人淋(lin)巴管(guan)成(cheng)纖維細胞(bao)_培(pei)養(yang)指(zhi)南(nan)

非常讓(rang)人著迷(mi)的(de)實驗(yan)，其(qi)成功關(guan)鍵之(zhi)壹(yi)是選(xuan)擇可信的(de)實驗(yan)試(shi)劑。

我司(si)細胞(bao)近(jin)3000種，來源於美(mei)國(guo)ATCC,細胞(bao)都(dou)是經(jing)過嚴(yan)格(ge)質量(liang)控制，在(zai)中國(guo)大(da)陸努力搭建(jian)正(zheng)牌細胞(bao)與(yu)國(guo)內(nei)廣大(da)科研(yan)人(ren)員(yuan)之(zhi)間(jian)的(de)溝通橋(qiao)梁(liang)。為(wei)您提(ti)供(gong)人淋(lin)巴管(guan)成(cheng)纖維細胞(bao)外，還有(you)更多(duo)相關(guan)實驗(yan)產品，標準品，細胞(bao)株(zhu)和(he)實驗(yan)技術(shu)服(fu)務等(deng)等(deng)前期後續(xu)服(fu)務。

人淋(lin)巴管(guan)成(cheng)纖維細胞(bao)的(de)產品介紹(shao)

人(ren)淋(lin)巴管(guan)成(cheng)纖維細胞(bao)由(you)我司(si)*銷(xiao)售人淋(lin)巴管(guan)成(cheng)纖維細胞(bao)。

人淋(lin)巴管(guan)成(cheng)纖維細胞(bao)細胞(bao)株(zhu)

　　Q1. 人淋(lin)巴管(guan)成(cheng)纖維細胞(bao)液(ye)體培(pei)養(yang)基(ji)的(de)保存是冷(leng)藏(zang)好(hao)？還(hai)是冷(leng)凍(dong)好(hao)？

　　要(yao)冷(leng)藏(zang)！！因(yin)為(wei)液(ye)體培(pei)養(yang)基(ji)經(jing)冷(leng)凍(dong)後再(zai)經(jing)溶(rong)化(hua)時，其(qi)溶(rong)液(ye)的(de)pH值會發(fa)生(sheng)改(gai)變(bian)，溶(rong)液(ye)往往(wang)變堿，某(mou)些成(cheng)分(fen)溶(rong)解也(ye)會受(shou)到(dao)影(ying)響對細胞(bao)生(sheng)長不(bu)利(li)。故(gu)液(ye)體培(pei)養(yang)基(ji)壹(yi)定(ding)要(yao)存放(fang)在(zai)冷(leng)藏(zang)箱(xiang)中，通常液(ye)體培(pei)養(yang)基(ji)在(zai)冷(leng)藏(zang)條(tiao)件下(xia)可存放(fang)6個月 ~ 壹年(nian)。

　　Q2.人淋(lin)巴管(guan)成(cheng)纖維細胞(bao) 液(ye)體培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)谷氨酰胺(an)的(de)作用(yong)，及(ji)使(shi)用方法。

　　幾乎所(suo)有(you)的(de)細胞(bao)對谷氨酰胺(an)有(you)較高(gao)的(de)要(yao)求(qiu)，細胞(bao)需(xu)要(yao)谷氨酰胺(an)合(he)成蛋白(bai)質(zhi)，在(zai)缺少谷氨酰胺(an)時(shi)，細胞(bao)生(sheng)長不(bu)良(liang)而(er)死亡。所(suo)以(yi)，各種培(pei)養(yang)液(ye)中都(dou)含有(you)較大(da)量的(de)谷氨酰胺(an)。谷氨酰胺(an)在(zai)溶(rong)液(ye)中很(hen)不(bu)穩(wen)定(ding)，應(ying)置(zhi)-20 ?C冰凍(dong)保(bao)存，用前(qian)加(jia)入培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)。加(jia)有(you)谷氨酰胺(an)的(de)液(ye)體培(pei)養(yang)基(ji)4 ?C 冰箱(xiang)儲(chu)存兩周(zhou)以上時，應(ying)重新加(jia)入原(yuan)來(lai)量(liang)的(de)谷氨酰胺(an)。基(ji)礎(chu)醫(yi)學細胞(bao)中(zhong)心在(zai)其(qi)服務項目(mu)中(zhong)配(pei)制(zhi)分(fen)裝了(le)高濃(nong)度(du)（100倍(bei)）的(de)谷氨酰胺(an)溶(rong)液(ye)（1ml/支）。每支1ml的(de)谷氨酰胺(an)加(jia)到(dao)99ml*培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)，其(qi)終濃(nong)度(du)為(wei)2mM/ml培(pei)養(yang)基(ji)。包(bao)裝(zhuang)為(wei)粉紅(hong)色(se)，-24?C保存。

