人(ren)乳(ru)腺導(dao)管(guan)癌(ai)細胞(bao)_培(pei)養指南(nan)

非常(chang)讓人(ren)著迷(mi)的(de)實(shi)驗，其(qi)成功(gong)關(guan)鍵(jian)之壹是選(xuan)擇可(ke)信(xin)的實(shi)驗試(shi)劑。

我(wo)司細胞(bao)近(jin)3000種(zhong)，來源(yuan)於(yu)美(mei)國(guo)ATCC,細胞(bao)都(dou)是經(jing)過(guo)嚴(yan)格(ge)質量(liang)控(kong)制，在(zai)中國(guo)大(da)陸(lu)努(nu)力搭(da)建正牌(pai)細胞(bao)與(yu)國(guo)內廣(guang)大(da)科(ke)研人(ren)員(yuan)之間(jian)的溝通(tong)橋(qiao)梁(liang)。為(wei)您(nin)提供(gong)人(ren)乳(ru)腺導(dao)管(guan)癌(ai)細胞(bao)外，還有(you)更(geng)多(duo)相關實(shi)驗產(chan)品(pin)，標(biao)準品，細胞(bao)株和實(shi)驗技(ji)術(shu)服(fu)務等(deng)等(deng)前(qian)期(qi)後續服(fu)務。

人(ren)乳(ru)腺導(dao)管(guan)癌(ai)細胞(bao)的(de)產(chan)品(pin)介(jie)紹(shao)

人(ren)乳(ru)腺導(dao)管(guan)癌(ai)細胞(bao)由(you)我(wo)司*銷(xiao)售(shou)人(ren)乳(ru)腺導(dao)管(guan)癌(ai)細胞(bao)。

人(ren)乳(ru)腺導(dao)管(guan)癌(ai)細胞(bao)細胞(bao)株

　　Q1. 人(ren)乳(ru)腺導(dao)管(guan)癌(ai)細胞(bao)液(ye)體(ti)培(pei)養基的(de)保(bao)存(cun)是冷(leng)藏好？還是冷(leng)凍(dong)好？

　　要(yao)冷(leng)藏！！因為(wei)液(ye)體培(pei)養基經(jing)冷(leng)凍(dong)後再經(jing)溶化(hua)時(shi)，其(qi)溶(rong)液的pH值會(hui)發(fa)生(sheng)改變(bian)，溶(rong)液(ye)往往(wang)變(bian)堿，某些(xie)成分溶(rong)解也會(hui)受到(dao)影(ying)響(xiang)對細胞(bao)生(sheng)長不(bu)利(li)。故液體(ti)培(pei)養基壹定(ding)要(yao)存(cun)放(fang)在(zai)冷(leng)藏箱中，通常(chang)液體(ti)培(pei)養基在(zai)冷(leng)藏條件(jian)下可(ke)存(cun)放(fang)6個月(yue) ~ 壹年。

　　Q2.人(ren)乳(ru)腺導(dao)管(guan)癌(ai)細胞(bao) 液(ye)體(ti)培(pei)養基中(zhong)谷氨(an)酰(xian)胺(an)的作(zuo)用(yong)，及使用(yong)方法(fa)。

　　幾乎(hu)所有(you)的(de)細胞(bao)對谷氨(an)酰(xian)胺(an)有(you)較(jiao)高(gao)的要(yao)求(qiu)，細胞(bao)需(xu)要(yao)谷氨(an)酰(xian)胺(an)合成(cheng)蛋白(bai)質，在(zai)缺少谷氨(an)酰(xian)胺(an)時，細胞(bao)生(sheng)長不(bu)良而(er)死(si)亡。所以，各(ge)種(zhong)培(pei)養液中(zhong)都(dou)含(han)有(you)較(jiao)大(da)量(liang)的(de)谷氨(an)酰(xian)胺(an)。谷氨(an)酰(xian)胺(an)在(zai)溶液(ye)中很不(bu)穩定(ding)，應(ying)置-20 ?C冰(bing)凍(dong)保(bao)存(cun)，用(yong)前(qian)加(jia)入培(pei)養基中(zhong)。加(jia)有(you)谷氨(an)酰(xian)胺(an)的液(ye)體培(pei)養基4 ?C 冰(bing)箱(xiang)儲(chu)存兩(liang)周(zhou)以上(shang)時(shi)，應(ying)重(zhong)新(xin)加(jia)入原來(lai)量(liang)的(de)谷氨(an)酰(xian)胺(an)。基礎(chu)醫學細胞(bao)中(zhong)心在(zai)其服(fu)務項目(mu)中(zhong)配制分裝(zhuang)了高(gao)濃度(du)（100倍(bei)）的谷氨(an)酰(xian)胺(an)溶液(ye)（1ml/支）。每(mei)支1ml的谷氨(an)酰(xian)胺(an)加(jia)到99ml*培(pei)養基中(zhong)，其(qi)終(zhong)濃度為(wei)2mM/ml培(pei)養基。包裝為(wei)粉紅(hong)色(se)，-24?C保(bao)存(cun)。

