人(ren)乳腺(xian)癌(ai)細胞（上皮(pi)粘(zhan)性(xing)蛋白(bai)基(ji)因修飾）_細胞株

非常讓人(ren)著迷(mi)的實驗(yan)，其成(cheng)功關鍵之壹(yi)是選擇可(ke)信(xin)的實驗(yan)試劑(ji)。

我(wo)司(si)細(xi)胞近3000種，來源(yuan)於美國ATCC,細(xi)胞都是經(jing)過嚴格質量控制(zhi)，在(zai)中(zhong)國(guo)大(da)陸(lu)努(nu)力(li)搭建正牌細(xi)胞與國(guo)內(nei)廣(guang)大(da)科(ke)研(yan)人(ren)員(yuan)之(zhi)間的溝通橋(qiao)梁(liang)。為您提(ti)供(gong)人(ren)乳腺(xian)癌(ai)細胞(上皮(pi)粘(zhan)性(xing)蛋白(bai)基(ji)因修飾)外，還(hai)有更多(duo)相(xiang)關實驗(yan)產(chan)品(pin)，標(biao)準品(pin)，細(xi)胞株和(he)實驗(yan)技(ji)術服(fu)務等等(deng)前(qian)期後續(xu)服(fu)務。

人(ren)乳腺(xian)癌(ai)細胞(上皮(pi)粘(zhan)性(xing)蛋白(bai)基(ji)因修飾)的產(chan)品(pin)介紹

人(ren)乳腺(xian)癌(ai)細胞(上皮(pi)粘(zhan)性(xing)蛋白(bai)基(ji)因修飾)由我(wo)司(si)*銷(xiao)售(shou)人(ren)乳腺(xian)癌(ai)細胞(上皮(pi)粘(zhan)性(xing)蛋白(bai)基(ji)因修飾)。

人(ren)乳腺(xian)癌(ai)細胞(上皮(pi)粘(zhan)性(xing)蛋白(bai)基(ji)因修飾)細胞株

　　Q1. 人(ren)乳腺(xian)癌(ai)細胞(上皮(pi)粘(zhan)性(xing)蛋白(bai)基(ji)因修飾)液體培養基的保存是冷(leng)藏好？還是冷(leng)凍好？

　　要冷(leng)藏(zang)！！因為液體培養基經冷凍(dong)後(hou)再(zai)經(jing)溶化時(shi)，其溶液的pH值會發生(sheng)改(gai)變(bian)，溶液往往變(bian)堿(jian)，某(mou)些(xie)成(cheng)分(fen)溶解也(ye)會(hui)受(shou)到(dao)影(ying)響(xiang)對(dui)細胞生長(chang)不(bu)利(li)。故液體培養基壹(yi)定(ding)要(yao)存(cun)放(fang)在(zai)冷藏(zang)箱中(zhong)，通(tong)常(chang)液體培養基在(zai)冷藏(zang)條件(jian)下可(ke)存放6個月 ~ 壹(yi)年(nian)。

　　Q2.人(ren)乳腺(xian)癌(ai)細胞(上皮(pi)粘(zhan)性(xing)蛋白(bai)基(ji)因修飾) 液體培養基中(zhong)谷(gu)氨(an)酰(xian)胺的作用，及(ji)使(shi)用方(fang)法。

