人腦微(wei)血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細胞(bao)_培(pei)養指南

非常(chang)讓(rang)人(ren)著(zhe)迷(mi)的(de)實(shi)驗(yan)，其成(cheng)功關(guan)鍵(jian)之壹(yi)是選(xuan)擇(ze)可信的(de)實(shi)驗(yan)試劑(ji)。

我(wo)司(si)細胞(bao)近(jin)3000種，來源(yuan)於美(mei)國ATCC,細胞(bao)都(dou)是經(jing)過嚴格(ge)質量控制(zhi)，在(zai)中(zhong)國大(da)陸(lu)努(nu)力(li)搭(da)建正(zheng)牌細胞(bao)與(yu)國內(nei)廣(guang)大(da)科(ke)研(yan)人(ren)員之(zhi)間(jian)的溝通(tong)橋梁(liang)。為(wei)您(nin)提供人腦微(wei)血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細胞(bao)外(wai)，還有更(geng)多(duo)相關(guan)實(shi)驗(yan)產品，標準品，細胞(bao)株(zhu)和實(shi)驗(yan)技術(shu)服(fu)務(wu)等(deng)等(deng)前期後續服(fu)務(wu)。

人(ren)腦微(wei)血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細胞(bao)的(de)產品介紹

人腦微(wei)血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細胞(bao)由(you)我司(si)*銷售(shou)人腦微(wei)血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細胞(bao)。

人(ren)腦微(wei)血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細胞(bao)細胞(bao)株(zhu)

　　Q1. 人腦微(wei)血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細胞(bao)液(ye)體(ti)培(pei)養基的保存(cun)是冷(leng)藏(zang)好？還(hai)是冷(leng)凍好(hao)？

　　要冷藏(zang)！！因為(wei)液(ye)體(ti)培(pei)養基經冷凍後再經(jing)溶化時(shi)，其溶液(ye)的(de)pH值會(hui)發生改變，溶液(ye)往往變堿(jian)，某些(xie)成(cheng)分溶解也(ye)會(hui)受到(dao)影響(xiang)對細胞(bao)生(sheng)長不利(li)。故(gu)液(ye)體(ti)培(pei)養基壹(yi)定要存放(fang)在(zai)冷(leng)藏(zang)箱中(zhong)，通常(chang)液(ye)體(ti)培(pei)養基在冷藏(zang)條(tiao)件下(xia)可存(cun)放(fang)6個(ge)月(yue) ~ 壹(yi)年。

　　Q2.人(ren)腦微(wei)血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細胞(bao) 液(ye)體(ti)培(pei)養基中(zhong)谷氨(an)酰(xian)胺的(de)作用，及使(shi)用方法。

　　幾乎所有的(de)細胞(bao)對谷氨(an)酰胺(an)有較(jiao)高的要求，細胞(bao)需要谷氨(an)酰(xian)胺合(he)成蛋(dan)白(bai)質(zhi)，在缺(que)少谷(gu)氨酰胺時，細胞(bao)生(sheng)長不良而死亡。所以(yi)，各(ge)種培(pei)養液(ye)中(zhong)都含(han)有較(jiao)大(da)量(liang)的(de)谷(gu)氨(an)酰胺(an)。谷(gu)氨酰胺在(zai)溶液(ye)中(zhong)很不穩(wen)定(ding)，應(ying)置(zhi)-20 ?C冰(bing)凍(dong)保存(cun)，用前加入(ru)培(pei)養基中(zhong)。加有谷(gu)氨酰(xian)胺的(de)液(ye)體(ti)培(pei)養基4 ?C 冰箱儲存(cun)兩(liang)周(zhou)以上(shang)時，應(ying)重(zhong)新(xin)加入(ru)原來量(liang)的谷氨酰胺(an)。基(ji)礎醫學(xue)細胞(bao)中(zhong)心在(zai)其(qi)服(fu)務(wu)項目(mu)中(zhong)配(pei)制(zhi)分(fen)裝(zhuang)了高濃度（100倍）的(de)谷(gu)氨酰(xian)胺溶液(ye)（1ml/支(zhi)）。每(mei)支(zhi)1ml的(de)谷氨酰胺(an)加到(dao)99ml*培(pei)養基中(zhong)，其終(zhong)濃度為(wei)2mM/ml培(pei)養基。包裝(zhuang)為(wei)粉(fen)紅色，-24?C保存(cun)。

