人(ren)淋(lin)巴(ba)成纖(xian)維(wei)細(xi)胞_培(pei)養指(zhi)南

非(fei)常讓(rang)人(ren)著迷(mi)的實(shi)驗(yan)，其(qi)成功關(guan)鍵之(zhi)壹是選擇可(ke)信(xin)的實(shi)驗(yan)試劑(ji)。

我(wo)司細(xi)胞(bao)近3000種(zhong)，來(lai)源於(yu)美(mei)國(guo)ATCC,細胞(bao)都是經過嚴(yan)格質(zhi)量控(kong)制(zhi)，在中國(guo)大陸(lu)努(nu)力(li)搭(da)建正(zheng)牌(pai)細(xi)胞與國(guo)內廣(guang)大科研(yan)人(ren)員(yuan)之(zhi)間(jian)的溝通橋(qiao)梁。為(wei)您提供人淋(lin)巴(ba)成纖(xian)維(wei)細(xi)胞外(wai)，還有(you)更(geng)多(duo)相關(guan)實(shi)驗(yan)產(chan)品(pin)，標(biao)準品(pin)，細(xi)胞株(zhu)和實(shi)驗(yan)技術服務(wu)等(deng)等(deng)前期後(hou)續(xu)服務(wu)。

人(ren)淋(lin)巴(ba)成纖(xian)維(wei)細(xi)胞的產(chan)品(pin)介紹(shao)

人(ren)淋巴(ba)成纖(xian)維(wei)細(xi)胞由(you)我(wo)司*銷(xiao)售人(ren)淋(lin)巴(ba)成纖(xian)維(wei)細(xi)胞。

人(ren)淋巴(ba)成纖(xian)維(wei)細(xi)胞細(xi)胞株(zhu)

　　Q1. 人淋(lin)巴(ba)成纖(xian)維(wei)細(xi)胞液(ye)體培(pei)養基的保存是(shi)冷(leng)藏(zang)好？還(hai)是(shi)冷(leng)凍好(hao)？

　　要(yao)冷(leng)藏(zang)！！因為(wei)液(ye)體培(pei)養基經冷(leng)凍後(hou)再(zai)經溶化時(shi)，其(qi)溶液(ye)的pH值會(hui)發(fa)生改變(bian)，溶液(ye)往(wang)往(wang)變(bian)堿，某些(xie)成分溶解也會(hui)受(shou)到(dao)影響(xiang)對(dui)細胞生長(chang)不利。故液(ye)體培(pei)養基壹定(ding)要存(cun)放(fang)在冷(leng)藏(zang)箱(xiang)中，通常(chang)液(ye)體培(pei)養基在冷(leng)藏(zang)條(tiao)件(jian)下(xia)可(ke)存(cun)放(fang)6個(ge)月(yue) ~ 壹年。

　　Q2.人淋巴(ba)成纖(xian)維(wei)細(xi)胞 液(ye)體培(pei)養基中谷(gu)氨(an)酰胺的作用，及使(shi)用方(fang)法。

　　幾乎所(suo)有(you)的細胞對谷(gu)氨(an)酰胺有(you)較高(gao)的要求，細胞需要(yao)谷(gu)氨(an)酰胺合(he)成蛋白質(zhi)，在缺少(shao)谷(gu)氨(an)酰胺時(shi)，細(xi)胞生長不良而(er)死(si)亡(wang)。所以(yi)，各(ge)種培(pei)養液(ye)中都含有較(jiao)大(da)量(liang)的谷(gu)氨(an)酰胺。谷(gu)氨(an)酰胺在溶液(ye)中很不穩定(ding)，應置(zhi)-20 ?C冰(bing)凍保存，用前加(jia)入培養(yang)基中。加(jia)有谷(gu)氨(an)酰胺的液(ye)體培(pei)養基4 ?C 冰箱(xiang)儲(chu)存(cun)兩(liang)周以上時(shi)，應重(zhong)新加(jia)入原(yuan)來(lai)量的谷(gu)氨(an)酰胺。基(ji)礎醫學細胞(bao)中心(xin)在其服務(wu)項(xiang)目(mu)中配(pei)制(zhi)分裝了高(gao)濃度（100倍(bei)）的谷(gu)氨(an)酰胺溶液(ye)（1ml/支）。每(mei)支(zhi)1ml的谷(gu)氨(an)酰胺加(jia)到(dao)99ml*培養(yang)基(ji)中，其(qi)終(zhong)濃度(du)為(wei)2mM/ml培養基。包裝為(wei)粉紅色，-24?C保存。