　　幾乎(hu)所(suo)有(you)的細胞對谷(gu)氨(an)酰(xian)胺有(you)較高的要求(qiu)，細(xi)胞需(xu)要谷氨(an)酰(xian)胺合(he)成(cheng)蛋白(bai)質(zhi)，在(zai)缺(que)少(shao)谷氨酰(xian)胺時(shi)，細胞生長(chang)不(bu)良(liang)而死(si)亡。所(suo)以(yi)，各種培養液中(zhong)都含(han)有(you)較大量的谷氨酰(xian)胺。谷(gu)氨酰(xian)胺在(zai)溶液中(zhong)很(hen)不穩(wen)定，應(ying)置(zhi)-20 ?C冰(bing)凍保(bao)存(cun)，用前(qian)加入培養基中(zhong)。加(jia)有(you)谷(gu)氨(an)酰(xian)胺的液體培養基4 ?C 冰(bing)箱儲存(cun)兩周(zhou)以(yi)上時(shi)，應重新加(jia)入原(yuan)來量的谷氨酰(xian)胺。基(ji)礎醫(yi)學細胞中(zhong)心(xin)在(zai)其服(fu)務項目(mu)中(zhong)配(pei)制(zhi)分(fen)裝(zhuang)了高濃(nong)度（100倍）的谷氨酰(xian)胺溶液（1ml/支(zhi)）。每支(zhi)1ml的谷氨酰(xian)胺加(jia)到(dao)99ml*培養基中(zhong)，其終濃(nong)度為2mM/ml培養基。包(bao)裝(zhuang)為粉紅色，-24?C保存(cun)。

　　Q3.細(xi)胞計數及(ji)存(cun)活測試(shi)
1、原(yuan)理：
(1)計算(suan)細胞數目可(ke)用血(xue)球(qiu)計數盤或(huo)是Coultercounter粒子計數器自動計數。
(2)血球(qiu)計數盤壹(yi)般有(you)二個chambers，每個chamber中(zhong)細(xi)刻(ke)9個1mm2大正方(fang)形(xing)，其中(zhong)4個角落(luo)之(zhi)正方(fang)形(xing)再(zai)細(xi)刻(ke)16個小格，深度均(jun)為0.1mm。當chamber上方(fang)蓋(gai)上蓋玻片(pian)後，每個大正方(fang)形(xing)之體積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用時(shi)，計數每個大正方(fang)形(xing)內之(zhi)細胞數目，乘以(yi)稀(xi)釋(shi)倍數，再(zai)乘(cheng)以(yi)104，即(ji)為每ml中(zhong)之(zhi)細(xi)胞數目。
(3)存活測試(shi)之(zhi)步(bu)驟(zhou)為dyeexclusion，利用染料會滲(shen)入死(si)細(xi)胞中(zhong)而呈(cheng)色，而活細胞因細胞膜完(wan)整(zheng)，染料無法滲入而不(bu)會呈色。壹(yi)般使(shi)用藍色之(zhi)trypan blue染料，如(ru)果細胞不易(yi)吸收(shou)trypan blue，則(ze)用紅(hong)色之Erythrosin bluish。計算(suan)細胞活率(lv)：活細胞數/(活細胞數+死(si)細(xi)胞數)×100%。計數應在(zai)臺盼(pan)蘭染色後(hou)數分(fen)鐘內(nei)完(wan)成(cheng)，隨(sui)時(shi)間延長(chang)，部分(fen)活細胞也開(kai)始(shi)攝取染料;因為臺盼蘭對蛋白(bai)質(zhi)有很(hen)強的親(qin)和力(li)，用不(bu)含血清(qing)的稀(xi)釋(shi)液，可(ke)以(yi)使染色計數更為準確(que)。

　　Q4.細(xi)胞特性(xing)
在(zai)細胞培養之前，我(wo)們要(yao)了解(jie)壹(yi)下妳所要(yao)養細胞的基本特(te)性，這(zhe)點可(ke)以(yi)從(cong)細(xi)胞的產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書或者(zhe)從(cong)ATCC細(xi)胞庫查(zha)詢。除(chu)此(ci)之外(wai)我(wo)們還(hai)要(yao)知道每管細(xi)胞的數量，建議(yi)分(fen)裂(lie)或(huo)傳代的比例，和已(yi)知細胞的傳代代(dai)次等信(xin)息。

　　Q5.準(zhun)備培養基
復(fu)蘇(su)細胞時(shi)需(xu)要準備合適的培養基，血清(qing)和細(xi)胞生長(chang)所(suo)需(xu)的添加劑。大(da)部(bu)分(fen)培養細胞所用的培養體系，可(ke)以(yi)在(zai)訂購(gou)細胞系時(shi)獲得(de)。
雖然大多(duo)數細胞系可(ke)以(yi)在(zai)不止(zhi)壹(yi)種培養基中(zhong)生(sheng)長(chang)，但(dan)是當(dang)培養基改變(bian)時(shi)，細胞的性質也會(hui)變(bian)化。因此，使(shi)用細(xi)胞庫推薦(jian)的培養基來培養細胞會獲(huo)得(de)的效(xiao)果。

