人乳(ru)腺(xian)癌細(xi)胞（耐阿(e)黴(mei)素）_細(xi)胞株(zhu)

非常(chang)讓人著迷(mi)的實驗(yan)，其(qi)成功(gong)關鍵之壹(yi)是(shi)選(xuan)擇(ze)可(ke)信的實驗(yan)試(shi)劑。

我司(si)細胞近(jin)3000種，來源於美國ATCC,細胞都(dou)是(shi)經過(guo)嚴(yan)格(ge)質(zhi)量(liang)控(kong)制(zhi)，在中國大陸(lu)努(nu)力搭(da)建(jian)正牌(pai)細胞(bao)與國內(nei)廣(guang)大(da)科研人員之間的(de)溝通橋(qiao)梁。為您(nin)提(ti)供人乳(ru)腺(xian)癌細(xi)胞(耐阿(e)黴(mei)素)外(wai)，還有(you)更多相(xiang)關實驗(yan)產(chan)品，標(biao)準品，細胞(bao)株(zhu)和實驗(yan)技(ji)術(shu)服(fu)務(wu)等等前期後續(xu)服(fu)務(wu)。

人乳(ru)腺(xian)癌細(xi)胞(耐阿(e)黴(mei)素)的(de)產(chan)品介紹

人乳(ru)腺(xian)癌細(xi)胞(耐阿(e)黴(mei)素)由我司(si)*銷(xiao)售(shou)人乳(ru)腺(xian)癌細(xi)胞(耐阿(e)黴(mei)素)。

人乳(ru)腺(xian)癌細(xi)胞(耐阿(e)黴(mei)素)細(xi)胞株(zhu)

　　Q1. 人乳(ru)腺(xian)癌細(xi)胞(耐阿(e)黴(mei)素)液體(ti)培養(yang)基(ji)的(de)保(bao)存是(shi)冷(leng)藏好(hao)？還是(shi)冷(leng)凍好(hao)？

　　要(yao)冷(leng)藏！！因(yin)為液體(ti)培養(yang)基(ji)經冷(leng)凍後(hou)再經溶(rong)化(hua)時，其(qi)溶(rong)液的(de)pH值(zhi)會發(fa)生(sheng)改(gai)變(bian)，溶(rong)液往(wang)往(wang)變(bian)堿，某些成(cheng)分溶(rong)解也(ye)會(hui)受(shou)到(dao)影響對細(xi)胞生(sheng)長(chang)不利。故(gu)液體(ti)培養(yang)基(ji)壹(yi)定要(yao)存(cun)放(fang)在冷(leng)藏箱中，通常(chang)液體(ti)培養(yang)基(ji)在冷(leng)藏條件下(xia)可(ke)存(cun)放(fang)6個月(yue) ~ 壹(yi)年。

　　Q2.人乳(ru)腺(xian)癌細(xi)胞(耐阿(e)黴(mei)素) 液體(ti)培養(yang)基(ji)中谷氨(an)酰胺的作(zuo)用(yong)，及(ji)使用(yong)方(fang)法(fa)。

　　幾(ji)乎所有(you)的(de)細(xi)胞(bao)對谷氨(an)酰胺有(you)較(jiao)高的(de)要(yao)求(qiu)，細胞需(xu)要(yao)谷(gu)氨(an)酰胺合成(cheng)蛋(dan)白(bai)質(zhi)，在缺少(shao)谷(gu)氨(an)酰胺時，細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)不良(liang)而(er)死亡。所(suo)以，各種培養(yang)液中都含(han)有(you)較(jiao)大量(liang)的谷氨(an)酰胺。谷氨(an)酰胺在溶(rong)液中很不穩(wen)定，應(ying)置(zhi)-20 ?C冰凍(dong)保(bao)存，用(yong)前(qian)加(jia)入(ru)培養(yang)基(ji)中。加(jia)有(you)谷(gu)氨(an)酰胺的液體(ti)培養(yang)基(ji)4 ?C 冰(bing)箱儲存兩(liang)周(zhou)以上時，應(ying)重新加(jia)入(ru)原來量的(de)谷氨(an)酰胺。基(ji)礎醫學(xue)細(xi)胞中心在其(qi)服務(wu)項(xiang)目中配制(zhi)分裝(zhuang)了(le)高濃度(du)（100倍(bei)）的谷氨(an)酰胺溶(rong)液（1ml/支）。每(mei)支1ml的谷(gu)氨(an)酰胺加(jia)到(dao)99ml*培養(yang)基(ji)中，其(qi)終濃度(du)為(wei)2mM/ml培養(yang)基(ji)。包(bao)裝為粉紅(hong)色，-24?C保(bao)存。

