人(ren)視網(wang)膜母細(xi)胞瘤(liu)_復蘇的(de)

非常(chang)讓(rang)人(ren)著迷(mi)的實(shi)驗，其(qi)成(cheng)功(gong)關(guan)鍵(jian)之(zhi)壹(yi)是選(xuan)擇(ze)可信的實(shi)驗試(shi)劑。

我司(si)細(xi)胞近(jin)3000種(zhong)，來(lai)源(yuan)於(yu)美(mei)國ATCC,細(xi)胞都(dou)是(shi)經過嚴(yan)格(ge)質(zhi)量(liang)控(kong)制，在中國大陸努力(li)搭建(jian)正牌細(xi)胞與(yu)國內廣大(da)科(ke)研(yan)人(ren)員(yuan)之(zhi)間(jian)的溝通橋(qiao)梁(liang)。為(wei)您提(ti)供人(ren)視網(wang)膜母細(xi)胞瘤(liu)外(wai)，還(hai)有更(geng)多(duo)相關實(shi)驗產品，標準(zhun)品(pin)，細(xi)胞株(zhu)和(he)實(shi)驗技(ji)術服(fu)務等(deng)等(deng)前期(qi)後續服(fu)務。

人(ren)視網(wang)膜母細(xi)胞瘤(liu)的產品(pin)介(jie)紹(shao)

人(ren)視網(wang)膜母細(xi)胞瘤(liu)由(you)我司(si)*銷(xiao)售人(ren)視網(wang)膜母細(xi)胞瘤(liu)。

人(ren)視網(wang)膜母細(xi)胞瘤(liu)細(xi)胞株(zhu)

　　Q1. 人(ren)視網(wang)膜母細(xi)胞瘤(liu)液體培(pei)養基(ji)的(de)保(bao)存(cun)是冷藏好(hao)？還(hai)是冷凍好(hao)？

　　要(yao)冷藏！！因(yin)為(wei)液體培(pei)養基(ji)經冷凍後再經溶(rong)化時(shi)，其(qi)溶(rong)液的(de)pH值會發生(sheng)改變(bian)，溶(rong)液往(wang)往(wang)變(bian)堿(jian)，某(mou)些成(cheng)分(fen)溶(rong)解(jie)也(ye)會(hui)受(shou)到影(ying)響對細(xi)胞生(sheng)長不(bu)利。故(gu)液(ye)體(ti)培(pei)養基(ji)壹(yi)定(ding)要(yao)存(cun)放在(zai)冷藏箱中，通(tong)常(chang)液體培(pei)養基(ji)在(zai)冷藏條件(jian)下(xia)可存(cun)放6個月 ~ 壹(yi)年(nian)。

　　Q2.人(ren)視網(wang)膜母細(xi)胞瘤(liu) 液體培(pei)養基(ji)中(zhong)谷氨(an)酰胺的(de)作(zuo)用(yong)，及使用(yong)方法。

　　幾(ji)乎(hu)所(suo)有的細(xi)胞對谷氨(an)酰胺有較高(gao)的要(yao)求，細(xi)胞需(xu)要(yao)谷氨(an)酰胺合(he)成(cheng)蛋(dan)白(bai)質(zhi)，在(zai)缺(que)少(shao)谷氨(an)酰胺時(shi)，細(xi)胞生(sheng)長不(bu)良(liang)而(er)死亡。所(suo)以，各種(zhong)培(pei)養液(ye)中都(dou)含(han)有較大量的(de)谷氨(an)酰胺。谷氨(an)酰胺在(zai)溶(rong)液中(zhong)很不(bu)穩定，應(ying)置(zhi)-20 ?C冰(bing)凍(dong)保(bao)存(cun)，用(yong)前加入(ru)培(pei)養基(ji)中(zhong)。加(jia)有谷氨(an)酰胺的(de)液(ye)體(ti)培(pei)養基(ji)4 ?C 冰(bing)箱儲存(cun)兩(liang)周(zhou)以上時(shi)，應重新(xin)加入(ru)原(yuan)來(lai)量(liang)的(de)谷氨(an)酰胺。基(ji)礎(chu)醫(yi)學細(xi)胞中(zhong)心(xin)在其(qi)服(fu)務項(xiang)目(mu)中配(pei)制分裝了(le)高(gao)濃度（100倍(bei)）的(de)谷氨(an)酰胺溶(rong)液（1ml/支(zhi)）。每支(zhi)1ml的(de)谷氨(an)酰胺加(jia)到99ml*培(pei)養基(ji)中(zhong)，其(qi)終(zhong)濃(nong)度為(wei)2mM/ml培(pei)養基(ji)。包(bao)裝(zhuang)為(wei)粉紅(hong)色，-24?C保(bao)存(cun)。

