人乳腺癌細胞（綠(lv)色熒(ying)光蛋(dan)白(bai)標記(ji)）_復蘇的(de)

非(fei)常(chang)讓人著迷的實驗，其(qi)成(cheng)功關(guan)鍵(jian)之壹(yi)是(shi)選擇可(ke)信(xin)的(de)實(shi)驗試(shi)劑(ji)。

我(wo)司(si)細(xi)胞近(jin)3000種，來(lai)源於美國(guo)ATCC,細(xi)胞都是(shi)經(jing)過(guo)嚴(yan)格質(zhi)量控制(zhi)，在中國(guo)大(da)陸(lu)努力搭(da)建(jian)正牌(pai)細胞與(yu)國(guo)內廣(guang)大科研人員(yuan)之間(jian)的(de)溝(gou)通(tong)橋(qiao)梁。為您(nin)提供人乳腺癌細胞(綠(lv)色熒(ying)光蛋(dan)白(bai)標記(ji))外，還(hai)有(you)更多(duo)相關(guan)實(shi)驗產品(pin)，標準品(pin)，細(xi)胞株和實驗技(ji)術(shu)服務(wu)等等前(qian)期(qi)後續服(fu)務。

人乳腺癌細胞(綠(lv)色熒(ying)光蛋(dan)白(bai)標記(ji))的產品(pin)介(jie)紹

人乳腺癌細胞(綠(lv)色熒(ying)光蛋(dan)白(bai)標記(ji))由我(wo)司(si)*銷(xiao)售(shou)人乳腺癌細胞(綠(lv)色熒(ying)光蛋(dan)白(bai)標記(ji))。

人乳腺癌細胞(綠(lv)色熒(ying)光蛋(dan)白(bai)標記(ji))細胞株

　　Q1. 人乳腺癌細胞(綠(lv)色熒(ying)光蛋(dan)白(bai)標記(ji))液體培養基的保(bao)存是(shi)冷(leng)藏好？還(hai)是(shi)冷(leng)凍好？

　　要(yao)冷(leng)藏(zang)！！因(yin)為液體培養基經冷(leng)凍後再(zai)經(jing)溶化時，其(qi)溶液的(de)pH值(zhi)會(hui)發(fa)生改變(bian)，溶液往(wang)往(wang)變(bian)堿(jian)，某些成(cheng)分(fen)溶解(jie)也(ye)會(hui)受到影響對(dui)細胞生長(chang)不利(li)。故液體培養基壹定(ding)要(yao)存放在冷藏箱(xiang)中，通(tong)常液體培養基在冷藏條件(jian)下(xia)可(ke)存放6個月(yue) ~ 壹(yi)年。

　　Q2.人乳腺癌細胞(綠(lv)色熒(ying)光蛋(dan)白(bai)標記(ji)) 液體培養基中谷氨(an)酰胺的作(zuo)用，及使用(yong)方法。

　　幾(ji)乎(hu)所(suo)有(you)的細(xi)胞對谷氨(an)酰胺有(you)較(jiao)高的(de)要(yao)求(qiu)，細(xi)胞需要(yao)谷氨(an)酰胺合成(cheng)蛋(dan)白(bai)質(zhi)，在缺(que)少谷氨(an)酰胺時，細(xi)胞生長(chang)不良而(er)死(si)亡。所以，各(ge)種培養液中(zhong)都(dou)含(han)有(you)較(jiao)大(da)量的谷氨(an)酰胺。谷氨(an)酰胺在溶液中(zhong)很(hen)不穩定(ding)，應置(zhi)-20 ?C冰凍保存，用前(qian)加入(ru)培養基中。加(jia)有(you)谷氨(an)酰胺的液體培養基4 ?C 冰箱(xiang)儲存兩周(zhou)以上時，應(ying)重新加入(ru)原來(lai)量的谷氨(an)酰胺。基礎醫(yi)學細胞中心(xin)在其(qi)服(fu)務項目中配制(zhi)分(fen)裝(zhuang)了高濃(nong)度（100倍）的谷氨(an)酰胺溶液（1ml/支(zhi)）。每(mei)支1ml的谷氨(an)酰胺加到99ml*培養基中，其(qi)終(zhong)濃(nong)度為2mM/ml培養基。包裝(zhuang)為粉紅(hong)色，-24?C保存。