　　Q3.細胞(bao)計(ji)數(shu)及存活(huo)測(ce)試(shi)
1、原理：
(1)計(ji)算細胞(bao)數(shu)目(mu)可(ke)用(yong)血球(qiu)計(ji)數(shu)盤(pan)或是Coultercounter粒子計(ji)數(shu)器自動(dong)計(ji)數(shu)。
(2)血球(qiu)計(ji)數(shu)盤(pan)壹般有(you)二個chambers，每(mei)個chamber中(zhong)細刻9個1mm2大(da)正(zheng)方(fang)形(xing)，其(qi)中(zhong)4個角(jiao)落之正(zheng)方形(xing)再(zai)細刻16個小(xiao)格(ge)，深度均為(wei)0.1mm。當(dang)chamber上(shang)方(fang)蓋(gai)上(shang)蓋(gai)玻(bo)片後，每個大(da)正(zheng)方(fang)形(xing)之體(ti)積為(wei)1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用(yong)時，計(ji)數(shu)每個大(da)正(zheng)方(fang)形(xing)內(nei)之細胞(bao)數(shu)目(mu)，乘(cheng)以(yi)稀(xi)釋倍(bei)數(shu)，再乘(cheng)以(yi)104，即為(wei)每(mei)ml中之細胞(bao)數(shu)目(mu)。
(3)存(cun)活測(ce)試(shi)之步(bu)驟為(wei)dyeexclusion，利(li)用(yong)染料(liao)會(hui)滲(shen)入死(si)細胞(bao)中(zhong)而(er)呈色(se)，而(er)活(huo)細胞(bao)因細胞(bao)膜(mo)完整(zheng)，染(ran)料(liao)無法(fa)滲入而(er)不(bu)會(hui)呈色(se)。壹般使用(yong)藍色(se)之trypan blue染(ran)料(liao)，如(ru)果(guo)細胞(bao)不(bu)易吸(xi)收(shou)trypan blue，則(ze)用(yong)紅色之Erythrosin bluish。計(ji)算細胞(bao)活(huo)率(lv)：活細胞(bao)數(shu)/(活細胞(bao)數(shu)+死(si)細胞(bao)數(shu))×100%。計(ji)數(shu)應在(zai)臺(tai)盼蘭染(ran)色(se)後數(shu)分鐘(zhong)內完成(cheng)，隨時(shi)間(jian)延長(chang)，部(bu)分活(huo)細胞(bao)也開始(shi)攝(she)取(qu)染(ran)料(liao);因為(wei)臺(tai)盼蘭對蛋(dan)白質有(you)很(hen)強(qiang)的(de)親(qin)和力(li)，用(yong)不(bu)含血清的(de)稀釋(shi)液(ye)，可(ke)以(yi)使染色(se)計(ji)數(shu)更為(wei)準(zhun)確。

　　Q4.細胞(bao)特(te)性
在(zai)細胞(bao)培(pei)養之前(qian)，我(wo)們要(yao)了(le)解(jie)壹下妳(ni)所要(yao)養細胞(bao)的(de)基(ji)本特(te)性，這(zhe)點可(ke)以(yi)從(cong)細胞(bao)的(de)產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書或者從(cong)ATCC細胞(bao)庫查詢(xun)。除此之外我(wo)們還要(yao)知(zhi)道每(mei)管(guan)細胞(bao)的(de)數(shu)量(liang)，建議(yi)分裂(lie)或傳代(dai)的比例(li)，和(he)已(yi)知(zhi)細胞(bao)的(de)傳(chuan)代代(dai)次(ci)等(deng)信(xin)息(xi)。

