人視網(wang)膜(mo)母(mu)細(xi)胞(bao)_ 實(shi)驗(yan)

非常(chang)讓(rang)人著(zhe)迷(mi)的實驗(yan)，其成功關鍵(jian)之壹(yi)是(shi)選擇(ze)可(ke)信(xin)的實驗(yan)試劑。

我(wo)司(si)細(xi)胞(bao)近(jin)3000種，來源(yuan)於(yu)美(mei)國(guo)ATCC,細(xi)胞(bao)都(dou)是(shi)經(jing)過嚴(yan)格(ge)質(zhi)量(liang)控制(zhi)，在中(zhong)國(guo)大陸(lu)努力搭(da)建正(zheng)牌(pai)細(xi)胞(bao)與國(guo)內(nei)廣(guang)大科(ke)研(yan)人員之間的溝(gou)通橋梁(liang)。為(wei)您提(ti)供人視網(wang)膜(mo)母(mu)細(xi)胞(bao)外，還有更多(duo)相關實驗(yan)產品，標準(zhun)品，細(xi)胞(bao)株(zhu)和實(shi)驗(yan)技術(shu)服(fu)務等(deng)等(deng)前(qian)期(qi)後續(xu)服(fu)務。

人視網(wang)膜(mo)母(mu)細(xi)胞(bao)的產品介紹

人視網(wang)膜(mo)母(mu)細(xi)胞(bao)由我(wo)司(si)*銷售人視網(wang)膜(mo)母(mu)細(xi)胞(bao)。

人視網(wang)膜(mo)母(mu)細(xi)胞(bao)細(xi)胞(bao)株(zhu)

　　Q1. 人視網(wang)膜(mo)母(mu)細(xi)胞(bao)液(ye)體培養基的保存(cun)是(shi)冷藏好(hao)？還(hai)是(shi)冷凍(dong)好(hao)？

　　要冷藏！！因(yin)為(wei)液體培養基經(jing)冷凍(dong)後(hou)再經(jing)溶化(hua)時(shi)，其(qi)溶液的pH值(zhi)會(hui)發(fa)生改(gai)變(bian)，溶液往(wang)往(wang)變堿(jian)，某(mou)些(xie)成分溶解也會(hui)受到(dao)影(ying)響對細(xi)胞(bao)生長(chang)不(bu)利。故(gu)液(ye)體(ti)培養基壹(yi)定(ding)要(yao)存(cun)放(fang)在冷(leng)藏箱(xiang)中(zhong)，通常(chang)液體(ti)培養基在冷藏條(tiao)件(jian)下可(ke)存(cun)放(fang)6個月 ~ 壹(yi)年。

　　Q2.人視網(wang)膜(mo)母(mu)細(xi)胞(bao) 液(ye)體培養基中(zhong)谷氨酰(xian)胺(an)的作(zuo)用，及(ji)使(shi)用方(fang)法(fa)。

　　幾(ji)乎所有的細(xi)胞(bao)對谷氨酰(xian)胺(an)有較高的要求，細(xi)胞(bao)需(xu)要(yao)谷氨酰(xian)胺(an)合成蛋白質(zhi)，在缺少谷氨酰(xian)胺(an)時(shi)，細(xi)胞(bao)生長(chang)不(bu)良而死亡。所以，各(ge)種培養液中(zhong)都(dou)含有較大(da)量(liang)的谷氨酰(xian)胺(an)。谷氨酰(xian)胺(an)在溶液中(zhong)很(hen)不穩定，應(ying)置(zhi)-20 ?C冰(bing)凍(dong)保(bao)存(cun)，用前(qian)加(jia)入(ru)培養基中(zhong)。加(jia)有谷氨酰(xian)胺(an)的液體(ti)培養基4 ?C 冰(bing)箱儲存(cun)兩周以上(shang)時(shi)，應(ying)重(zhong)新加入(ru)原(yuan)來量(liang)的谷氨酰(xian)胺(an)。基礎醫(yi)學細(xi)胞(bao)中(zhong)心(xin)在其(qi)服(fu)務項目中(zhong)配(pei)制(zhi)分裝了(le)高濃(nong)度(du)（100倍）的谷氨酰(xian)胺(an)溶液（1ml/支）。每支1ml的谷氨酰(xian)胺(an)加到99ml*培養基中(zhong)，其(qi)終(zhong)濃(nong)度(du)為(wei)2mM/ml培養基。包(bao)裝為(wei)粉紅色(se)，-24?C保存(cun)。