　　Q6.開(kai)啟(qi)凍(dong)存(cun)管(guan)
1.準備壹(yi)個培養瓶，加入適宜細胞培養的培養基，液體體積按照說(shuo)明(ming)書的推薦(jian)配置(zhi)，並(bing)平(ping)衡(heng)培養基的溫(wen)度和pH（CO2）。　
2.在(zai)37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)或(huo)細(xi)胞的正常生(sheng)長(chang)溫(wen)度下將凍(dong)存管(guan)輕(qing)輕搖動。解(jie)凍要(yao)快(kuai)，約(yue)2分(fen)鐘或(huo)直(zhi)到(dao)冰(bing)晶(jing)融化即(ji)可(ke)。
3.從(cong)水(shui)浴(yu)中(zhong)取出凍(dong)存管並(bing)用浸(jin)泡(pao)或噴灑(sa)70%乙醇的方(fang)式(shi)來消(xiao)毒(du)。進(jin)壹(yi)步(bu)的操(cao)作均(jun)需(xu)在(zai)無菌(jun)操(cao)作臺中(zhong)嚴(yan)格無菌(jun)條件(jian)下進行(xing)。
4.擰(ning)開(kai)凍(dong)存(cun)管(guan)的管帽並(bing)將內(nei)容物(wu)轉移(yi)到(dao)壹(yi)個含有9 ml推薦(jian)培養基的無菌(jun)離心管(guan)中(zhong)。通(tong)過(guo)溫(wen)和(he)離(li)心(xin)（125×g 10 min）除(chu)去冷(leng)凍保(bao)護(hu)劑（DMSO）。棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)，並(bing)用1或(huo)2 ml*培養基重懸細胞。將這(zhe)些(xie)細(xi)胞懸液轉移到(dao)含有(you)*培養基的培養瓶中(zhong)並(bing)輕輕(qing)搖動以(yi)*混勻。
5.培養24小時(shi)後檢(jian)查細(xi)胞狀態並(bing)在(zai)需(xu)要時(shi)進行(xing)傳代。

　　Q7. 人(ren)乳腺(xian)癌(ai)細胞(上皮(pi)粘(zhan)性(xing)蛋白(bai)基(ji)因修飾) 培養用液pH對細胞生長(chang)的影(ying)響(xiang)

　　由(you)於，大(da)多(duo)數細胞適宜pH為7.2~7.4，偏離此範圍(wei)對(dui)細(xi)胞將產(chan)生(sheng)有害(hai)的影(ying)響(xiang)。各種細胞對pH的要求(qiu)也(ye)不(bu)*相(xiang)同，原代培養細胞壹(yi)般對(dui)pH變(bian)動(dong)耐受(shou)差(cha)，無限(xian)細胞系耐受(shou)力(li)強。

　　但(dan)總體來說(shuo)，細(xi)胞耐酸(suan)性(xing)比(bi)耐堿(jian)性(xing)強壹(yi)些(xie)，偏酸環境中(zhong)更利(li)於(yu)細胞生長(chang)。因此，我(wo)們在(zai)配制(zhi)培養用液時(shi)，可(ke)把液體的pH稍微調(tiao)得(de)偏酸壹(yi)些(xie)。液體在(zai)經過(guo)0.10um或0.22um濾膜過濾時(shi)，溶液的pH還會向(xiang)上(shang)浮(fu)動(dong)0.2左(zuo)右。

　　人(ren)乳腺(xian)癌(ai)細胞(上皮(pi)粘(zhan)性(xing)蛋白(bai)基(ji)因修飾)質量可(ke)靠，售(shou)後(hou)有(you)保障(zhang)（編(bian)輯：tanxi）