人(ren)食(shi)管(guan)平(ping)滑肌(ji)細胞_ 實驗(yan)

非常(chang)讓人(ren)著(zhe)迷的實(shi)驗(yan)，其(qi)成功(gong)關(guan)鍵之(zhi)壹(yi)是選(xuan)擇(ze)可(ke)信的實驗(yan)試(shi)劑。

我(wo)司(si)細(xi)胞近3000種(zhong)，來源(yuan)於(yu)美國ATCC,細(xi)胞都是經(jing)過(guo)嚴格質量控制(zhi)，在(zai)中國大(da)陸努力搭(da)建正(zheng)牌(pai)細胞與國(guo)內(nei)廣大(da)科(ke)研人(ren)員之(zhi)間的(de)溝通(tong)橋梁(liang)。為(wei)您(nin)提供人食(shi)管(guan)平(ping)滑肌(ji)細胞外(wai)，還(hai)有(you)更多相(xiang)關(guan)實驗(yan)產(chan)品(pin)，標(biao)準品(pin)，細胞株(zhu)和實(shi)驗(yan)技(ji)術(shu)服(fu)務等等前(qian)期後(hou)續服(fu)務。

人(ren)食管(guan)平(ping)滑肌(ji)細胞的產(chan)品(pin)介紹(shao)

人(ren)食(shi)管(guan)平(ping)滑肌(ji)細胞由(you)我(wo)司(si)*銷(xiao)售(shou)人(ren)食管(guan)平(ping)滑肌(ji)細胞。

人(ren)食管(guan)平(ping)滑肌(ji)細胞細胞株(zhu)

　　Q1. 人食(shi)管(guan)平(ping)滑肌(ji)細胞液體培(pei)養(yang)基的(de)保(bao)存是冷(leng)藏好(hao)？還(hai)是冷(leng)凍(dong)好？

　　要冷(leng)藏！！因(yin)為(wei)液體培(pei)養(yang)基經(jing)冷(leng)凍(dong)後(hou)再經(jing)溶(rong)化(hua)時，其(qi)溶(rong)液的pH值會發(fa)生改(gai)變(bian)，溶(rong)液往(wang)往(wang)變(bian)堿(jian)，某(mou)些(xie)成分(fen)溶(rong)解也(ye)會受(shou)到(dao)影(ying)響(xiang)對細胞生長不(bu)利(li)。故液體培(pei)養(yang)基壹(yi)定要存(cun)放在(zai)冷(leng)藏箱(xiang)中，通常(chang)液體培(pei)養(yang)基在(zai)冷(leng)藏條(tiao)件(jian)下可(ke)存(cun)放(fang)6個月 ~ 壹(yi)年。

　　Q2.人食(shi)管(guan)平(ping)滑肌(ji)細胞 液體培(pei)養(yang)基中谷(gu)氨(an)酰胺的作(zuo)用，及(ji)使用方法。

　　幾(ji)乎所(suo)有(you)的細(xi)胞對谷(gu)氨(an)酰胺有(you)較高(gao)的要求，細胞需要谷(gu)氨(an)酰胺合(he)成蛋白質，在(zai)缺少谷(gu)氨(an)酰胺時，細(xi)胞生長不(bu)良(liang)而(er)死(si)亡(wang)。所以，各種(zhong)培(pei)養(yang)液中都含有(you)較大(da)量的谷(gu)氨(an)酰胺。谷(gu)氨(an)酰胺在(zai)溶(rong)液中很不(bu)穩定，應置(zhi)-20 ?C冰凍保(bao)存，用前(qian)加入培(pei)養(yang)基中。加有(you)谷(gu)氨(an)酰胺的液體培(pei)養(yang)基4 ?C 冰(bing)箱(xiang)儲存(cun)兩(liang)周以(yi)上時，應(ying)重(zhong)新加入原(yuan)來(lai)量的谷(gu)氨(an)酰胺。基礎(chu)醫學(xue)細(xi)胞中心在(zai)其(qi)服(fu)務項目中配制(zhi)分(fen)裝(zhuang)了(le)高濃(nong)度（100倍(bei)）的谷(gu)氨(an)酰胺溶(rong)液（1ml/支）。每支1ml的谷(gu)氨(an)酰胺加到(dao)99ml*培(pei)養(yang)基中，其終(zhong)濃度為2mM/ml培(pei)養(yang)基。包(bao)裝(zhuang)為(wei)粉紅(hong)色，-24?C保存(cun)。