　　Q3.細(xi)胞計(ji)數及(ji)存活測試(shi)
1、原理：
(1)計(ji)算細(xi)胞數目(mu)可(ke)用(yong)血(xue)球(qiu)計(ji)數盤或(huo)是(shi)Coultercounter粒(li)子計數器自動(dong)計(ji)數。
(2)血(xue)球(qiu)計(ji)數盤壹般有(you)二(er)個chambers，每(mei)個chamber中細刻9個1mm2大正方形(xing)，其(qi)中4個角(jiao)落之(zhi)正方形(xing)再細刻16個小(xiao)格(ge)，深度(du)均(jun)為0.1mm。當(dang)chamber上方蓋(gai)上蓋(gai)玻(bo)片後(hou)，每(mei)個大正方形(xing)之體(ti)積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使(shi)用(yong)時，計(ji)數每(mei)個大正方形(xing)內(nei)之(zhi)細(xi)胞(bao)數目(mu)，乘以稀釋倍(bei)數，再乘以104，即(ji)為每(mei)ml中之細胞數目(mu)。
(3)存(cun)活測試(shi)之步(bu)驟為dyeexclusion，利用(yong)染料會(hui)滲(shen)入死細胞(bao)中而(er)呈色，而(er)活細胞(bao)因(yin)細胞(bao)膜完(wan)整，染料無(wu)法滲(shen)入而(er)不會(hui)呈色。壹般使用(yong)藍色之trypan blue染料，如果(guo)細(xi)胞不易(yi)吸收trypan blue，則用(yong)紅(hong)色之Erythrosin bluish。計(ji)算細(xi)胞活率：活細胞(bao)數/(活細胞(bao)數+死細胞(bao)數)×100%。計(ji)數應(ying)在臺(tai)盼蘭(lan)染色後數分(fen)鐘內(nei)完(wan)成(cheng)，隨(sui)時間(jian)延(yan)長，部(bu)分(fen)活細胞(bao)也(ye)開(kai)始攝(she)取染料;因(yin)為臺(tai)盼蘭(lan)對(dui)蛋(dan)白(bai)質(zhi)有(you)很(hen)強的(de)親(qin)和力(li)，用(yong)不含(han)血(xue)清的稀釋液，可(ke)以使染色計數更為(wei)準(zhun)確。

　　Q4.細胞(bao)特性(xing)
在細胞(bao)培養(yang)之(zhi)前(qian)，我們要(yao)了(le)解(jie)壹(yi)下(xia)妳(ni)所(suo)要(yao)養(yang)細(xi)胞(bao)的基(ji)本特(te)性(xing)，這(zhe)點可以從(cong)細胞(bao)的(de)產(chan)品說明(ming)書(shu)或(huo)者(zhe)從(cong)ATCC細胞(bao)庫(ku)查(zha)詢(xun)。除此(ci)之外(wai)我們還要(yao)知(zhi)道每(mei)管細(xi)胞(bao)的(de)數量(liang)，建(jian)議(yi)分裂或(huo)傳(chuan)代的比(bi)例，和已(yi)知(zhi)細胞的(de)傳代代次(ci)等信息。

　　Q5.準備培養(yang)基(ji)
復(fu)蘇細胞(bao)時需(xu)要(yao)準(zhun)備合適(shi)的(de)培養(yang)基(ji)，血(xue)清和細(xi)胞生(sheng)長(chang)所需(xu)的添(tian)加(jia)劑(ji)。大部分培養(yang)細(xi)胞(bao)所用(yong)的(de)培養(yang)體(ti)系，可以在訂購(gou)細胞(bao)系(xi)時獲得(de)。
雖(sui)然(ran)大多數細(xi)胞(bao)系可(ke)以在不止(zhi)壹種培養(yang)基(ji)中生(sheng)長(chang)，但是(shi)當(dang)培養(yang)基(ji)改(gai)變(bian)時，細(xi)胞(bao)的性(xing)質(zhi)也(ye)會(hui)變(bian)化(hua)。因(yin)此(ci)，使用(yong)細(xi)胞(bao)庫(ku)推(tui)薦(jian)的培養(yang)基(ji)來培養(yang)細(xi)胞(bao)會獲得(de)的(de)效(xiao)果。