　　Q3.細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)及(ji)存(cun)活測(ce)試
1、原(yuan)理(li)：
(1)計(ji)算細(xi)胞(bao)數(shu)目可(ke)用血球計(ji)數(shu)盤(pan)或(huo)是(shi)Coultercounter粒子計(ji)數(shu)器自動計(ji)數(shu)。
(2)血球計(ji)數(shu)盤(pan)壹(yi)般(ban)有二(er)個chambers，每(mei)個(ge)chamber中(zhong)細(xi)刻(ke)9個1mm2大(da)正(zheng)方(fang)形(xing)，其中(zhong)4個(ge)角(jiao)落(luo)之正(zheng)方(fang)形(xing)再細(xi)刻(ke)16個小格(ge)，深度(du)均(jun)為(wei)0.1mm。當chamber上方(fang)蓋(gai)上蓋(gai)玻片後，每(mei)個(ge)大正(zheng)方(fang)形(xing)之體積為(wei)1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使(shi)用時(shi)，計(ji)數(shu)每(mei)個(ge)大正(zheng)方(fang)形(xing)內之細(xi)胞(bao)數(shu)目，乘以稀釋倍數，再(zai)乘以104，即為(wei)每ml中(zhong)之細(xi)胞(bao)數(shu)目。
(3)存(cun)活測(ce)試之步驟為(wei)dyeexclusion，利用染(ran)料(liao)會(hui)滲(shen)入死細(xi)胞(bao)中(zhong)而(er)呈(cheng)色(se)，而活細(xi)胞(bao)因(yin)細(xi)胞(bao)膜(mo)完整(zheng)，染料(liao)無法(fa)滲(shen)入而(er)不(bu)會(hui)呈(cheng)色(se)。壹(yi)般(ban)使(shi)用藍色(se)之trypan blue染料，如(ru)果細(xi)胞(bao)不(bu)易(yi)吸收(shou)trypan blue，則(ze)用紅色(se)之Erythrosin bluish。計(ji)算細(xi)胞(bao)活率：活細(xi)胞(bao)數(shu)/(活細(xi)胞(bao)數(shu)+死細(xi)胞(bao)數(shu))×100%。計(ji)數(shu)應(ying)在(zai)臺盼蘭(lan)染(ran)色(se)後數(shu)分鐘(zhong)內(nei)完(wan)成，隨時(shi)間(jian)延(yan)長(chang)，部(bu)分活細(xi)胞(bao)也開始(shi)攝(she)取(qu)染料;因(yin)為(wei)臺盼蘭(lan)對蛋白質(zhi)有很強(qiang)的親(qin)和力(li)，用不(bu)含血清的稀釋液(ye)，可(ke)以(yi)使(shi)染(ran)色(se)計(ji)數(shu)更(geng)為(wei)準(zhun)確。

　　Q4.細(xi)胞(bao)特(te)性(xing)
在細(xi)胞(bao)培養之前(qian)，我(wo)們(men)要(yao)了(le)解壹(yi)下妳所要養(yang)細(xi)胞(bao)的基本特(te)性(xing)，這點可(ke)以(yi)從(cong)細(xi)胞(bao)的產品說明書(shu)或(huo)者(zhe)從(cong)ATCC細(xi)胞(bao)庫(ku)查(zha)詢(xun)。除(chu)此之外我(wo)們(men)還(hai)要(yao)知(zhi)道(dao)每(mei)管細(xi)胞(bao)的數量(liang)，建議(yi)分裂或傳(chuan)代(dai)的比(bi)例，和(he)已(yi)知(zhi)細(xi)胞(bao)的傳代(dai)代(dai)次等(deng)信息。

　　Q5.準(zhun)備培養基
復蘇(su)細(xi)胞(bao)時(shi)需(xu)要(yao)準(zhun)備合適(shi)的培養基，血清和細(xi)胞(bao)生長(chang)所需(xu)的添(tian)加劑(ji)。大(da)部(bu)分培養細(xi)胞(bao)所用的培養體系，可(ke)以(yi)在訂(ding)購(gou)細(xi)胞(bao)系時(shi)獲(huo)得(de)。
雖(sui)然大多(duo)數細(xi)胞(bao)系可(ke)以(yi)在不(bu)止(zhi)壹(yi)種(zhong)培養基中(zhong)生長(chang)，但(dan)是(shi)當培養基改變時(shi)，細(xi)胞(bao)的性(xing)質(zhi)也會(hui)變(bian)化(hua)。因(yin)此(ci)，使(shi)用細(xi)胞(bao)庫(ku)推薦(jian)的培養基來培養細(xi)胞(bao)會(hui)獲(huo)得(de)的效果(guo)。

