人(ren)口(kou)腔上(shang)皮癌細(xi)胞_培養(yang)指(zhi)南

非(fei)常(chang)讓人著(zhe)迷的(de)實(shi)驗，其(qi)成(cheng)功關(guan)鍵之(zhi)壹是選擇可(ke)信的(de)實(shi)驗試(shi)劑(ji)。

我司(si)細胞近3000種(zhong)，來(lai)源(yuan)於(yu)美國ATCC,細(xi)胞都是經過(guo)嚴(yan)格(ge)質量控(kong)制(zhi)，在中國大(da)陸(lu)努力(li)搭(da)建(jian)正牌細胞與國內(nei)廣大(da)科(ke)研人(ren)員(yuan)之(zhi)間的(de)溝通(tong)橋(qiao)梁。為(wei)您(nin)提供人口(kou)腔上(shang)皮癌細(xi)胞外，還(hai)有更(geng)多相關實(shi)驗產(chan)品(pin)，標(biao)準(zhun)品(pin)，細胞株和(he)實(shi)驗技(ji)術(shu)服(fu)務(wu)等(deng)等(deng)前(qian)期(qi)後續服(fu)務(wu)。

人(ren)口(kou)腔上(shang)皮癌細(xi)胞的(de)產品(pin)介(jie)紹

人口(kou)腔上(shang)皮癌細(xi)胞由(you)我司(si)*銷售人(ren)口(kou)腔上(shang)皮癌細(xi)胞。

人(ren)口(kou)腔上(shang)皮癌細(xi)胞細胞株

　　Q1. 人(ren)口(kou)腔上(shang)皮癌細(xi)胞液(ye)體(ti)培養(yang)基(ji)的(de)保存(cun)是冷(leng)藏(zang)好(hao)？還(hai)是(shi)冷(leng)凍(dong)好(hao)？

　　要(yao)冷(leng)藏(zang)！！因為(wei)液(ye)體(ti)培養(yang)基(ji)經冷(leng)凍(dong)後再經溶(rong)化時(shi)，其溶(rong)液(ye)的(de)pH值(zhi)會發(fa)生(sheng)改變，溶(rong)液(ye)往往變(bian)堿，某些(xie)成分(fen)溶解(jie)也(ye)會受(shou)到(dao)影響對細胞生(sheng)長不利(li)。故液(ye)體(ti)培養(yang)基(ji)壹(yi)定(ding)要(yao)存(cun)放在冷(leng)藏(zang)箱(xiang)中，通(tong)常(chang)液(ye)體(ti)培養(yang)基(ji)在冷(leng)藏(zang)條(tiao)件下(xia)可存(cun)放6個(ge)月 ~ 壹年(nian)。

　　Q2.人(ren)口(kou)腔上(shang)皮癌細(xi)胞 液(ye)體(ti)培養(yang)基(ji)中(zhong)谷(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)的(de)作用，及使用方法(fa)。

　　幾(ji)乎(hu)所有的(de)細胞對谷氨(an)酰(xian)胺(an)有較(jiao)高的(de)要(yao)求，細(xi)胞需要(yao)谷氨(an)酰(xian)胺(an)合(he)成(cheng)蛋(dan)白質，在缺少谷氨(an)酰(xian)胺(an)時(shi)，細(xi)胞生(sheng)長不良而(er)死亡(wang)。所以(yi)，各(ge)種(zhong)培(pei)養(yang)液(ye)中(zhong)都含有較(jiao)大(da)量(liang)的(de)谷氨(an)酰(xian)胺(an)。谷(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)在溶液(ye)中(zhong)很不穩定(ding)，應置(zhi)-20 ?C冰(bing)凍(dong)保存(cun)，用前(qian)加入(ru)培養基(ji)中(zhong)。加有谷氨(an)酰(xian)胺(an)的(de)液(ye)體(ti)培養(yang)基(ji)4 ?C 冰(bing)箱(xiang)儲(chu)存(cun)兩周(zhou)以(yi)上(shang)時，應重(zhong)新加入(ru)原來(lai)量(liang)的(de)谷氨(an)酰(xian)胺(an)。基(ji)礎醫學(xue)細(xi)胞中心(xin)在其服(fu)務(wu)項(xiang)目中(zhong)配制(zhi)分(fen)裝(zhuang)了高濃度（100倍）的(de)谷氨(an)酰(xian)胺(an)溶(rong)液(ye)（1ml/支）。每支1ml的(de)谷氨(an)酰(xian)胺(an)加到(dao)99ml*培養基(ji)中(zhong)，其(qi)終(zhong)濃度為(wei)2mM/ml培(pei)養基(ji)。包(bao)裝(zhuang)為(wei)粉(fen)紅色(se)，-24?C保存(cun)。