　　Q3.細(xi)胞計(ji)數(shu)及(ji)存(cun)活測(ce)試
1、原(yuan)理：
(1)計(ji)算(suan)細(xi)胞(bao)數(shu)目(mu)可(ke)用血(xue)球(qiu)計(ji)數盤(pan)或是(shi)Coultercounter粒(li)子計(ji)數器(qi)自(zi)動計(ji)數。
(2)血(xue)球(qiu)計(ji)數盤(pan)壹(yi)般(ban)有(you)二個(ge)chambers，每(mei)個(ge)chamber中細(xi)刻(ke)9個(ge)1mm2大(da)正方(fang)形，其(qi)中4個(ge)角落之(zhi)正方(fang)形再(zai)細(xi)刻(ke)16個(ge)小(xiao)格，深度均為(wei)0.1mm。當chamber上方(fang)蓋(gai)上(shang)蓋(gai)玻片後(hou)，每(mei)個(ge)大(da)正方(fang)形之(zhi)體積為(wei)1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使(shi)用時(shi)，計(ji)數每個(ge)大(da)正方(fang)形內(nei)之(zhi)細胞數目(mu)，乘(cheng)以(yi)稀釋倍(bei)數(shu)，再(zai)乘(cheng)以(yi)104，即(ji)為(wei)每ml中之(zhi)細胞數目(mu)。
(3)存(cun)活(huo)測(ce)試之(zhi)步驟為(wei)dyeexclusion，利用染(ran)料(liao)會(hui)滲(shen)入死(si)細(xi)胞中而(er)呈色，而(er)活(huo)細(xi)胞(bao)因細胞膜完整，染(ran)料(liao)無(wu)法(fa)滲入而(er)不會(hui)呈色。壹(yi)般(ban)使(shi)用藍色之(zhi)trypan blue染(ran)料(liao)，如果細(xi)胞(bao)不易吸收trypan blue，則(ze)用紅色之(zhi)Erythrosin bluish。計算細胞活率：活(huo)細胞數/(活細胞(bao)數+死(si)細(xi)胞數(shu))×100%。計數(shu)應在臺盼(pan)蘭(lan)染(ran)色(se)後(hou)數(shu)分鐘(zhong)內完成，隨時(shi)間(jian)延長，部(bu)分活(huo)細胞也開始(shi)攝(she)取染(ran)料(liao);因(yin)為(wei)臺盼蘭(lan)對蛋白質(zhi)有很強的親和(he)力(li)，用不含血(xue)清(qing)的稀釋液(ye)，可(ke)以(yi)使(shi)染(ran)色(se)計(ji)數(shu)更(geng)為(wei)準確。

　　Q4.細(xi)胞特(te)性
在細胞(bao)培養(yang)之(zhi)前，我(wo)們(men)要了解壹(yi)下(xia)妳所(suo)要養(yang)細胞的基本特性(xing)，這(zhe)點可(ke)以(yi)從(cong)細(xi)胞(bao)的產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)或者(zhe)從(cong)ATCC細(xi)胞(bao)庫(ku)查詢(xun)。除此(ci)之(zhi)外我(wo)們(men)還要知道每管(guan)細(xi)胞的數量，建議分裂(lie)或傳(chuan)代的比例(li)，和(he)已(yi)知細(xi)胞(bao)的傳(chuan)代代次等(deng)信息。