　　Q3.細(xi)胞計(ji)數及存(cun)活測試(shi)
1、原(yuan)理：
(1)計(ji)算(suan)細(xi)胞數目(mu)可用(yong)血球(qiu)計數盤(pan)或(huo)是(shi)Coultercounter粒(li)子計數器自動(dong)計(ji)數。
(2)血球(qiu)計數盤(pan)壹(yi)般有二個chambers，每個chamber中細(xi)刻9個1mm2大正方形(xing)，其(qi)中(zhong)4個角(jiao)落(luo)之(zhi)正方形(xing)再(zai)細(xi)刻16個小格(ge)，深度均為(wei)0.1mm。當chamber上方(fang)蓋(gai)上蓋玻片後，每個大正方形(xing)之(zhi)體(ti)積為(wei)1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用(yong)時(shi)，計數每個大正方形(xing)內之(zhi)細(xi)胞數目(mu)，乘(cheng)以稀釋(shi)倍(bei)數，再(zai)乘(cheng)以104，即(ji)為(wei)每ml中(zhong)之(zhi)細(xi)胞數目(mu)。
(3)存(cun)活測試(shi)之(zhi)步驟(zhou)為(wei)dyeexclusion，利用(yong)染料會滲(shen)入(ru)死細(xi)胞中(zhong)而(er)呈色，而(er)活細(xi)胞因(yin)細(xi)胞膜完整，染(ran)料無(wu)法滲(shen)入(ru)而(er)不(bu)會(hui)呈色。壹般使用(yong)藍(lan)色之(zhi)trypan blue染(ran)料，如果細(xi)胞不(bu)易(yi)吸收trypan blue，則(ze)用(yong)紅(hong)色之(zhi)Erythrosin bluish。計(ji)算細(xi)胞活率：活細(xi)胞數/(活細(xi)胞數+死細(xi)胞數)×100%。計(ji)數應(ying)在(zai)臺盼(pan)蘭(lan)染(ran)色後數分(fen)鐘(zhong)內完成(cheng)，隨(sui)時(shi)間延(yan)長，部分活細(xi)胞也(ye)開(kai)始攝(she)取染(ran)料;因為(wei)臺盼(pan)蘭(lan)對蛋(dan)白(bai)質(zhi)有很強的親(qin)和(he)力(li)，用(yong)不(bu)含(han)血清(qing)的稀釋(shi)液(ye)，可以使染(ran)色計數更(geng)為(wei)準確(que)。

　　Q4.細(xi)胞特(te)性(xing)
在(zai)細(xi)胞培(pei)養之(zhi)前(qian)，我們要了解(jie)壹(yi)下(xia)妳(ni)所(suo)要(yao)養(yang)細(xi)胞的(de)基(ji)本(ben)特(te)性(xing)，這(zhe)點(dian)可以從(cong)細(xi)胞的(de)產品說(shuo)明(ming)書或(huo)者(zhe)從(cong)ATCC細(xi)胞庫查(zha)詢(xun)。除(chu)此(ci)之(zhi)外(wai)我們還要知(zhi)道(dao)每管細(xi)胞的(de)數量(liang)，建(jian)議分裂(lie)或(huo)傳(chuan)代(dai)的(de)比例(li)，和(he)已知(zhi)細(xi)胞的(de)傳代代(dai)次(ci)等(deng)信息。

　　Q5.準備(bei)培(pei)養基(ji)
復(fu)蘇(su)細(xi)胞時(shi)需(xu)要(yao)準備(bei)合(he)適(shi)的(de)培(pei)養基(ji)，血清(qing)和(he)細(xi)胞生(sheng)長所(suo)需(xu)的(de)添加(jia)劑。大部分培(pei)養細(xi)胞所(suo)用(yong)的培(pei)養體(ti)系，可以在訂(ding)購細(xi)胞系(xi)時(shi)獲得(de)。
雖然大(da)多數細(xi)胞系(xi)可以在不(bu)止(zhi)壹種(zhong)培(pei)養基(ji)中(zhong)生(sheng)長(chang)，但(dan)是當培(pei)養基(ji)改變(bian)時(shi)，細(xi)胞的(de)性(xing)質(zhi)也(ye)會(hui)變(bian)化(hua)。因此，使用(yong)細(xi)胞庫推(tui)薦的培(pei)養基(ji)來(lai)培(pei)養細(xi)胞會(hui)獲得(de)的(de)效果。

