人腦星(xing)形(xing)膠(jiao)質母(mu)細(xi)胞瘤(liu)細(xi)胞_復(fu)蘇的(de)

非常(chang)讓(rang)人著迷的實驗，其成功關鍵(jian)之壹(yi)是(shi)選(xuan)擇(ze)可信(xin)的實驗試(shi)劑(ji)。

我司細(xi)胞近(jin)3000種，來源(yuan)於美(mei)國ATCC,細(xi)胞都是(shi)經過嚴格(ge)質量(liang)控(kong)制，在(zai)中(zhong)國大(da)陸努力搭(da)建(jian)正(zheng)牌細(xi)胞與國內廣(guang)大科(ke)研人員(yuan)之(zhi)間(jian)的(de)溝(gou)通(tong)橋(qiao)梁。為您(nin)提供(gong)人腦星(xing)形(xing)膠(jiao)質母(mu)細(xi)胞瘤(liu)細(xi)胞外(wai)，還(hai)有(you)更(geng)多相關實驗產(chan)品(pin)，標準品(pin)，細(xi)胞株(zhu)和實驗技術服(fu)務(wu)等等前期(qi)後(hou)續(xu)服(fu)務(wu)。

人腦星(xing)形(xing)膠(jiao)質母(mu)細(xi)胞瘤(liu)細(xi)胞的產(chan)品(pin)介(jie)紹(shao)

人腦星(xing)形(xing)膠(jiao)質母(mu)細(xi)胞瘤(liu)細(xi)胞由我(wo)司*銷售人腦星(xing)形(xing)膠(jiao)質母(mu)細(xi)胞瘤(liu)細(xi)胞。

人腦星(xing)形(xing)膠(jiao)質母(mu)細(xi)胞瘤(liu)細(xi)胞細(xi)胞株(zhu)

　　Q1. 人腦星(xing)形(xing)膠(jiao)質母(mu)細(xi)胞瘤(liu)細(xi)胞液(ye)體(ti)培養基(ji)的(de)保存(cun)是冷(leng)藏(zang)好？還(hai)是冷凍(dong)好？

　　要冷藏！！因(yin)為(wei)液(ye)體(ti)培養基(ji)經(jing)冷凍(dong)後再(zai)經溶化時，其溶液(ye)的pH值(zhi)會發(fa)生改變，溶液(ye)往(wang)往(wang)變堿，某(mou)些(xie)成分溶解(jie)也(ye)會受(shou)到(dao)影響(xiang)對(dui)細(xi)胞生長(chang)不(bu)利。故液(ye)體(ti)培養基(ji)壹(yi)定(ding)要存(cun)放在(zai)冷(leng)藏(zang)箱(xiang)中(zhong)，通(tong)常(chang)液(ye)體(ti)培養基(ji)在(zai)冷(leng)藏(zang)條(tiao)件(jian)下可(ke)存(cun)放6個(ge)月(yue) ~ 壹(yi)年(nian)。

　　Q2.人腦星(xing)形(xing)膠(jiao)質母(mu)細(xi)胞瘤(liu)細(xi)胞 液(ye)體(ti)培養基(ji)中(zhong)谷(gu)氨酰(xian)胺(an)的(de)作用，及使(shi)用方(fang)法(fa)。

　　幾乎所有(you)的(de)細(xi)胞對谷(gu)氨酰(xian)胺(an)有(you)較(jiao)高的(de)要求，細(xi)胞需(xu)要谷(gu)氨酰(xian)胺(an)合(he)成蛋白質，在(zai)缺(que)少(shao)谷(gu)氨酰(xian)胺(an)時，細(xi)胞生長(chang)不(bu)良(liang)而死(si)亡(wang)。所以，各(ge)種(zhong)培養液(ye)中(zhong)都(dou)含(han)有(you)較(jiao)大(da)量(liang)的(de)谷(gu)氨酰(xian)胺(an)。谷(gu)氨酰(xian)胺(an)在(zai)溶液(ye)中(zhong)很(hen)不(bu)穩定(ding)，應置-20 ?C冰凍(dong)保存(cun)，用前加(jia)入(ru)培養基(ji)中(zhong)。加(jia)有(you)谷(gu)氨酰(xian)胺(an)的(de)液(ye)體(ti)培養基(ji)4 ?C 冰箱(xiang)儲(chu)存(cun)兩周以(yi)上時，應重新加(jia)入(ru)原來(lai)量的(de)谷(gu)氨酰(xian)胺(an)。基(ji)礎(chu)醫學細(xi)胞中(zhong)心(xin)在(zai)其(qi)服(fu)務(wu)項目中(zhong)配(pei)制分(fen)裝(zhuang)了(le)高濃(nong)度（100倍(bei)）的(de)谷(gu)氨酰(xian)胺(an)溶液(ye)（1ml/支）。每(mei)支(zhi)1ml的(de)谷(gu)氨酰(xian)胺(an)加(jia)到99ml*培養基(ji)中(zhong)，其(qi)終(zhong)濃(nong)度(du)為2mM/ml培養基(ji)。包(bao)裝(zhuang)為粉(fen)紅色(se)，-24?C保存(cun)。

