人(ren)食(shi)管(guan)上(shang)皮細胞(bao)_培養(yang)指(zhi)南

非(fei)常(chang)讓(rang)人(ren)著迷的(de)實(shi)驗(yan)，其(qi)成(cheng)功(gong)關(guan)鍵(jian)之(zhi)壹(yi)是選擇可信的(de)實(shi)驗(yan)試劑(ji)。

我(wo)司細胞(bao)近3000種(zhong)，來(lai)源(yuan)於美國(guo)ATCC,細胞(bao)都是經過(guo)嚴(yan)格(ge)質(zhi)量(liang)控(kong)制，在中(zhong)國(guo)大陸(lu)努力搭(da)建正(zheng)牌(pai)細胞(bao)與國(guo)內廣大科(ke)研人員之間(jian)的(de)溝通(tong)橋(qiao)梁(liang)。為(wei)您提供人(ren)食(shi)管(guan)上(shang)皮細胞(bao)外，還(hai)有更(geng)多相關(guan)實(shi)驗(yan)產(chan)品(pin)，標(biao)準(zhun)品(pin)，細胞(bao)株和(he)實驗(yan)技(ji)術服務等(deng)等(deng)前期(qi)後續(xu)服務。

人食(shi)管(guan)上(shang)皮細胞(bao)的(de)產(chan)品(pin)介(jie)紹

人(ren)食(shi)管(guan)上(shang)皮細胞(bao)由(you)我(wo)司*銷售人食(shi)管(guan)上(shang)皮細胞(bao)。

人(ren)食(shi)管(guan)上(shang)皮細胞(bao)細胞(bao)株

　　Q1. 人食(shi)管(guan)上(shang)皮細胞(bao)液體(ti)培(pei)養(yang)基的(de)保存是冷(leng)藏好(hao)？還是冷凍好(hao)？

　　要冷(leng)藏！！因(yin)為(wei)液體(ti)培(pei)養基經冷凍後再經溶(rong)化(hua)時(shi)，其溶(rong)液(ye)的(de)pH值(zhi)會(hui)發(fa)生改變，溶(rong)液(ye)往往變堿，某(mou)些(xie)成(cheng)分(fen)溶(rong)解(jie)也(ye)會(hui)受(shou)到影(ying)響(xiang)對細胞(bao)生長不利。故(gu)液體培(pei)養(yang)基壹(yi)定要存(cun)放(fang)在(zai)冷藏箱(xiang)中(zhong)，通常(chang)液體培(pei)養基在冷藏條(tiao)件下(xia)可存(cun)放(fang)6個(ge)月 ~ 壹(yi)年(nian)。

　　Q2.人食(shi)管(guan)上(shang)皮細胞(bao) 液體(ti)培(pei)養(yang)基中(zhong)谷氨(an)酰(xian)胺的(de)作用，及使(shi)用(yong)方法(fa)。

　　幾乎(hu)所有(you)的(de)細胞(bao)對谷氨(an)酰(xian)胺有(you)較(jiao)高的(de)要求(qiu)，細胞(bao)需要谷氨(an)酰(xian)胺合(he)成(cheng)蛋白質，在缺少谷氨(an)酰(xian)胺時(shi)，細胞(bao)生長不良(liang)而(er)死亡。所以(yi)，各(ge)種(zhong)培(pei)養(yang)液(ye)中(zhong)都含(han)有(you)較大量(liang)的(de)谷氨(an)酰(xian)胺。谷氨(an)酰(xian)胺在(zai)溶(rong)液(ye)中(zhong)很不穩定，應(ying)置(zhi)-20 ?C冰凍保存，用前加(jia)入培養(yang)基中(zhong)。加有谷氨(an)酰(xian)胺的(de)液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)基4 ?C 冰箱(xiang)儲(chu)存兩周(zhou)以(yi)上(shang)時(shi)，應(ying)重新(xin)加(jia)入原(yuan)來(lai)量(liang)的(de)谷氨(an)酰(xian)胺。基礎醫學細胞(bao)中(zhong)心在(zai)其服務項目(mu)中(zhong)配制分(fen)裝(zhuang)了(le)高(gao)濃(nong)度(du)（100倍(bei)）的(de)谷氨(an)酰(xian)胺溶(rong)液(ye)（1ml/支）。每支1ml的(de)谷氨(an)酰(xian)胺加(jia)到(dao)99ml*培養(yang)基中(zhong)，其終濃度為(wei)2mM/ml培養(yang)基。包裝(zhuang)為(wei)粉紅(hong)色(se)，-24?C保存。