　　Q3.細胞計數及存(cun)活測(ce)試
1、原理：
(1)計算細胞數目可(ke)用(yong)血(xue)球計數盤或(huo)是(shi)Coultercounter粒子(zi)計數器自(zi)動計數。
(2)血(xue)球計數盤壹(yi)般(ban)有二(er)個(ge)chambers，每個(ge)chamber中(zhong)細刻9個(ge)1mm2大(da)正(zheng)方(fang)形(xing)，其(qi)中4個(ge)角落(luo)之(zhi)正(zheng)方形再細刻16個(ge)小(xiao)格(ge)，深(shen)度均(jun)為(wei)0.1mm。當chamber上(shang)方蓋上(shang)蓋玻(bo)片(pian)後，每個(ge)大(da)正(zheng)方(fang)形(xing)之(zhi)體(ti)積為(wei)1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用時，計數每個(ge)大(da)正(zheng)方(fang)形(xing)內(nei)之(zhi)細(xi)胞數目，乘(cheng)以(yi)稀釋(shi)倍數(shu)，再乘以(yi)104，即(ji)為(wei)每ml中之細(xi)胞數目。
(3)存(cun)活測(ce)試之(zhi)步(bu)驟為(wei)dyeexclusion，利(li)用染料會滲入(ru)死細胞中而(er)呈色(se)，而(er)活細(xi)胞因細(xi)胞膜(mo)完(wan)整(zheng)，染料無(wu)法(fa)滲入(ru)而(er)不會呈色(se)。壹(yi)般(ban)使用藍色(se)之(zhi)trypan blue染料，如果(guo)細(xi)胞不易吸(xi)收trypan blue，則用紅色(se)之(zhi)Erythrosin bluish。計算細胞活率(lv)：活細(xi)胞數/(活(huo)細胞數+死細胞數)×100%。計數應在臺盼(pan)蘭(lan)染色(se)後數分(fen)鐘(zhong)內(nei)完(wan)成(cheng)，隨時(shi)間延長，部分(fen)活細(xi)胞也(ye)開始攝(she)取(qu)染料;因為(wei)臺(tai)盼(pan)蘭(lan)對蛋白質有很強(qiang)的(de)親和(he)力(li)，用不含血(xue)清的(de)稀釋(shi)液(ye)，可(ke)以(yi)使染色(se)計數更(geng)為(wei)準(zhun)確。

　　Q4.細胞特性
在細胞培養(yang)之前(qian)，我們要(yao)了解壹(yi)下(xia)妳所要(yao)養細(xi)胞的(de)基(ji)本特性，這點(dian)可以(yi)從(cong)細(xi)胞的(de)產品(pin)說(shuo)明(ming)書或(huo)者從ATCC細(xi)胞庫查詢。除此(ci)之外我們還(hai)要(yao)知道(dao)每管(guan)細(xi)胞的(de)數量(liang)，建(jian)議(yi)分(fen)裂(lie)或傳代的(de)比(bi)例(li)，和(he)已知(zhi)細胞的(de)傳代代次(ci)等(deng)信息。

　　Q5.準(zhun)備(bei)培養(yang)基(ji)
復(fu)蘇(su)細胞時需(xu)要(yao)準(zhun)備(bei)合適(shi)的(de)培養(yang)基(ji)，血(xue)清和(he)細胞生(sheng)長所需的(de)添加劑(ji)。大(da)部(bu)分(fen)培養(yang)細胞所用的(de)培養(yang)體(ti)系，可(ke)以(yi)在訂購細胞系時(shi)獲得(de)。
雖(sui)然(ran)大(da)多數細胞系可(ke)以(yi)在不止(zhi)壹(yi)種(zhong)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)生(sheng)長，但是當培(pei)養(yang)基(ji)改變時(shi)，細(xi)胞的(de)性質也(ye)會變(bian)化。因(yin)此，使用細胞庫推(tui)薦(jian)的(de)培養(yang)基(ji)來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞會獲(huo)得的(de)效果(guo)。