　　Q5.準備培(pei)養(yang)基(ji)
復蘇細胞時(shi)需要(yao)準備合(he)適的培養基，血(xue)清(qing)和細(xi)胞生(sheng)長所需的添加(jia)劑(ji)。大(da)部(bu)分培(pei)養細胞所用的培養體系(xi)，可(ke)以(yi)在訂購(gou)細胞(bao)系(xi)時(shi)獲(huo)得(de)。
雖然大多數(shu)細(xi)胞(bao)系(xi)可(ke)以(yi)在不止壹(yi)種(zhong)培養基(ji)中生(sheng)長(chang)，但是(shi)當培養基改變(bian)時(shi)，細(xi)胞的性質(zhi)也會(hui)變(bian)化。因此(ci)，使(shi)用細胞庫推(tui)薦的培養基來(lai)培養細(xi)胞會(hui)獲(huo)得(de)的效果。

　　Q6.開啟(qi)凍存(cun)管(guan)
1.準(zhun)備壹(yi)個(ge)培(pei)養瓶，加(jia)入適宜(yi)細胞(bao)培養的培養基，液(ye)體體積按(an)照說(shuo)明(ming)書(shu)的推(tui)薦配(pei)置(zhi)，並(bing)平(ping)衡(heng)培養(yang)基的溫度和pH（CO2）。　
2.在37℃水浴(yu)中或細(xi)胞的正常生長溫度(du)下(xia)將凍存(cun)管(guan)輕(qing)輕(qing)搖動。解凍要(yao)快(kuai)，約(yue)2分(fen)鐘(zhong)或直到(dao)冰晶(jing)融化即(ji)可(ke)。
3.從(cong)水浴(yu)中取(qu)出(chu)凍存(cun)管(guan)並(bing)用浸泡或噴灑70%乙(yi)醇(chun)的方(fang)式(shi)來(lai)消毒(du)。進(jin)壹步(bu)的操作均需在無菌(jun)操作臺中嚴(yan)格無菌(jun)條(tiao)件(jian)下(xia)進(jin)行。
4.擰(ning)開(kai)凍存(cun)管(guan)的管帽並(bing)將內(nei)容物轉移(yi)到(dao)壹個(ge)含(han)有9 ml推(tui)薦培(pei)養(yang)基(ji)的無菌離心(xin)管(guan)中。通過溫和(he)離心(xin)（125×g 10 min）除去冷(leng)凍保護劑(ji)（DMSO）。棄(qi)去上清(qing)，並(bing)用1或2 ml*培(pei)養基(ji)重(zhong)懸細(xi)胞(bao)。將這(zhe)些(xie)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)轉移(yi)到(dao)含有(you)*培(pei)養(yang)基的培養瓶中並(bing)輕(qing)輕(qing)搖(yao)動(dong)以*混(hun)勻。
5.培養(yang)24小時(shi)後(hou)檢(jian)查細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)並(bing)在需要(yao)時(shi)進(jin)行傳(chuan)代。

　　Q7. 人淋巴(ba)成纖(xian)維(wei)細(xi)胞 培(pei)養用液(ye)pH對細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)的影響(xiang)

　　由(you)於(yu)，大(da)多數細胞(bao)適宜(yi)pH為(wei)7.2~7.4，偏(pian)離此(ci)範圍(wei)對(dui)細胞將產(chan)生有(you)害的影響(xiang)。各(ge)種細(xi)胞對pH的要求也不*相同(tong)，原(yuan)代培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)壹(yi)般(ban)對(dui)pH變(bian)動耐(nai)受差，無限細胞系(xi)耐(nai)受力(li)強。

　　但(dan)總(zong)體來(lai)說(shuo)，細(xi)胞(bao)耐(nai)酸性比耐(nai)堿性強壹(yi)些(xie)，偏(pian)酸(suan)環(huan)境(jing)中更(geng)利(li)於(yu)細(xi)胞生長。因(yin)此(ci)，我(wo)們(men)在配制(zhi)培養(yang)用液(ye)時(shi)，可(ke)把液(ye)體的pH稍微(wei)調得(de)偏(pian)酸(suan)壹(yi)些(xie)。液(ye)體在經過0.10um或0.22um濾(lv)膜過濾時(shi)，溶液(ye)的pH還會(hui)向(xiang)上浮動0.2左右。

　　人(ren)淋(lin)巴(ba)成纖(xian)維(wei)細(xi)胞質(zhi)量可(ke)靠(kao)，售(shou)後(hou)有保障（編輯：tanxi）