　　Q6.開啟(qi)凍(dong)存(cun)管
1.準(zhun)備壹(yi)個(ge)培養瓶，加(jia)入適(shi)宜(yi)細(xi)胞(bao)培養的培養基，液體體積按(an)照說明書(shu)的推薦(jian)配(pei)置(zhi)，並平(ping)衡(heng)培養基的溫度(du)和(he)pH（CO2）。　
2.在(zai)37℃水(shui)浴中(zhong)或(huo)細(xi)胞(bao)的正(zheng)常(chang)生長(chang)溫度(du)下將(jiang)凍(dong)存(cun)管輕(qing)輕(qing)搖(yao)動。解凍(dong)要(yao)快(kuai)，約2分鐘(zhong)或(huo)直(zhi)到(dao)冰(bing)晶融(rong)化(hua)即可(ke)。
3.從(cong)水浴中(zhong)取(qu)出(chu)凍(dong)存(cun)管並用浸泡或噴(pen)灑70%乙醇的方式(shi)來消(xiao)毒。進(jin)壹(yi)步(bu)的操作(zuo)均(jun)需(xu)在(zai)無(wu)菌(jun)操作(zuo)臺中(zhong)嚴(yan)格(ge)無菌(jun)條(tiao)件(jian)下進(jin)行。
4.擰(ning)開(kai)凍(dong)存(cun)管的管帽並將(jiang)內(nei)容物(wu)轉(zhuan)移(yi)到壹(yi)個(ge)含有9 ml推薦(jian)培養基的無菌(jun)離(li)心(xin)管中(zhong)。通過溫和離(li)心(xin)（125×g 10 min）除(chu)去(qu)冷(leng)凍(dong)保(bao)護劑(ji)（DMSO）。棄(qi)去(qu)上(shang)清，並用1或(huo)2 ml*培養基重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)。將(jiang)這些(xie)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移(yi)到含有*培養基的培養瓶中(zhong)並(bing)輕(qing)輕(qing)搖(yao)動以*混勻。
5.培養24小時(shi)後(hou)檢查(zha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態並(bing)在(zai)需(xu)要(yao)時(shi)進(jin)行傳(chuan)代(dai)。

　　Q7. 人視網(wang)膜(mo)母(mu)細(xi)胞(bao) 培養用液(ye)pH對細(xi)胞(bao)生長(chang)的影(ying)響

　　由於(yu)，大多(duo)數細(xi)胞(bao)適(shi)宜(yi)pH為(wei)7.2~7.4，偏(pian)離(li)此(ci)範(fan)圍(wei)對細(xi)胞(bao)將(jiang)產生有害的影(ying)響。各種細(xi)胞(bao)對pH的要求也不*相同，原代(dai)培養細(xi)胞(bao)壹(yi)般(ban)對pH變動耐受差，無限細(xi)胞(bao)系耐受力(li)強(qiang)。

　　但(dan)總(zong)體來說(shuo)，細(xi)胞(bao)耐酸(suan)性(xing)比(bi)耐堿(jian)性(xing)強壹(yi)些(xie)，偏(pian)酸(suan)環境(jing)中(zhong)更(geng)利於(yu)細(xi)胞(bao)生長(chang)。因(yin)此，我(wo)們(men)在(zai)配(pei)制(zhi)培養用液(ye)時(shi)，可(ke)把(ba)液(ye)體的pH稍微(wei)調得(de)偏(pian)酸(suan)壹(yi)些(xie)。液(ye)體(ti)在經(jing)過0.10um或(huo)0.22um濾膜(mo)過(guo)濾時(shi)，溶液的pH還會(hui)向上浮動(dong)0.2左(zuo)右。

　　人視網(wang)膜(mo)母(mu)細(xi)胞(bao)質(zhi)量(liang)可(ke)靠，售後有保障(zhang)（編輯：tanxi）