　　Q3.細胞計數(shu)及(ji)存活測試
1、原(yuan)理：
(1)計算(suan)細胞數(shu)目可(ke)用(yong)血(xue)球(qiu)計數(shu)盤或是Coultercounter粒(li)子(zi)計(ji)數(shu)器自動計(ji)數(shu)。
(2)血(xue)球(qiu)計數(shu)盤壹(yi)般有(you)二個(ge)chambers，每個(ge)chamber中細刻(ke)9個1mm2大(da)正(zheng)方形，其(qi)中4個角落之(zhi)正方形再細刻16個小(xiao)格，深(shen)度均(jun)為(wei)0.1mm。當(dang)chamber上方蓋上蓋玻(bo)片(pian)後(hou)，每個大(da)正(zheng)方形之(zhi)體積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使(shi)用時，計(ji)數(shu)每個(ge)大(da)正(zheng)方形內(nei)之(zhi)細胞數(shu)目，乘(cheng)以稀釋倍(bei)數(shu)，再乘(cheng)以104，即為每(mei)ml中之(zhi)細胞數(shu)目。
(3)存(cun)活測(ce)試之(zhi)步驟為(wei)dyeexclusion，利(li)用(yong)染(ran)料(liao)會滲(shen)入死(si)細(xi)胞中而(er)呈(cheng)色，而(er)活(huo)細胞因細(xi)胞膜完整，染料(liao)無法滲(shen)入而(er)不(bu)會呈(cheng)色。壹(yi)般使用藍(lan)色之(zhi)trypan blue染料(liao)，如果細(xi)胞不易(yi)吸收(shou)trypan blue，則用紅(hong)色之(zhi)Erythrosin bluish。計算(suan)細胞活率(lv)：活細(xi)胞數(shu)/(活細(xi)胞數(shu)+死(si)細(xi)胞數(shu))×100%。計數(shu)應在(zai)臺(tai)盼(pan)蘭染(ran)色後(hou)數(shu)分(fen)鐘內(nei)完成，隨(sui)時間(jian)延長，部(bu)分(fen)活細(xi)胞也(ye)開(kai)始(shi)攝(she)取染料(liao);因為臺(tai)盼(pan)蘭對蛋白質有(you)很強的(de)親(qin)和力，用(yong)不含血(xue)清(qing)的稀釋液，可(ke)以(yi)使(shi)染色計數(shu)更為(wei)準確(que)。

　　Q4.細(xi)胞特性
在(zai)細(xi)胞培(pei)養(yang)之(zhi)前(qian)，我(wo)們(men)要了(le)解壹(yi)下妳(ni)所(suo)要養(yang)細胞的基本(ben)特(te)性，這(zhe)點可(ke)以(yi)從(cong)細胞的產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書(shu)或者從(cong)ATCC細胞庫查(zha)詢。除此之(zhi)外(wai)我(wo)們(men)還(hai)要知(zhi)道每管(guan)細(xi)胞的數(shu)量，建議(yi)分(fen)裂或傳代(dai)的比(bi)例(li)，和(he)已(yi)知細胞的傳(chuan)代(dai)代(dai)次等信息。

　　Q5.準備(bei)培(pei)養(yang)基
復蘇細胞時需(xu)要準備(bei)合(he)適的培(pei)養(yang)基，血(xue)清(qing)和細(xi)胞生長所(suo)需(xu)的添(tian)加劑。大(da)部(bu)分(fen)培(pei)養(yang)細(xi)胞所用(yong)的培(pei)養(yang)體(ti)系(xi)，可(ke)以(yi)在(zai)訂(ding)購細胞系(xi)時獲(huo)得(de)。
雖(sui)然(ran)大(da)多數(shu)細胞系(xi)可(ke)以(yi)在(zai)不(bu)止(zhi)壹(yi)種(zhong)培(pei)養(yang)基中生長，但是當(dang)培(pei)養(yang)基改(gai)變(bian)時，細(xi)胞的性質也(ye)會變(bian)化(hua)。因此(ci)，使用細胞庫推薦(jian)的培(pei)養(yang)基來(lai)培(pei)養(yang)細(xi)胞會獲(huo)得(de)的(de)效(xiao)果(guo)。