　　Q3.細胞(bao)計數及存活測試
1、原(yuan)理(li)：
(1)計算(suan)細胞(bao)數目(mu)可用(yong)血球(qiu)計數盤(pan)或是(shi)Coultercounter粒子(zi)計數器(qi)自(zi)動計數。
(2)血球(qiu)計數盤(pan)壹(yi)般有(you)二(er)個chambers，每(mei)個chamber中(zhong)細刻(ke)9個(ge)1mm2大正(zheng)方形，其(qi)中(zhong)4個角落之正(zheng)方形再細刻(ke)16個(ge)小(xiao)格，深(shen)度(du)均(jun)為(wei)0.1mm。當(dang)chamber上(shang)方蓋上(shang)蓋玻(bo)片(pian)後，每個(ge)大正(zheng)方形之(zhi)體積為(wei)1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使(shi)用(yong)時(shi)，計數每(mei)個(ge)大正(zheng)方形內之細胞(bao)數目(mu)，乘(cheng)以(yi)稀釋倍(bei)數，再乘(cheng)以(yi)104，即為(wei)每ml中(zhong)之細胞(bao)數目(mu)。
(3)存(cun)活測試之(zhi)步(bu)驟為(wei)dyeexclusion，利用(yong)染料會(hui)滲(shen)入死細胞(bao)中(zhong)而(er)呈色(se)，而(er)活細胞(bao)因細胞(bao)膜(mo)完(wan)整(zheng)，染料無法(fa)滲(shen)入而(er)不會呈色(se)。壹(yi)般使(shi)用(yong)藍(lan)色(se)之(zhi)trypan blue染料，如果(guo)細胞(bao)不易吸收(shou)trypan blue，則(ze)用紅(hong)色(se)之(zhi)Erythrosin bluish。計算(suan)細胞(bao)活率：活細胞(bao)數/(活細胞(bao)數+死細胞(bao)數)×100%。計數應(ying)在(zai)臺(tai)盼(pan)蘭染色(se)後(hou)數(shu)分(fen)鐘內完成(cheng)，隨(sui)時(shi)間(jian)延(yan)長，部(bu)分(fen)活細胞(bao)也開始攝取(qu)染料;因(yin)為(wei)臺(tai)盼(pan)蘭對蛋白質有很強的(de)親(qin)和(he)力，用不含(han)血清的(de)稀釋液(ye)，可以(yi)使(shi)染色(se)計數更(geng)為(wei)準(zhun)確(que)。

　　Q4.細胞(bao)特(te)性
在(zai)細胞(bao)培養(yang)之(zhi)前，我(wo)們要了(le)解(jie)壹(yi)下(xia)妳所要養(yang)細胞(bao)的(de)基本特(te)性，這點(dian)可以(yi)從(cong)細胞(bao)的(de)產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書或者(zhe)從ATCC細胞(bao)庫查(zha)詢(xun)。除(chu)此(ci)之(zhi)外我(wo)們還(hai)要知(zhi)道每(mei)管(guan)細胞(bao)的(de)數(shu)量(liang)，建(jian)議分(fen)裂或傳代的(de)比(bi)例，和(he)已(yi)知(zhi)細胞(bao)的(de)傳代代次等(deng)信息(xi)。

　　Q5.準(zhun)備(bei)培(pei)養(yang)基
復(fu)蘇細胞(bao)時(shi)需要準(zhun)備(bei)合(he)適的(de)培(pei)養(yang)基，血清和(he)細胞(bao)生長所需(xu)的(de)添加劑(ji)。大部(bu)分(fen)培養(yang)細胞(bao)所用(yong)的(de)培(pei)養(yang)體(ti)系(xi)，可以(yi)在(zai)訂購(gou)細胞(bao)系(xi)時(shi)獲(huo)得(de)。
雖然(ran)大多(duo)數(shu)細胞(bao)系(xi)可以(yi)在(zai)不止壹(yi)種(zhong)培(pei)養(yang)基中(zhong)生長，但(dan)是(shi)當(dang)培養基改變時(shi)，細胞(bao)的(de)性(xing)質(zhi)也(ye)會(hui)變化。因(yin)此(ci)，使(shi)用(yong)細胞(bao)庫推(tui)薦的(de)培(pei)養(yang)基來(lai)培(pei)養細胞(bao)會獲(huo)得(de)的(de)效(xiao)果(guo)。