　　Q5.準備(bei)培(pei)養基
復(fu)蘇細胞(bao)時(shi)需(xu)要(yao)準(zhun)備(bei)合適的培(pei)養基，血清和(he)細胞(bao)生(sheng)長所需的(de)添加(jia)劑。大(da)部(bu)分培(pei)養細胞(bao)所用(yong)的培(pei)養體系(xi)，可(ke)以(yi)在(zai)訂購(gou)細胞(bao)系(xi)時(shi)獲得(de)。
雖然大(da)多(duo)數(shu)細胞(bao)系(xi)可(ke)以(yi)在(zai)不(bu)止(zhi)壹種(zhong)培(pei)養基中(zhong)生(sheng)長，但是當(dang)培(pei)養基改變(bian)時(shi)，細胞(bao)的(de)性質也會(hui)變(bian)化(hua)。因此，使用(yong)細胞(bao)庫推薦(jian)的(de)培(pei)養基來(lai)培(pei)養細胞(bao)會(hui)獲(huo)得(de)的效果。

　　Q6.開啟(qi)凍(dong)存管(guan)
1.準(zhun)備(bei)壹個培(pei)養瓶(ping)，加(jia)入適宜(yi)細胞(bao)培(pei)養的培(pei)養基，液(ye)體(ti)體(ti)積按照說(shuo)明(ming)書的推(tui)薦(jian)配置，並平衡(heng)培(pei)養基的(de)溫(wen)度(du)和pH（CO2）。　
2.在(zai)37℃水浴(yu)中或細胞(bao)的(de)正(zheng)常(chang)生(sheng)長溫(wen)度(du)下將(jiang)凍(dong)存管(guan)輕(qing)輕(qing)搖(yao)動。解(jie)凍(dong)要(yao)快(kuai)，約2分鐘(zhong)或直(zhi)到(dao)冰(bing)晶融化(hua)即可(ke)。
3.從(cong)水(shui)浴(yu)中取(qu)出(chu)凍(dong)存管(guan)並用(yong)浸泡(pao)或噴(pen)灑70%乙醇的方式來(lai)消毒(du)。進壹步的(de)操作(zuo)均需(xu)在(zai)無菌操作(zuo)臺(tai)中嚴(yan)格(ge)無菌條(tiao)件(jian)下進行(xing)。
4.擰開凍(dong)存管(guan)的(de)管(guan)帽(mao)並將內(nei)容物(wu)轉(zhuan)移(yi)到(dao)壹個含(han)有(you)9 ml推(tui)薦(jian)培(pei)養基的(de)無(wu)菌離心管中(zhong)。通過(guo)溫(wen)和(he)離心（125×g 10 min）除去(qu)冷(leng)凍(dong)保(bao)護(hu)劑(ji)（DMSO）。棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)，並用(yong)1或2 ml*培(pei)養基重(zhong)懸(xuan)細胞(bao)。將(jiang)這(zhe)些(xie)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)到(dao)含(han)有(you)*培(pei)養基的(de)培(pei)養瓶(ping)中(zhong)並輕(qing)輕(qing)搖(yao)動以(yi)*混(hun)勻(yun)。
5.培(pei)養24小時(shi)後檢查(zha)細胞(bao)狀態並在(zai)需要(yao)時(shi)進行(xing)傳代(dai)。

　　Q7. 人(ren)乳(ru)腺導(dao)管(guan)癌(ai)細胞(bao) 培(pei)養用(yong)液pH對細胞(bao)生(sheng)長的(de)影(ying)響(xiang)

　　由(you)於，大(da)多(duo)數(shu)細胞(bao)適宜(yi)pH為(wei)7.2~7.4，偏(pian)離此範圍(wei)對細胞(bao)將(jiang)產(chan)生(sheng)有(you)害(hai)的(de)影(ying)響(xiang)。各(ge)種(zhong)細胞(bao)對pH的(de)要(yao)求(qiu)也不(bu)*相同(tong)，原(yuan)代(dai)培(pei)養細胞(bao)壹般對pH變(bian)動耐受差(cha)，無(wu)限細胞(bao)系(xi)耐受力(li)強(qiang)。

　　但總體(ti)來說(shuo)，細胞(bao)耐酸(suan)性比耐堿性強(qiang)壹些(xie)，偏酸環(huan)境中更利(li)於細胞(bao)生(sheng)長。因此，我(wo)們在(zai)配制培(pei)養用(yong)液時，可(ke)把(ba)液(ye)體的pH稍微(wei)調(tiao)得偏(pian)酸壹些(xie)。液體在(zai)經過(guo)0.10um或0.22um濾膜(mo)過濾時，溶(rong)液的(de)pH還會(hui)向(xiang)上(shang)浮(fu)動(dong)0.2左(zuo)右(you)。

　　人(ren)乳(ru)腺導(dao)管(guan)癌(ai)細胞(bao)質量(liang)可(ke)靠，售(shou)後有(you)保(bao)障（編輯：tanxi）