　　Q3.細(xi)胞計數(shu)及存(cun)活測(ce)試(shi)
1、原(yuan)理：
(1)計(ji)算細(xi)胞數(shu)目(mu)可(ke)用血(xue)球(qiu)計數(shu)盤(pan)或(huo)是(shi)Coultercounter粒子(zi)計數(shu)器自(zi)動計數(shu)。
(2)血(xue)球(qiu)計(ji)數(shu)盤(pan)壹(yi)般(ban)有(you)二個chambers，每(mei)個(ge)chamber中(zhong)細(xi)刻9個1mm2大(da)正(zheng)方(fang)形(xing)，其(qi)中(zhong)4個(ge)角(jiao)落(luo)之正(zheng)方(fang)形(xing)再(zai)細(xi)刻16個小(xiao)格，深度(du)均為(wei)0.1mm。當chamber上方(fang)蓋上蓋玻片(pian)後，每(mei)個(ge)大(da)正(zheng)方(fang)形(xing)之(zhi)體(ti)積為(wei)1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使(shi)用時，計數(shu)每(mei)個(ge)大(da)正(zheng)方(fang)形(xing)內之細(xi)胞數(shu)目(mu)，乘以稀釋(shi)倍(bei)數(shu)，再(zai)乘以104，即為每(mei)ml中(zhong)之(zhi)細(xi)胞數(shu)目(mu)。
(3)存(cun)活測(ce)試(shi)之(zhi)步(bu)驟(zhou)為(wei)dyeexclusion，利用染(ran)料會滲(shen)入(ru)死細(xi)胞中(zhong)而(er)呈(cheng)色(se)，而活細(xi)胞因(yin)細(xi)胞膜完(wan)整，染(ran)料無法(fa)滲(shen)入(ru)而不(bu)會呈(cheng)色(se)。壹般使(shi)用藍(lan)色(se)之trypan blue染(ran)料，如果細(xi)胞不(bu)易吸收trypan blue，則(ze)用紅色(se)之Erythrosin bluish。計算細(xi)胞活率(lv)：活細(xi)胞數(shu)/(活(huo)細(xi)胞數(shu)+死(si)細(xi)胞數(shu))×100%。計(ji)數(shu)應在(zai)臺盼蘭(lan)染(ran)色(se)後數(shu)分(fen)鐘內完成(cheng)，隨(sui)時間(jian)延長，部(bu)分(fen)活(huo)細(xi)胞也開始攝(she)取染(ran)料;因(yin)為(wei)臺盼蘭(lan)對(dui)蛋(dan)白(bai)質有(you)很(hen)強(qiang)的親(qin)和力(li)，用不(bu)含血(xue)清(qing)的(de)稀釋(shi)液(ye)，可以(yi)使(shi)染(ran)色(se)計數(shu)更(geng)為(wei)準(zhun)確(que)。

　　Q4.細(xi)胞特性(xing)
在(zai)細(xi)胞培養之前，我們(men)要了(le)解(jie)壹(yi)下妳(ni)所要養細(xi)胞的基(ji)本(ben)特(te)性(xing)，這(zhe)點可以從細(xi)胞的產(chan)品(pin)說明書(shu)或(huo)者(zhe)從ATCC細(xi)胞庫(ku)查(zha)詢(xun)。除(chu)此(ci)之(zhi)外(wai)我(wo)們(men)還(hai)要知(zhi)道每(mei)管細(xi)胞的數(shu)量(liang)，建(jian)議(yi)分裂(lie)或傳(chuan)代的比(bi)例(li)，和已知(zhi)細(xi)胞的傳(chuan)代代次(ci)等信(xin)息。