　　Q3.細胞計數(shu)及存活測(ce)試
1、原(yuan)理：
(1)計算(suan)細(xi)胞數目(mu)可(ke)用(yong)血球計數(shu)盤或(huo)是(shi)Coultercounter粒(li)子計數(shu)器自(zi)動(dong)計數(shu)。
(2)血球計數(shu)盤壹般(ban)有(you)二個chambers，每(mei)個chamber中細刻(ke)9個1mm2大正方形，其(qi)中(zhong)4個角落(luo)之正方形再(zai)細(xi)刻(ke)16個小(xiao)格，深(shen)度均為0.1mm。當chamber上方蓋上蓋玻(bo)片(pian)後，每(mei)個大正方形之(zhi)體積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用(yong)時，計數(shu)每(mei)個大正方形內之細(xi)胞數目(mu)，乘(cheng)以稀(xi)釋倍數(shu)，再(zai)乘(cheng)以104，即(ji)為每(mei)ml中之細胞數目(mu)。
(3)存活測(ce)試之(zhi)步(bu)驟(zhou)為dyeexclusion，利(li)用染料會(hui)滲(shen)入(ru)死(si)細(xi)胞中而(er)呈(cheng)色，而活細(xi)胞因(yin)細(xi)胞膜(mo)完(wan)整(zheng)，染料無(wu)法滲(shen)入(ru)而不會(hui)呈(cheng)色(se)。壹(yi)般(ban)使用(yong)藍色之(zhi)trypan blue染料，如(ru)果細(xi)胞不易吸(xi)收(shou)trypan blue，則(ze)用紅(hong)色之Erythrosin bluish。計算(suan)細(xi)胞活率(lv)：活細(xi)胞數/(活細(xi)胞數+死(si)細(xi)胞數)×100%。計數(shu)應在臺盼(pan)蘭(lan)染色(se)後數分(fen)鐘內完(wan)成(cheng)，隨時間(jian)延(yan)長(chang)，部分(fen)活細(xi)胞也(ye)開始(shi)攝(she)取(qu)染料;因(yin)為臺盼(pan)蘭(lan)對(dui)蛋(dan)白(bai)質(zhi)有(you)很強(qiang)的(de)親(qin)和力，用不含(han)血清的(de)稀釋液，可(ke)以使染色(se)計數(shu)更為準確。

　　Q4.細胞特(te)性(xing)
在細胞培養之(zhi)前(qian)，我(wo)們(men)要(yao)了解(jie)壹下(xia)妳所(suo)要(yao)養(yang)細(xi)胞的基本(ben)特(te)性(xing)，這點可(ke)以從(cong)細胞的產品(pin)說(shuo)明(ming)書或(huo)者從(cong)ATCC細胞庫(ku)查(zha)詢(xun)。除(chu)此(ci)之外我(wo)們(men)還(hai)要(yao)知(zhi)道每(mei)管細胞的數(shu)量(liang)，建(jian)議分(fen)裂(lie)或(huo)傳(chuan)代的(de)比(bi)例(li)，和已(yi)知(zhi)細胞的傳(chuan)代代次(ci)等信(xin)息(xi)。

　　Q5.準(zhun)備(bei)培養基
復蘇細(xi)胞時需(xu)要(yao)準(zhun)備(bei)合(he)適的(de)培養基，血清和細胞生長(chang)所需(xu)的添(tian)加劑(ji)。大部分(fen)培養細(xi)胞所用(yong)的(de)培養體系(xi)，可(ke)以在訂購細胞系時獲得。
雖然大(da)多(duo)數(shu)細胞系可(ke)以在不止壹種(zhong)培養基中生長(chang)，但(dan)是(shi)當(dang)培養基改變(bian)時，細(xi)胞的性(xing)質也(ye)會(hui)變(bian)化。因(yin)此(ci)，使用(yong)細胞庫(ku)推薦(jian)的(de)培養基來(lai)培養細(xi)胞會(hui)獲得的效果(guo)。

