人(ren)腦(nao)血(xue)管(guan)平滑(hua)肌(ji)細(xi)胞_培(pei)養指南

非常(chang)讓人(ren)著迷(mi)的(de)實(shi)驗(yan)，其成功(gong)關鍵(jian)之(zhi)壹(yi)是選(xuan)擇可(ke)信的(de)實(shi)驗(yan)試劑。

我司(si)細(xi)胞近(jin)3000種(zhong)，來源於美國ATCC,細(xi)胞都是(shi)經過(guo)嚴(yan)格(ge)質量控制(zhi)，在(zai)中(zhong)國大陸(lu)努力搭建(jian)正(zheng)牌細(xi)胞與(yu)國內(nei)廣大科(ke)研人(ren)員(yuan)之(zhi)間(jian)的(de)溝(gou)通(tong)橋(qiao)梁(liang)。為(wei)您(nin)提供(gong)人(ren)腦(nao)血(xue)管(guan)平滑(hua)肌(ji)細(xi)胞外，還有(you)更多(duo)相(xiang)關實驗(yan)產(chan)品，標(biao)準(zhun)品，細(xi)胞株(zhu)和實驗(yan)技術服(fu)務(wu)等(deng)等(deng)前(qian)期後(hou)續服(fu)務。

人(ren)腦(nao)血(xue)管(guan)平滑(hua)肌(ji)細(xi)胞的(de)產(chan)品介(jie)紹(shao)

人(ren)腦(nao)血(xue)管(guan)平滑(hua)肌(ji)細(xi)胞由(you)我(wo)司(si)*銷(xiao)售人(ren)腦(nao)血(xue)管(guan)平滑(hua)肌(ji)細(xi)胞。

人(ren)腦(nao)血(xue)管(guan)平滑(hua)肌(ji)細(xi)胞細(xi)胞株(zhu)

　　Q1. 人(ren)腦(nao)血(xue)管(guan)平滑(hua)肌(ji)細(xi)胞液(ye)體培(pei)養基的保存(cun)是冷藏好(hao)？還是冷凍好(hao)？

　　要冷藏！！因(yin)為(wei)液體培(pei)養基經冷凍後再經溶(rong)化時，其溶(rong)液的(de)pH值會(hui)發(fa)生(sheng)改變(bian)，溶(rong)液往(wang)往(wang)變堿(jian)，某(mou)些(xie)成分(fen)溶(rong)解(jie)也會(hui)受(shou)到影響(xiang)對細(xi)胞生(sheng)長不利。故(gu)液(ye)體培(pei)養基壹(yi)定要存放(fang)在冷藏箱(xiang)中(zhong)，通(tong)常(chang)液(ye)體培(pei)養基在冷藏條件(jian)下(xia)可存(cun)放6個(ge)月(yue) ~ 壹(yi)年。

　　Q2.人(ren)腦(nao)血(xue)管(guan)平滑(hua)肌(ji)細(xi)胞 液(ye)體培(pei)養基中谷氨(an)酰(xian)胺(an)的作用(yong)，及使用方(fang)法(fa)。

　　幾(ji)乎所有(you)的細(xi)胞對(dui)谷(gu)氨(an)酰胺有(you)較高(gao)的(de)要求，細(xi)胞需(xu)要谷氨(an)酰胺(an)合(he)成蛋(dan)白(bai)質，在缺少谷(gu)氨(an)酰胺(an)時，細(xi)胞生(sheng)長不良(liang)而(er)死(si)亡(wang)。所以，各(ge)種(zhong)培(pei)養液中都含(han)有(you)較大量的谷(gu)氨酰(xian)胺(an)。谷(gu)氨(an)酰胺(an)在溶(rong)液中(zhong)很(hen)不穩(wen)定(ding)，應置-20 ?C冰(bing)凍(dong)保存(cun)，用前(qian)加入(ru)培(pei)養基中。加有(you)谷氨(an)酰(xian)胺(an)的液體培(pei)養基4 ?C 冰箱(xiang)儲(chu)存(cun)兩(liang)周以上(shang)時，應重新(xin)加(jia)入原來量的谷(gu)氨酰(xian)胺(an)。基(ji)礎(chu)醫(yi)學(xue)細(xi)胞中(zhong)心在其服務(wu)項(xiang)目(mu)中(zhong)配(pei)制(zhi)分(fen)裝了高濃度（100倍）的谷(gu)氨酰胺(an)溶(rong)液（1ml/支(zhi)）。每(mei)支1ml的谷氨(an)酰胺(an)加到(dao)99ml*培(pei)養基中，其終濃度為(wei)2mM/ml培(pei)養基。包裝為(wei)粉(fen)紅(hong)色，-24?C保存(cun)。