　　Q6.開(kai)啟凍存管(guan)
1.準(zhun)備壹個培養(yang)瓶，加(jia)入(ru)適(shi)宜細(xi)胞培養(yang)的(de)培養(yang)基(ji)，液體(ti)體(ti)積按照說明(ming)書(shu)的推(tui)薦(jian)配置(zhi)，並(bing)平衡培養(yang)基(ji)的(de)溫度(du)和pH（CO2）。　
2.在37℃水(shui)浴(yu)中或(huo)細(xi)胞(bao)的(de)正常(chang)生(sheng)長(chang)溫度(du)下(xia)將(jiang)凍(dong)存(cun)管輕輕搖(yao)動。解(jie)凍要(yao)快，約(yue)2分鐘或(huo)直到(dao)冰晶(jing)融化(hua)即(ji)可。
3.從(cong)水(shui)浴(yu)中取出凍存管(guan)並(bing)用(yong)浸泡或(huo)噴(pen)灑(sa)70%乙醇(chun)的方式(shi)來消(xiao)毒。進(jin)壹步的操作均(jun)需在無菌(jun)操作(zuo)臺(tai)中嚴格(ge)無菌(jun)條件(jian)下(xia)進(jin)行。
4.擰(ning)開凍(dong)存(cun)管(guan)的管帽(mao)並(bing)將內(nei)容(rong)物(wu)轉(zhuan)移到(dao)壹個含(han)有(you)9 ml推(tui)薦(jian)培養(yang)基(ji)的(de)無菌(jun)離(li)心管(guan)中。通過(guo)溫(wen)和離(li)心（125×g 10 min）除去(qu)冷(leng)凍保(bao)護劑(ji)（DMSO）。棄(qi)去上清，並(bing)用(yong)1或(huo)2 ml*培養(yang)基(ji)重懸細胞。將這些細(xi)胞懸(xuan)液轉(zhuan)移到(dao)含(han)有(you)*培養(yang)基(ji)的(de)培養(yang)瓶中並(bing)輕輕搖(yao)動以*混勻(yun)。
5.培養(yang)24小(xiao)時後(hou)檢(jian)查細(xi)胞狀態並(bing)在需要(yao)時進(jin)行傳代。

　　Q7. 人乳(ru)腺(xian)癌細(xi)胞(耐阿(e)黴(mei)素) 培養(yang)用(yong)液pH對(dui)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)的影(ying)響

　　由於(yu)，大(da)多數細(xi)胞(bao)適(shi)宜pH為(wei)7.2~7.4，偏離(li)此(ci)範(fan)圍(wei)對(dui)細(xi)胞(bao)將(jiang)產(chan)生(sheng)有(you)害(hai)的(de)影響。各種細胞(bao)對pH的(de)要(yao)求(qiu)也(ye)不*相(xiang)同，原代培養(yang)細(xi)胞(bao)壹般對pH變(bian)動耐(nai)受(shou)差，無(wu)限(xian)細胞系(xi)耐(nai)受(shou)力強。

　　但(dan)總(zong)體(ti)來說，細胞(bao)耐(nai)酸性比(bi)耐堿性強壹(yi)些，偏(pian)酸環(huan)境中更利於細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)。因(yin)此(ci)，我們在配制(zhi)培養(yang)用(yong)液時，可(ke)把(ba)液體(ti)的pH稍微調(tiao)得(de)偏(pian)酸壹些。液體(ti)在經過(guo)0.10um或(huo)0.22um濾(lv)膜過(guo)濾(lv)時，溶(rong)液的(de)pH還會向(xiang)上浮動(dong)0.2左(zuo)右(you)。

　　人乳(ru)腺(xian)癌細(xi)胞(耐阿(e)黴(mei)素)質(zhi)量(liang)可(ke)靠(kao)，售(shou)後(hou)有(you)保(bao)障（編輯：tanxi）