　　Q6.開(kai)啟(qi)凍(dong)存(cun)管(guan)
1.準(zhun)備(bei)壹個(ge)培(pei)養瓶，加入(ru)適宜細(xi)胞培養(yang)的(de)培養(yang)基(ji)，液(ye)體(ti)體(ti)積按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書的(de)推(tui)薦(jian)配置(zhi)，並(bing)平(ping)衡培養基(ji)的(de)溫(wen)度和(he)pH（CO2）。　
2.在37℃水(shui)浴中或細胞的(de)正常(chang)生(sheng)長溫(wen)度下(xia)將凍(dong)存(cun)管(guan)輕(qing)輕搖(yao)動。解凍(dong)要(yao)快(kuai)，約(yue)2分(fen)鐘(zhong)或(huo)直到(dao)冰(bing)晶(jing)融(rong)化即(ji)可。
3.從(cong)水(shui)浴中取(qu)出(chu)凍(dong)存(cun)管(guan)並(bing)用浸(jin)泡(pao)或(huo)噴灑70%乙醇(chun)的(de)方式(shi)來(lai)消(xiao)毒。進(jin)壹(yi)步(bu)的(de)操作均(jun)需在無(wu)菌操(cao)作臺中(zhong)嚴(yan)格(ge)無(wu)菌條(tiao)件下(xia)進(jin)行(xing)。
4.擰(ning)開(kai)凍(dong)存(cun)管(guan)的(de)管(guan)帽(mao)並將內(nei)容物轉(zhuan)移到(dao)壹(yi)個(ge)含有9 ml推(tui)薦(jian)培養(yang)基(ji)的(de)無(wu)菌離(li)心管(guan)中(zhong)。通過(guo)溫(wen)和(he)離(li)心（125×g 10 min）除去冷(leng)凍(dong)保護劑(ji)（DMSO）。棄(qi)去上(shang)清，並用(yong)1或2 ml*培(pei)養(yang)基(ji)重(zhong)懸細(xi)胞。將這些(xie)細胞懸液(ye)轉(zhuan)移到(dao)含有*培養基(ji)的(de)培養(yang)瓶中並輕(qing)輕(qing)搖(yao)動以(yi)*混勻(yun)。
5.培(pei)養(yang)24小時後檢(jian)查細胞狀(zhuang)態(tai)並(bing)在需要(yao)時進(jin)行(xing)傳代。

　　Q7. 人(ren)口(kou)腔上(shang)皮癌細(xi)胞 培養(yang)用液(ye)pH對細胞生(sheng)長的(de)影響

　　由(you)於(yu)，大(da)多數細胞適宜(yi)pH為(wei)7.2~7.4，偏(pian)離(li)此範圍(wei)對細胞將產(chan)生(sheng)有害的(de)影響。各(ge)種(zhong)細(xi)胞對pH的(de)要(yao)求也(ye)不*相同(tong)，原代培(pei)養細(xi)胞壹般(ban)對pH變動耐(nai)受差(cha)，無(wu)限(xian)細(xi)胞系耐(nai)受力(li)強。

　　但總體(ti)來(lai)說(shuo)，細(xi)胞耐(nai)酸性(xing)比(bi)耐(nai)堿性(xing)強壹(yi)些(xie)，偏酸環境中(zhong)更(geng)利(li)於(yu)細胞生(sheng)長。因此(ci)，我們在配制(zhi)培養(yang)用液(ye)時(shi)，可(ke)把(ba)液(ye)體(ti)的(de)pH稍(shao)微調得偏(pian)酸(suan)壹些(xie)。液(ye)體(ti)在經過(guo)0.10um或0.22um濾膜(mo)過(guo)濾時(shi)，溶(rong)液(ye)的(de)pH還(hai)會(hui)向上(shang)浮動0.2左右(you)。

　　人口(kou)腔上(shang)皮癌細(xi)胞質量可(ke)靠(kao)，售(shou)後有保障（編輯(ji)：tanxi）