　　Q3.細胞(bao)計(ji)數(shu)及存活測(ce)試(shi)
1、原(yuan)理(li)：
(1)計(ji)算(suan)細胞(bao)數(shu)目(mu)可用(yong)血球(qiu)計數(shu)盤或(huo)是Coultercounter粒(li)子(zi)計數(shu)器(qi)自動計數(shu)。
(2)血球(qiu)計數(shu)盤壹(yi)般有(you)二個(ge)chambers，每個(ge)chamber中(zhong)細刻(ke)9個1mm2大(da)正方形(xing)，其(qi)中4個角(jiao)落(luo)之(zhi)正(zheng)方形(xing)再(zai)細刻(ke)16個小(xiao)格(ge)，深(shen)度均為0.1mm。當chamber上方蓋上蓋玻片(pian)後，每個(ge)大(da)正方形(xing)之(zhi)體積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用時(shi)，計(ji)數(shu)每個(ge)大(da)正方形(xing)內(nei)之(zhi)細胞(bao)數(shu)目(mu)，乘(cheng)以(yi)稀釋(shi)倍(bei)數(shu)，再乘(cheng)以104，即(ji)為(wei)每ml中(zhong)之(zhi)細胞(bao)數(shu)目(mu)。
(3)存活測(ce)試(shi)之(zhi)步(bu)驟為(wei)dyeexclusion，利用(yong)染(ran)料會滲入死細胞(bao)中(zhong)而呈色(se)，而活細胞(bao)因(yin)細胞(bao)膜完整(zheng)，染(ran)料無(wu)法滲入而不(bu)會呈色(se)。壹般使(shi)用藍色(se)之(zhi)trypan blue染(ran)料，如(ru)果細胞(bao)不(bu)易(yi)吸(xi)收trypan blue，則(ze)用紅色(se)之(zhi)Erythrosin bluish。計(ji)算細胞(bao)活率(lv)：活細胞(bao)數(shu)/(活細胞(bao)數(shu)+死細胞(bao)數(shu))×100%。計數(shu)應(ying)在(zai)臺(tai)盼(pan)蘭染(ran)色(se)後數(shu)分(fen)鐘內(nei)完成，隨(sui)時間(jian)延長，部(bu)分(fen)活細胞(bao)也(ye)開(kai)始攝取(qu)染(ran)料;因(yin)為臺(tai)盼(pan)蘭對蛋白(bai)質(zhi)有(you)很強(qiang)的(de)親和(he)力，用(yong)不(bu)含(han)血清(qing)的(de)稀釋(shi)液(ye)，可以(yi)使染(ran)色(se)計數(shu)更為(wei)準確(que)。

　　Q4.細胞(bao)特性
在(zai)細胞(bao)培(pei)養(yang)之(zhi)前(qian)，我們(men)要(yao)了(le)解壹下(xia)妳(ni)所(suo)要(yao)養(yang)細胞(bao)的(de)基(ji)本(ben)特性，這(zhe)點可以(yi)從細胞(bao)的(de)產品說(shuo)明(ming)書(shu)或(huo)者(zhe)從ATCC細胞(bao)庫(ku)查詢。除(chu)此之(zhi)外我們(men)還(hai)要(yao)知道(dao)每管(guan)細胞(bao)的(de)數(shu)量，建(jian)議(yi)分(fen)裂或(huo)傳(chuan)代的(de)比例(li)，和(he)已知細胞(bao)的(de)傳(chuan)代代(dai)次等(deng)信息(xi)。

　　Q5.準備(bei)培(pei)養(yang)基(ji)
復(fu)蘇細胞(bao)時(shi)需要(yao)準備(bei)合(he)適的(de)培(pei)養(yang)基(ji)，血清(qing)和(he)細胞(bao)生(sheng)長所(suo)需(xu)的(de)添加劑。大(da)部分(fen)培(pei)養(yang)細胞(bao)所(suo)用(yong)的(de)培(pei)養(yang)體系(xi)，可以(yi)在(zai)訂(ding)購細胞(bao)系(xi)時獲得。
雖(sui)然(ran)大(da)多數(shu)細胞(bao)系(xi)可以(yi)在(zai)不(bu)止(zhi)壹(yi)種培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)生(sheng)長，但(dan)是當培(pei)養(yang)基(ji)改(gai)變(bian)時，細胞(bao)的(de)性質也(ye)會變化(hua)。因此(ci)，使(shi)用細胞(bao)庫(ku)推(tui)薦的(de)培(pei)養(yang)基(ji)來(lai)培(pei)養(yang)細胞(bao)會獲得的(de)效果。