　　Q6.開(kai)啟凍存(cun)管(guan)
1.準備(bei)壹(yi)個培(pei)養(yang)瓶，加入適宜細(xi)胞培(pei)養(yang)的(de)培(pei)養(yang)基，液體體積按照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)的推薦(jian)配置(zhi)，並平衡(heng)培(pei)養(yang)基的(de)溫度和pH（CO2）。　
2.在(zai)37℃水浴中或細胞的正(zheng)常生長溫度下將(jiang)凍(dong)存管(guan)輕輕搖(yao)動。解凍(dong)要快(kuai)，約(yue)2分(fen)鐘或直到(dao)冰晶融(rong)化即可(ke)。
3.從(cong)水浴中取出凍存(cun)管(guan)並(bing)用浸泡(pao)或噴灑(sa)70%乙(yi)醇(chun)的方式來(lai)消毒(du)。進(jin)壹(yi)步的操作均(jun)需(xu)在(zai)無菌操作臺(tai)中嚴格無菌條件下進(jin)行。
4.擰(ning)開(kai)凍(dong)存管(guan)的(de)管(guan)帽(mao)並將(jiang)內(nei)容(rong)物(wu)轉移(yi)到壹(yi)個含有(you)9 ml推薦(jian)培(pei)養(yang)基的(de)無菌離(li)心管(guan)中。通過(guo)溫和(he)離(li)心（125×g 10 min）除去冷(leng)凍(dong)保護(hu)劑（DMSO）。棄(qi)去(qu)上清，並用1或2 ml*培(pei)養(yang)基重(zhong)懸(xuan)細胞。將(jiang)這(zhe)些(xie)細(xi)胞懸液轉移(yi)到含有(you)*培(pei)養(yang)基的(de)培(pei)養(yang)瓶中並輕輕搖(yao)動以(yi)*混勻。
5.培(pei)養(yang)24小(xiao)時後(hou)檢(jian)查細(xi)胞狀態(tai)並(bing)在(zai)需(xu)要時進(jin)行傳代(dai)。

　　Q7. 人食(shi)管(guan)平(ping)滑肌(ji)細胞 培(pei)養(yang)用(yong)液pH對細胞生長的(de)影(ying)響(xiang)

　　由(you)於(yu)，大(da)多數(shu)細胞適宜pH為(wei)7.2~7.4，偏(pian)離(li)此範(fan)圍對細胞將(jiang)產(chan)生有(you)害的(de)影(ying)響(xiang)。各種(zhong)細胞對pH的要求也(ye)不(bu)*相(xiang)同，原(yuan)代(dai)培(pei)養(yang)細(xi)胞壹(yi)般對pH變動耐(nai)受差，無限細(xi)胞系(xi)耐(nai)受力強。

　　但總(zong)體(ti)來(lai)說(shuo)，細(xi)胞耐酸(suan)性比(bi)耐(nai)堿(jian)性強壹(yi)些(xie)，偏(pian)酸(suan)環境(jing)中更利(li)於(yu)細胞生長。因(yin)此(ci)，我(wo)們(men)在(zai)配(pei)制(zhi)培(pei)養(yang)用(yong)液時，可(ke)把(ba)液體的pH稍微(wei)調(tiao)得(de)偏(pian)酸(suan)壹(yi)些(xie)。液體在(zai)經(jing)過(guo)0.10um或0.22um濾膜過(guo)濾時，溶(rong)液的pH還(hai)會向(xiang)上浮動0.2左(zuo)右(you)。

　　人(ren)食(shi)管(guan)平(ping)滑肌(ji)細胞質量可(ke)靠(kao)，售(shou)後(hou)有(you)保障(zhang)（編輯：tanxi）