　　Q5.準(zhun)備(bei)培(pei)養基(ji)
復(fu)蘇細(xi)胞時需(xu)要準備合適(shi)的(de)培(pei)養基(ji)，血(xue)清(qing)和細(xi)胞生長(chang)所需(xu)的(de)添(tian)加(jia)劑。大部(bu)分(fen)培(pei)養細(xi)胞所用的(de)培(pei)養體(ti)系，可(ke)以(yi)在(zai)訂(ding)購細(xi)胞系時獲得(de)。
雖然大多數(shu)細(xi)胞系可(ke)以在(zai)不(bu)止壹種培(pei)養基(ji)中(zhong)生長(chang)，但是當(dang)培(pei)養基(ji)改變時，細(xi)胞的性(xing)質也會變化(hua)。因(yin)此(ci)，使(shi)用細(xi)胞庫(ku)推薦(jian)的(de)培養基(ji)來(lai)培養細(xi)胞會獲(huo)得(de)的效果。

　　Q6.開啟凍(dong)存(cun)管
1.準(zhun)備(bei)壹個培養瓶(ping)，加(jia)入(ru)適宜(yi)細(xi)胞培養的培養基(ji)，液(ye)體(ti)體(ti)積按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)的(de)推薦(jian)配(pei)置，並平衡培(pei)養基(ji)的(de)溫度(du)和pH（CO2）。　
2.在(zai)37℃水浴(yu)中(zhong)或(huo)細(xi)胞的正(zheng)常生長(chang)溫度(du)下將凍(dong)存(cun)管輕輕搖動。解(jie)凍(dong)要快，約(yue)2分(fen)鐘或(huo)直到(dao)冰晶融化即可(ke)。
3.從水浴(yu)中(zhong)取(qu)出(chu)凍(dong)存(cun)管並用浸(jin)泡(pao)或噴(pen)灑70%乙醇(chun)的方(fang)式來消毒(du)。進壹步(bu)的(de)操作均需(xu)在(zai)無(wu)菌(jun)操作臺中(zhong)嚴格(ge)無菌(jun)條(tiao)件(jian)下進(jin)行(xing)。
4.擰開凍(dong)存(cun)管的(de)管(guan)帽(mao)並將內容物(wu)轉(zhuan)移(yi)到壹(yi)個(ge)含(han)有(you)9 ml推薦(jian)培(pei)養基(ji)的(de)無菌(jun)離(li)心(xin)管中(zhong)。通(tong)過(guo)溫和離(li)心(xin)（125×g 10 min）除去(qu)冷凍(dong)保護(hu)劑（DMSO）。棄(qi)去(qu)上清(qing)，並用1或(huo)2 ml*培(pei)養基(ji)重(zhong)懸細(xi)胞。將這(zhe)些(xie)細(xi)胞懸液(ye)轉移(yi)到含(han)有(you)*培(pei)養基(ji)的(de)培養瓶(ping)中(zhong)並輕輕搖動以*混(hun)勻(yun)。
5.培養24小時後檢(jian)查(zha)細(xi)胞狀態並在(zai)需(xu)要時進行(xing)傳代(dai)。

　　Q7. 人腦星(xing)形(xing)膠(jiao)質母(mu)細(xi)胞瘤(liu)細(xi)胞 培養用液(ye)pH對細(xi)胞生長(chang)的(de)影響(xiang)

　　由於，大多數(shu)細(xi)胞適宜(yi)pH為(wei)7.2~7.4，偏(pian)離(li)此(ci)範(fan)圍(wei)對(dui)細(xi)胞將產(chan)生有(you)害(hai)的(de)影響。各(ge)種(zhong)細(xi)胞對pH的(de)要求也不(bu)*相同(tong)，原代(dai)培養細(xi)胞壹般(ban)對pH變動耐受(shou)差(cha)，無限細(xi)胞系耐(nai)受(shou)力(li)強。

　　但總體(ti)來說(shuo)，細(xi)胞耐酸(suan)性(xing)比(bi)耐(nai)堿性(xing)強(qiang)壹些(xie)，偏酸(suan)環(huan)境中(zhong)更(geng)利於細(xi)胞生長(chang)。因(yin)此(ci)，我(wo)們在(zai)配(pei)制培(pei)養用液(ye)時，可把液(ye)體(ti)的pH稍(shao)微調(tiao)得(de)偏酸(suan)壹(yi)些(xie)。液(ye)體(ti)在(zai)經(jing)過(guo)0.10um或(huo)0.22um濾膜過濾(lv)時，溶液(ye)的pH還(hai)會向(xiang)上浮(fu)動0.2左右(you)。

　　人腦星(xing)形(xing)膠(jiao)質母(mu)細(xi)胞瘤(liu)細(xi)胞質量(liang)可靠(kao)，售後(hou)有(you)保(bao)障(zhang)（編輯：tanxi）