　　Q3.細胞(bao)計數及(ji)存(cun)活測(ce)試
1、原理：
(1)計算細胞(bao)數(shu)目可用血(xue)球(qiu)計數盤(pan)或是Coultercounter粒(li)子計數器自(zi)動(dong)計數。
(2)血(xue)球(qiu)計數盤(pan)壹(yi)般有二(er)個(ge)chambers，每(mei)個chamber中(zhong)細刻9個1mm2大(da)正(zheng)方形，其(qi)中(zhong)4個角落(luo)之(zhi)正(zheng)方形再(zai)細刻16個小(xiao)格(ge)，深(shen)度(du)均(jun)為(wei)0.1mm。當(dang)chamber上(shang)方蓋上(shang)蓋玻(bo)片後，每(mei)個大(da)正(zheng)方形之(zhi)體(ti)積為(wei)1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使(shi)用時，計數每(mei)個大(da)正(zheng)方形內(nei)之(zhi)細胞(bao)數(shu)目，乘以(yi)稀釋(shi)倍數(shu)，再(zai)乘以(yi)104，即為(wei)每(mei)ml中(zhong)之細胞(bao)數(shu)目。
(3)存活測(ce)試之(zhi)步(bu)驟為(wei)dyeexclusion，利(li)用染(ran)料(liao)會(hui)滲入(ru)死細胞(bao)中(zhong)而呈色，而活細胞(bao)因(yin)細胞(bao)膜(mo)完整，染(ran)料(liao)無法滲入(ru)而不會(hui)呈色。壹(yi)般使(shi)用藍色(se)之trypan blue染(ran)料(liao)，如(ru)果(guo)細胞(bao)不易(yi)吸(xi)收(shou)trypan blue，則用紅色(se)之Erythrosin bluish。計算細胞(bao)活(huo)率：活細胞(bao)數(shu)/(活細胞(bao)數(shu)+死細胞(bao)數(shu))×100%。計數應(ying)在(zai)臺(tai)盼(pan)蘭(lan)染(ran)色後數分(fen)鐘內(nei)完成，隨(sui)時間(jian)延長(chang)，部(bu)分(fen)活細胞(bao)也(ye)開(kai)始(shi)攝取染(ran)料(liao);因為(wei)臺(tai)盼(pan)蘭(lan)對蛋(dan)白(bai)質(zhi)有很強的親和力，用不含(han)血(xue)清(qing)的稀釋(shi)液(ye)，可以(yi)使(shi)染(ran)色計數更(geng)為(wei)準(zhun)確(que)。

　　Q4.細胞(bao)特(te)性
在細胞(bao)培(pei)養之前，我們(men)要了解(jie)壹(yi)下妳(ni)所要養細胞(bao)的(de)基本特性(xing)，這(zhe)點(dian)可以(yi)從(cong)細胞(bao)的(de)產品說(shuo)明(ming)書(shu)或者從ATCC細胞(bao)庫(ku)查詢。除此(ci)之(zhi)外(wai)我們(men)還要知(zhi)道每(mei)管細胞(bao)的(de)數量，建議分(fen)裂或傳代的比(bi)例(li)，和已知(zhi)細胞(bao)的(de)傳代代次(ci)等(deng)信息(xi)。

　　Q5.準(zhun)備培(pei)養基
復蘇細胞(bao)時(shi)需要準備合(he)適的(de)培(pei)養基，血(xue)清(qing)和細胞(bao)生(sheng)長所需的(de)添加劑(ji)。大(da)部(bu)分(fen)培(pei)養細胞(bao)所用的培(pei)養體(ti)系(xi)，可以(yi)在(zai)訂購(gou)細胞(bao)系(xi)時獲得(de)。
雖(sui)然(ran)大(da)多(duo)數(shu)細胞(bao)系(xi)可以(yi)在(zai)不止壹(yi)種培(pei)養基中(zhong)生長(chang)，但(dan)是當(dang)培(pei)養基改變時(shi)，細胞(bao)的(de)性質也(ye)會(hui)變化(hua)。因(yin)此，使(shi)用細胞(bao)庫(ku)推薦的培(pei)養基來培(pei)養細胞(bao)會(hui)獲得(de)的(de)效(xiao)果(guo)。