　　Q6.開(kai)啟凍存管(guan)
1.準備(bei)壹(yi)個培(pei)養(yang)瓶(ping)，加(jia)入適宜(yi)細胞(bao)培(pei)養(yang)的(de)培(pei)養(yang)基(ji)，液(ye)體體積按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)的(de)推(tui)薦配置(zhi)，並平衡(heng)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)溫度和(he)pH（CO2）。　
2.在(zai)37℃水浴中或(huo)細胞(bao)的(de)正常生(sheng)長溫度下(xia)將(jiang)凍(dong)存管(guan)輕(qing)輕(qing)搖(yao)動。解凍(dong)要(yao)快(kuai)，約2分(fen)鐘或(huo)直(zhi)到(dao)冰晶(jing)融(rong)化(hua)即(ji)可。
3.從水浴中取(qu)出凍存管(guan)並(bing)用浸泡或(huo)噴(pen)灑70%乙醇(chun)的(de)方式(shi)來(lai)消(xiao)毒。進壹步(bu)的(de)操(cao)作均需在(zai)無菌操(cao)作臺(tai)中(zhong)嚴格無(wu)菌條件下(xia)進(jin)行(xing)。
4.擰(ning)開(kai)凍存管(guan)的(de)管(guan)帽(mao)並將(jiang)內(nei)容物轉移到(dao)壹(yi)個(ge)含(han)有(you)9 ml推(tui)薦培(pei)養(yang)基(ji)的(de)無菌(jun)離(li)心管(guan)中(zhong)。通過溫和(he)離(li)心（125×g 10 min）除(chu)去(qu)冷(leng)凍(dong)保(bao)護(hu)劑（DMSO）。棄去(qu)上清(qing)，並用(yong)1或(huo)2 ml*培(pei)養(yang)基(ji)重懸(xuan)細胞(bao)。將(jiang)這(zhe)些(xie)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)轉移到(dao)含(han)有(you)*培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)並(bing)輕(qing)輕(qing)搖(yao)動以*混勻(yun)。
5.培(pei)養(yang)24小(xiao)時(shi)後檢查細胞(bao)狀態並在(zai)需要(yao)時(shi)進行傳(chuan)代。

　　Q7. 人(ren)淋(lin)巴管(guan)成(cheng)纖維細胞(bao) 培(pei)養(yang)用(yong)液(ye)pH對細胞(bao)生(sheng)長的(de)影(ying)響

　　由(you)於(yu)，大(da)多數(shu)細胞(bao)適宜(yi)pH為7.2~7.4，偏(pian)離(li)此範(fan)圍(wei)對細胞(bao)將(jiang)產生(sheng)有(you)害(hai)的(de)影(ying)響。各(ge)種(zhong)細胞(bao)對pH的(de)要(yao)求(qiu)也(ye)不(bu)*相同(tong)，原(yuan)代(dai)培(pei)養(yang)細胞(bao)壹(yi)般對pH變(bian)動耐受(shou)差(cha)，無限細胞(bao)系(xi)耐受(shou)力(li)強。

　　但總(zong)體來(lai)說(shuo)，細胞(bao)耐(nai)酸性比耐堿性強壹些(xie)，偏(pian)酸(suan)環境中更(geng)利於(yu)細胞(bao)生(sheng)長。因(yin)此，我(wo)們(men)在(zai)配制培(pei)養(yang)用(yong)液(ye)時，可把(ba)液(ye)體的(de)pH稍(shao)微調(tiao)得偏(pian)酸(suan)壹(yi)些(xie)。液(ye)體在(zai)經(jing)過0.10um或(huo)0.22um濾(lv)膜過濾(lv)時(shi)，溶(rong)液(ye)的(de)pH還會向(xiang)上浮(fu)動0.2左(zuo)右(you)。

　　人淋(lin)巴管(guan)成(cheng)纖維細胞(bao)質(zhi)量可靠，售後有(you)保障(zhang)（編輯(ji)：tanxi）