　　Q3.細(xi)胞計(ji)數(shu)及存活測(ce)試
1、原理(li)：
(1)計(ji)算(suan)細(xi)胞數(shu)目(mu)可(ke)用血球(qiu)計(ji)數(shu)盤(pan)或(huo)是(shi)Coultercounter粒(li)子(zi)計(ji)數(shu)器(qi)自(zi)動計(ji)數(shu)。
(2)血球(qiu)計(ji)數(shu)盤(pan)壹(yi)般有(you)二個chambers，每(mei)個chamber中細(xi)刻(ke)9個(ge)1mm2大正(zheng)方(fang)形，其中4個(ge)角(jiao)落之(zhi)正(zheng)方(fang)形再細(xi)刻(ke)16個(ge)小格(ge)，深度(du)均為(wei)0.1mm。當(dang)chamber上方(fang)蓋(gai)上蓋(gai)玻(bo)片(pian)後，每(mei)個大正(zheng)方(fang)形之(zhi)體積為(wei)1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用(yong)時，計(ji)數(shu)每(mei)個大正(zheng)方(fang)形內(nei)之(zhi)細(xi)胞數(shu)目(mu)，乘(cheng)以稀釋(shi)倍(bei)數，再乘(cheng)以(yi)104，即為(wei)每(mei)ml中之(zhi)細(xi)胞數(shu)目(mu)。
(3)存(cun)活測(ce)試之(zhi)步(bu)驟為(wei)dyeexclusion，利用(yong)染(ran)料會(hui)滲(shen)入(ru)死細(xi)胞中(zhong)而(er)呈(cheng)色，而活(huo)細(xi)胞因(yin)細(xi)胞膜(mo)完(wan)整(zheng)，染料無法(fa)滲(shen)入而不會(hui)呈(cheng)色。壹(yi)般使(shi)用藍(lan)色之(zhi)trypan blue染(ran)料(liao)，如果細(xi)胞不易吸收(shou)trypan blue，則用(yong)紅(hong)色之(zhi)Erythrosin bluish。計(ji)算(suan)細(xi)胞活(huo)率：活細(xi)胞數(shu)/(活(huo)細(xi)胞數(shu)+死(si)細(xi)胞數(shu))×100%。計(ji)數(shu)應在臺(tai)盼蘭染(ran)色後數(shu)分(fen)鐘(zhong)內(nei)完成，隨(sui)時間延長(chang)，部(bu)分(fen)活細(xi)胞也開始(shi)攝取(qu)染料(liao);因(yin)為(wei)臺盼蘭對(dui)蛋白(bai)質有(you)很(hen)強的(de)親和力，用不含(han)血(xue)清(qing)的(de)稀釋(shi)液(ye)，可以使染(ran)色計(ji)數(shu)更為(wei)準確(que)。

　　Q4.細(xi)胞特性
在細(xi)胞培(pei)養之(zhi)前(qian)，我們(men)要了解(jie)壹(yi)下(xia)妳(ni)所要養細(xi)胞的(de)基(ji)本特性，這點(dian)可(ke)以(yi)從(cong)細(xi)胞的(de)產(chan)品說(shuo)明(ming)書或者從ATCC細(xi)胞庫(ku)查詢。除此之(zhi)外我們(men)還要知(zhi)道每(mei)管細(xi)胞的(de)數(shu)量，建(jian)議(yi)分(fen)裂(lie)或傳(chuan)代(dai)的(de)比(bi)例(li)，和已知(zhi)細(xi)胞的(de)傳(chuan)代(dai)代(dai)次(ci)等(deng)信息。

