an)有較高的要(yao)求，細(xi)胞(bao)需(xu)要(yao)谷(gu)氨酰胺(an)合(he)成(cheng)蛋(dan)白質(zhi)，在缺少(shao)谷(gu)氨酰胺(an)時(shi)，細胞(bao)生(sheng)長(chang)不良而死(si)亡(wang)。所以，各(ge)種(zhong)培養(yang)液(ye)中都(dou)含(han)有較大(da)量(liang)的谷(gu)氨酰胺(an)。谷(gu)氨酰胺(an)在溶液中很(hen)不穩定，應置-20 ?C冰(bing)凍(dong)保存，用(yong)前(qian)加入培養(yang)基(ji)中。加(jia)有谷(gu)氨酰胺(an)的液體培養(yang)基(ji)4 ?C 冰箱(xiang)儲(chu)存兩周(zhou)以上(shang)時(shi)，應重(zhong)新(xin)加入(ru)原來量(liang)的谷(gu)氨酰胺(an)。基(ji)礎醫(yi)學(xue)細胞中(zhong)心(xin)在(zai)其服務(wu)項目中(zhong)配制分裝(zhuang)了(le)高濃度(du)（100倍(bei)）的(de)谷(gu)氨酰胺(an)溶液（1ml/支）。每(mei)支1ml的谷(gu)氨酰胺(an)加到99ml*培養(yang)基(ji)中，其終(zhong)濃度(du)為2mM/ml培養(yang)基(ji)。包(bao)裝(zhuang)為粉(fen)紅(hong)色(se)，-24?C保(bao)存。

　　Q3.細胞(bao)計(ji)數(shu)及存活測試
1、原理(li)：
(1)計(ji)算細胞數目可(ke)用(yong)血(xue)球(qiu)計(ji)數(shu)盤或是Coultercounter粒(li)子(zi)計(ji)數(shu)器(qi)自(zi)動計(ji)數(shu)。
(2)血(xue)球(qiu)計(ji)數(shu)盤壹般(ban)有二個(ge)chambers，每(mei)個(ge)chamber中細(xi)刻9個(ge)1mm2大(da)正方(fang)形(xing)，其中(zhong)4個(ge)角落(luo)之正方(fang)形(xing)再(zai)細刻16個(ge)小格(ge)，深(shen)度(du)均為0.1mm。當chamber上(shang)方(fang)蓋(gai)上蓋(gai)玻(bo)片後，每(mei)個(ge)大(da)正方(fang)形(xing)之(zhi)體積(ji)為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使(shi)用(yong)時(shi)，計(ji)數(shu)每(mei)個(ge)大(da)正方(fang)形(xing)內之(zhi)細胞(bao)數目，乘以稀(xi)釋倍(bei)數(shu)，再(zai)乘以104，即(ji)為每(mei)ml中之細胞(bao)數(shu)目。
(3)存活測試之(zhi)步驟(zhou)為dyeexclusion，利(li)用(yong)染料(liao)會(hui)滲(shen)入死(si)細(xi)胞(bao)中而呈(cheng)色(se)，而(er)活細胞(bao)因細(xi)胞(bao)膜(mo)完整(zheng)，染料(liao)無法滲(shen)入(ru)而不會(hui)呈(cheng)色(se)。壹(yi)般(ban)使(shi)用(yong)藍色(se)之(zhi)trypan blue染料(liao)，如(ru)果細胞不易(yi)吸(xi)收(shou)trypan blue，則用(yong)紅(hong)色(se)之(zhi)Erythrosin bluish。計(ji)算細胞活率：活細胞(bao)數/(活細胞(bao)數+死(si)細(xi)胞(bao)數)×100%。計(ji)數(shu)應(ying)在(zai)臺盼蘭染色(se)後數分鐘內完成，隨(sui)時(shi)間延(yan)長(chang)，部(bu)分(fen)活細胞(bao)也(ye)開(kai)始(shi)攝(she)取(qu)染料(liao);因為臺盼蘭對蛋(dan)白質(zhi)有很強的親(qin)和(he)力，用(yong)不含(han)血(xue)清(qing)的稀(xi)釋液(ye)，可(ke)以使(shi)染色(se)計(ji)數(shu)更為準(zhun)確(que)。

　　Q4.細胞(bao)特性(xing)
在細(xi)胞培養(yang)之(zhi)前(qian)，我們(men)要(yao)了解壹下(xia)妳(ni)所要(yao)養細(xi)胞(bao)的(de)基(ji)本特性(xing)，這點(dian)可(ke)以從細(xi)胞(bao)的產(chan)品說(shuo)明(ming)書(shu)或(huo)者(zhe)從ATCC細(xi)胞(bao)庫查(zha)詢(xun)。除(chu)此(ci)之外(wai)我們(men)還(hai)要(yao)知道每(mei)管細胞的數(shu)量(liang)，建議(yi)分(fen)裂(lie)或傳代的比(bi)例，和(he)已知(zhi)細胞的(de)傳代代次等信(xin)息。