　　Q6.開(kai)啟凍(dong)存(cun)管
1.準(zhun)備壹(yi)個培(pei)養瓶(ping)，加入(ru)適宜(yi)細胞(bao)培(pei)養的培(pei)養基，液(ye)體(ti)體(ti)積按照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)的推薦配(pei)置(zhi)，並平(ping)衡(heng)培(pei)養基的溫度和pH（CO2）。　
2.在37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)或細胞(bao)的(de)正常生長(chang)溫度下將(jiang)凍存管輕(qing)輕(qing)搖動(dong)。解凍(dong)要快，約(yue)2分鐘或直到(dao)冰晶(jing)融化即可。
3.從(cong)水(shui)浴(yu)中(zhong)取出(chu)凍(dong)存管(guan)並用浸泡(pao)或噴(pen)灑70%乙(yi)醇(chun)的方式來消(xiao)毒。進(jin)壹(yi)步的(de)操(cao)作均(jun)需在(zai)無菌操(cao)作臺(tai)中(zhong)嚴格(ge)無菌條(tiao)件下(xia)進(jin)行。
4.擰開(kai)凍(dong)存(cun)管(guan)的(de)管(guan)帽(mao)並將(jiang)內(nei)容(rong)物轉(zhuan)移到(dao)壹(yi)個含(han)有9 ml推(tui)薦培(pei)養基的無菌離心管(guan)中(zhong)。通過(guo)溫和離心（125×g 10 min）除(chu)去冷凍保護(hu)劑(ji)（DMSO）。棄(qi)去上(shang)清，並用1或2 ml*培(pei)養基重懸細胞(bao)。將(jiang)這些細胞(bao)懸液(ye)轉(zhuan)移到(dao)含(han)有*培(pei)養基的培(pei)養瓶(ping)中(zhong)並輕(qing)輕(qing)搖動(dong)以*混勻(yun)。
5.培(pei)養24小(xiao)時(shi)後檢查(zha)細胞(bao)狀(zhuang)態並在(zai)需要時進(jin)行傳(chuan)代。

　　Q7. 人腦微(wei)血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細胞(bao) 培(pei)養用液(ye)pH對細胞(bao)生(sheng)長的影響(xiang)

　　由於(yu)，大(da)多(duo)數(shu)細胞(bao)適宜(yi)pH為(wei)7.2~7.4，偏(pian)離此範(fan)圍對細胞(bao)將(jiang)產生有害(hai)的(de)影(ying)響(xiang)。各種細胞(bao)對pH的要求也(ye)不*相同，原代培(pei)養細胞(bao)壹(yi)般對pH變動(dong)耐受(shou)差(cha)，無限細胞(bao)系(xi)耐受(shou)力強。

　　但(dan)總(zong)體(ti)來說(shuo)，細胞(bao)耐酸(suan)性比耐堿(jian)性強壹(yi)些，偏(pian)酸環境(jing)中(zhong)更利(li)於(yu)細胞(bao)生(sheng)長。因此，我(wo)們(men)在(zai)配(pei)制(zhi)培(pei)養用液(ye)時(shi)，可把(ba)液(ye)體(ti)的(de)pH稍微(wei)調(tiao)得偏(pian)酸壹(yi)些。液(ye)體(ti)在(zai)經過0.10um或0.22um濾膜(mo)過濾(lv)時，溶液(ye)的(de)pH還會(hui)向上(shang)浮動(dong)0.2左右。

　　人腦微(wei)血(xue)管(guan)內(nei)皮(pi)細胞(bao)質(zhi)量可靠(kao)，售後有保障（編輯(ji)：tanxi）