　　Q6.開(kai)啟凍(dong)存(cun)管
1.準備(bei)壹(yi)個培(pei)養瓶(ping)，加入(ru)適(shi)宜(yi)細(xi)胞培(pei)養的(de)培(pei)養基(ji)，液(ye)體(ti)體(ti)積按照(zhao)說(shuo)明(ming)書的推(tui)薦配(pei)置，並平(ping)衡培(pei)養基(ji)的(de)溫(wen)度和(he)pH（CO2）。　
2.在37℃水浴(yu)中或(huo)細(xi)胞的(de)正常生長(chang)溫(wen)度下(xia)將(jiang)凍(dong)存(cun)管輕(qing)輕(qing)搖(yao)動(dong)。解(jie)凍(dong)要(yao)快，約(yue)2分(fen)鐘(zhong)或(huo)直(zhi)到冰(bing)晶(jing)融化(hua)即(ji)可。
3.從(cong)水浴(yu)中取出(chu)凍(dong)存(cun)管並用(yong)浸泡(pao)或(huo)噴灑(sa)70%乙醇(chun)的(de)方(fang)式來(lai)消(xiao)毒。進(jin)壹步的操(cao)作(zuo)均(jun)需(xu)在(zai)無(wu)菌操(cao)作(zuo)臺中嚴(yan)格(ge)無(wu)菌條件(jian)下(xia)進(jin)行。
4.擰(ning)開(kai)凍存(cun)管的管帽並將(jiang)內容物(wu)轉(zhuan)移到壹個含有9 ml推(tui)薦培(pei)養基(ji)的(de)無(wu)菌離(li)心(xin)管中。通(tong)過溫和(he)離心(xin)（125×g 10 min）除去冷凍保(bao)護(hu)劑（DMSO）。棄(qi)去上(shang)清(qing)，並用(yong)1或(huo)2 ml*培(pei)養基(ji)重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞。將(jiang)這些細(xi)胞懸(xuan)液轉(zhuan)移到含有*培(pei)養基(ji)的(de)培(pei)養瓶(ping)中並輕(qing)輕(qing)搖(yao)動(dong)以*混勻。
5.培(pei)養24小(xiao)時(shi)後檢查(zha)細(xi)胞狀態並在(zai)需(xu)要(yao)時(shi)進(jin)行傳代。

　　Q7. 人(ren)視網(wang)膜母細(xi)胞瘤(liu) 培(pei)養用(yong)液pH對細(xi)胞生(sheng)長的影(ying)響

　　由(you)於(yu)，大(da)多數細(xi)胞適(shi)宜(yi)pH為(wei)7.2~7.4，偏離此(ci)範(fan)圍對細(xi)胞將(jiang)產生有害的(de)影(ying)響。各種(zhong)細(xi)胞對pH的(de)要求也(ye)不(bu)*相(xiang)同(tong)，原(yuan)代(dai)培(pei)養細(xi)胞壹(yi)般對pH變(bian)動(dong)耐(nai)受(shou)差，無(wu)限細(xi)胞系(xi)耐(nai)受(shou)力(li)強。

　　但(dan)總體來(lai)說(shuo)，細(xi)胞耐(nai)酸性(xing)比耐(nai)堿(jian)性(xing)強壹些，偏酸環境中更(geng)利於(yu)細(xi)胞生(sheng)長。因此(ci)，我們在配(pei)制培(pei)養用(yong)液時(shi)，可把(ba)液(ye)體的(de)pH稍(shao)微(wei)調得(de)偏酸壹些(xie)。液體在經過0.10um或(huo)0.22um濾膜過濾時(shi)，溶(rong)液的(de)pH還(hai)會(hui)向(xiang)上(shang)浮動(dong)0.2左(zuo)右。

　　人(ren)視網(wang)膜母細(xi)胞瘤(liu)質(zhi)量(liang)可靠(kao)，售(shou)後有保(bao)障（編輯：tanxi）