　　Q6.開啟(qi)凍存管(guan)
1.準(zhun)備(bei)壹(yi)個培養瓶，加(jia)入適宜細胞(bao)培養(yang)的(de)培(pei)養(yang)基，液體體積按照(zhao)說明書的(de)推(tui)薦配(pei)置(zhi)，並平衡培(pei)養(yang)基的(de)溫(wen)度和(he)pH（CO2）。　
2.在37℃水(shui)浴中(zhong)或細胞(bao)的(de)正(zheng)常(chang)生長溫(wen)度下(xia)將(jiang)凍存管(guan)輕(qing)輕搖(yao)動(dong)。解凍要快(kuai)，約(yue)2分(fen)鐘或直到冰晶(jing)融(rong)化即可。
3.從(cong)水(shui)浴中(zhong)取(qu)出凍存管(guan)並用浸泡或噴(pen)灑70%乙(yi)醇的(de)方式來(lai)消(xiao)毒。進(jin)壹(yi)步(bu)的(de)操(cao)作均需(xu)在(zai)無菌操作臺(tai)中(zhong)嚴(yan)格(ge)無菌條(tiao)件下(xia)進(jin)行。
4.擰(ning)開凍存管(guan)的(de)管(guan)帽(mao)並將內容物轉移(yi)到壹(yi)個含(han)有(you)9 ml推薦培(pei)養(yang)基的(de)無菌離心管(guan)中(zhong)。通過(guo)溫(wen)和(he)離心（125×g 10 min）除(chu)去冷凍保護劑(ji)（DMSO）。棄去(qu)上(shang)清，並用1或2 ml*培(pei)養基重懸(xuan)細胞(bao)。將這些細胞(bao)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)到(dao)含(han)有(you)*培養基的(de)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)並輕輕(qing)搖(yao)動(dong)以*混勻(yun)。
5.培養(yang)24小(xiao)時(shi)後檢(jian)查(zha)細胞(bao)狀態(tai)並在需(xu)要時(shi)進行傳代。

　　Q7. 人食(shi)管(guan)上(shang)皮細胞(bao) 培養(yang)用(yong)液(ye)pH對細胞(bao)生長的(de)影(ying)響(xiang)

　　由(you)於，大多(duo)數(shu)細胞(bao)適宜pH為(wei)7.2~7.4，偏離(li)此(ci)範(fan)圍(wei)對細胞(bao)將產(chan)生(sheng)有(you)害的(de)影(ying)響(xiang)。各(ge)種(zhong)細胞(bao)對pH的(de)要求(qiu)也(ye)不*相同(tong)，原(yuan)代培養(yang)細胞(bao)壹(yi)般對pH變動耐(nai)受(shou)差，無限(xian)細胞(bao)系(xi)耐受(shou)力強。

　　但(dan)總(zong)體來(lai)說(shuo)，細胞(bao)耐酸(suan)性(xing)比(bi)耐(nai)堿(jian)性強壹(yi)些，偏酸環(huan)境中(zhong)更利於細胞(bao)生長。因此(ci)，我(wo)們在(zai)配制培養(yang)用液(ye)時(shi)，可把(ba)液(ye)體的(de)pH稍(shao)微(wei)調(tiao)得(de)偏酸(suan)壹(yi)些。液體在經過(guo)0.10um或0.22um濾膜(mo)過(guo)濾時(shi)，溶(rong)液(ye)的(de)pH還(hai)會(hui)向(xiang)上(shang)浮動(dong)0.2左右(you)。

　　人食(shi)管(guan)上(shang)皮細胞(bao)質量(liang)可靠(kao)，售後有(you)保障（編(bian)輯：tanxi）