　　Q6.開啟凍存管
1.準(zhun)備壹(yi)個培養瓶，加入(ru)適宜(yi)細(xi)胞培養的(de)培養基，液體體積按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書的推薦(jian)配置(zhi)，並(bing)平衡培養基的溫(wen)度和pH（CO2）。　
2.在37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)或(huo)細胞的正(zheng)常(chang)生長(chang)溫(wen)度下(xia)將(jiang)凍存管輕(qing)輕(qing)搖(yao)動(dong)。解(jie)凍要(yao)快(kuai)，約(yue)2分鐘(zhong)或(huo)直到(dao)冰晶(jing)融化即(ji)可(ke)。
3.從(cong)水(shui)浴(yu)中(zhong)取(qu)出(chu)凍存管並(bing)用浸(jin)泡或(huo)噴(pen)灑(sa)70%乙醇(chun)的方式(shi)來(lai)消毒。進壹(yi)步(bu)的操作(zuo)均需在無(wu)菌操作(zuo)臺中嚴(yan)格無(wu)菌條件(jian)下(xia)進行。
4.擰(ning)開凍存管的(de)管帽(mao)並(bing)將(jiang)內容物轉(zhuan)移(yi)到壹個含(han)有(you)9 ml推薦(jian)培養基的無(wu)菌離(li)心(xin)管中(zhong)。通過(guo)溫(wen)和離(li)心(xin)（125×g 10 min）除(chu)去冷凍保護劑（DMSO）。棄(qi)去上清，並(bing)用1或(huo)2 ml*培養基重懸細(xi)胞。將(jiang)這些(xie)細(xi)胞懸液轉(zhuan)移(yi)到含(han)有(you)*培養基的培養瓶中並(bing)輕(qing)輕(qing)搖(yao)動(dong)以*混(hun)勻。
5.培養24小(xiao)時後檢(jian)查(zha)細胞狀態(tai)並(bing)在需要(yao)時進行傳(chuan)代。

　　Q7. 人乳腺癌細胞(綠(lv)色熒(ying)光蛋(dan)白(bai)標記(ji)) 培養用(yong)液pH對(dui)細(xi)胞生長(chang)的影(ying)響

　　由於，大多(duo)數(shu)細胞適宜(yi)pH為7.2~7.4，偏離(li)此(ci)範圍(wei)對細(xi)胞將(jiang)產生有(you)害的(de)影(ying)響。各(ge)種細(xi)胞對pH的(de)要(yao)求(qiu)也(ye)不*相同，原代培養細(xi)胞壹般(ban)對pH變(bian)動(dong)耐(nai)受差，無(wu)限(xian)細(xi)胞系耐(nai)受力強(qiang)。

　　但(dan)總(zong)體來(lai)說(shuo)，細(xi)胞耐(nai)酸(suan)性(xing)比(bi)耐(nai)堿(jian)性(xing)強(qiang)壹(yi)些(xie)，偏酸(suan)環(huan)境中更(geng)利(li)於細胞生長(chang)。因(yin)此(ci)，我(wo)們(men)在配制(zhi)培養用(yong)液時，可(ke)把液體的(de)pH稍(shao)微調(tiao)得(de)偏酸(suan)壹(yi)些(xie)。液體在經過(guo)0.10um或(huo)0.22um濾膜(mo)過(guo)濾(lv)時，溶液的(de)pH還(hai)會(hui)向(xiang)上浮動(dong)0.2左(zuo)右(you)。

　　人乳腺癌細胞(綠(lv)色熒(ying)光蛋(dan)白(bai)標記(ji))質量(liang)可(ke)靠，售後有(you)保障(zhang)（編輯(ji)：tanxi）