　　Q5.準備培(pei)養基
復(fu)蘇細(xi)胞時需(xu)要準備(bei)合(he)適(shi)的培(pei)養基，血清(qing)和細(xi)胞生(sheng)長所需(xu)的添(tian)加(jia)劑。大部(bu)分(fen)培(pei)養細(xi)胞所用的(de)培(pei)養體系，可(ke)以在訂(ding)購(gou)細(xi)胞系時獲得(de)。
雖(sui)然大多(duo)數(shu)細(xi)胞系可(ke)以在不止(zhi)壹(yi)種(zhong)培(pei)養基中生(sheng)長，但(dan)是當(dang)培(pei)養基改變時，細(xi)胞的(de)性(xing)質(zhi)也會(hui)變(bian)化(hua)。因(yin)此(ci)，使(shi)用(yong)細(xi)胞庫(ku)推薦(jian)的(de)培(pei)養基來培(pei)養細(xi)胞會(hui)獲(huo)得(de)的(de)效(xiao)果。

　　Q6.開啟(qi)凍存(cun)管(guan)
1.準(zhun)備(bei)壹(yi)個培(pei)養瓶，加入適(shi)宜細(xi)胞培(pei)養的培(pei)養基，液體體積按照(zhao)說(shuo)明(ming)書的推薦(jian)配(pei)置，並平衡培(pei)養基的溫度(du)和pH（CO2）。　
2.在37℃水浴中或細(xi)胞的(de)正(zheng)常(chang)生(sheng)長溫(wen)度下(xia)將(jiang)凍存管輕(qing)輕(qing)搖動。解(jie)凍要快，約2分(fen)鐘(zhong)或(huo)直到(dao)冰晶(jing)融化(hua)即可。
3.從水浴中取(qu)出凍(dong)存管並(bing)用浸(jin)泡或(huo)噴灑(sa)70%乙醇(chun)的方(fang)式來消毒。進(jin)壹(yi)步(bu)的操作均(jun)需(xu)在無菌(jun)操作臺(tai)中嚴(yan)格(ge)無菌(jun)條(tiao)件下(xia)進(jin)行。
4.擰(ning)開凍存管的(de)管(guan)帽並(bing)將(jiang)內(nei)容物(wu)轉移到壹(yi)個含(han)有(you)9 ml推薦(jian)培(pei)養基的無菌(jun)離(li)心管中(zhong)。通(tong)過(guo)溫(wen)和離心（125×g 10 min）除去(qu)冷凍保護劑(ji)（DMSO）。棄去(qu)上清(qing)，並(bing)用(yong)1或2 ml*培(pei)養基重懸細(xi)胞。將(jiang)這些(xie)細(xi)胞懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移到含(han)有(you)*培(pei)養基的培(pei)養瓶中並輕(qing)輕(qing)搖動以*混勻。
5.培(pei)養24小時後檢查細(xi)胞狀(zhuang)態(tai)並(bing)在需(xu)要時進(jin)行傳(chuan)代(dai)。

　　Q7. 人(ren)腦(nao)血(xue)管(guan)平滑(hua)肌(ji)細(xi)胞 培(pei)養用液pH對細(xi)胞生(sheng)長的(de)影響(xiang)

　　由於(yu)，大多(duo)數(shu)細(xi)胞適(shi)宜pH為(wei)7.2~7.4，偏離(li)此範圍對細(xi)胞將(jiang)產(chan)生(sheng)有(you)害的(de)影響(xiang)。各(ge)種(zhong)細(xi)胞對(dui)pH的(de)要求也不*相(xiang)同(tong)，原代(dai)培(pei)養細(xi)胞壹(yi)般對(dui)pH變動(dong)耐受(shou)差，無限細(xi)胞系耐(nai)受(shou)力強。

　　但(dan)總(zong)體來說(shuo)，細(xi)胞耐(nai)酸(suan)性(xing)比(bi)耐(nai)堿(jian)性(xing)強壹(yi)些(xie)，偏(pian)酸環(huan)境中(zhong)更(geng)利於(yu)細(xi)胞生(sheng)長。因(yin)此(ci)，我(wo)們(men)在(zai)配制(zhi)培(pei)養用液時，可把液體的pH稍微(wei)調(tiao)得(de)偏(pian)酸(suan)壹(yi)些(xie)。液(ye)體在經過(guo)0.10um或(huo)0.22um濾(lv)膜(mo)過(guo)濾(lv)時，溶(rong)液的(de)pH還會(hui)向(xiang)上(shang)浮(fu)動(dong)0.2左(zuo)右(you)。

　　人(ren)腦(nao)血(xue)管(guan)平滑(hua)肌(ji)細(xi)胞質(zhi)量可靠，售後有(you)保障(zhang)（編輯(ji)：tanxi）