　　Q5.準(zhun)備培養(yang)基(ji)
復蘇(su)細胞(bao)時(shi)需(xu)要(yao)準(zhun)備合(he)適的培養(yang)基(ji)，血(xue)清(qing)和(he)細胞(bao)生(sheng)長(chang)所需(xu)的添加(jia)劑(ji)。大(da)部(bu)分(fen)培養(yang)細(xi)胞所用(yong)的(de)培養(yang)體系，可(ke)以在(zai)訂(ding)購細胞(bao)系時(shi)獲得(de)。
雖(sui)然大(da)多數(shu)細胞(bao)系可(ke)以在(zai)不止壹種(zhong)培養(yang)基(ji)中生(sheng)長(chang)，但(dan)是當培養(yang)基(ji)改(gai)變時(shi)，細胞(bao)的性(xing)質(zhi)也(ye)會(hui)變(bian)化(hua)。因(yin)此，使用(yong)細(xi)胞(bao)庫(ku)推(tui)薦(jian)的培養(yang)基(ji)來培養(yang)細(xi)胞會(hui)獲(huo)得的效果。

　　Q6.開(kai)啟凍(dong)存管
1.準(zhun)備壹(yi)個(ge)培養(yang)瓶(ping)，加(jia)入(ru)適宜細胞培養(yang)的(de)培養(yang)基(ji)，液體體積(ji)按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)的(de)推(tui)薦(jian)配置，並(bing)平(ping)衡培養(yang)基(ji)的溫(wen)度(du)和(he)pH（CO2）。　
2.在37℃水(shui)浴中或細(xi)胞(bao)的正(zheng)常(chang)生(sheng)長(chang)溫度(du)下(xia)將(jiang)凍(dong)存管輕輕搖動(dong)。解凍(dong)要(yao)快，約(yue)2分(fen)鐘或直(zhi)到冰(bing)晶(jing)融化(hua)即(ji)可(ke)。
3.從水(shui)浴中取(qu)出凍(dong)存管並用(yong)浸(jin)泡(pao)或(huo)噴(pen)灑(sa)70%乙醇(chun)的方(fang)式(shi)來消(xiao)毒(du)。進壹步(bu)的(de)操(cao)作均(jun)需(xu)在無菌(jun)操(cao)作臺中嚴格(ge)無菌(jun)條件(jian)下(xia)進行。
4.擰(ning)開(kai)凍(dong)存管的管帽(mao)並將(jiang)內容物轉(zhuan)移(yi)到壹(yi)個(ge)含(han)有9 ml推薦(jian)培養(yang)基(ji)的無(wu)菌離心(xin)管中。通過(guo)溫(wen)和(he)離心(xin)（125×g 10 min）除(chu)去(qu)冷(leng)凍(dong)保護(hu)劑(ji)（DMSO）。棄去(qu)上(shang)清(qing)，並用(yong)1或(huo)2 ml*培養(yang)基(ji)重懸細胞。將(jiang)這些細(xi)胞懸液轉移(yi)到含(han)有*培養(yang)基(ji)的培養(yang)瓶(ping)中(zhong)並(bing)輕輕(qing)搖(yao)動(dong)以*混(hun)勻。
5.培養(yang)24小(xiao)時(shi)後檢(jian)查(zha)細(xi)胞狀(zhuang)態並在(zai)需(xu)要(yao)時(shi)進行傳代。

　　Q7. 人(ren)急性(xing)單核細胞(bao)白(bai)血(xue)病單(dan)核細胞(bao) 培養(yang)用(yong)液(ye)pH對細胞生(sheng)長(chang)的影響

　　由(you)於(yu)，大(da)多數(shu)細胞(bao)適宜pH為7.2~7.4，偏離此範(fan)圍對細胞將(jiang)產生(sheng)有害的(de)影響。各種(zhong)細(xi)胞對pH的要(yao)求也(ye)不*相同，原代培養(yang)細(xi)胞壹(yi)般(ban)對pH變動耐受(shou)差(cha)，無限(xian)細胞(bao)系耐(nai)受(shou)力強。

　　但(dan)總體來說(shuo)，細(xi)胞(bao)耐(nai)酸性(xing)比(bi)耐堿(jian)性(xing)強壹些(xie)，偏酸環境(jing)中(zhong)更利於(yu)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)。因此，我們(men)在配制培養(yang)用(yong)液(ye)時(shi)，可(ke)把液(ye)體的(de)pH稍微(wei)調得偏酸壹些(xie)。液(ye)體在(zai)經(jing)過(guo)0.10um或(huo)0.22um濾(lv)膜過(guo)濾(lv)時(shi)，溶液的pH還(hai)會(hui)向(xiang)上浮(fu)動0.2左右。

　　人(ren)急性(xing)單核細胞(bao)白(bai)血(xue)病單(dan)核細胞(bao)質(zhi)量(liang)可(ke)靠(kao)，售(shou)後有保障(zhang)（編(bian)輯(ji)：tanxi）