人視(shi)網膜(mo)母(mu)細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao)_培養(yang)指(zhi)南(nan)

非常(chang)讓人著迷(mi)的實(shi)驗，其(qi)成功(gong)關鍵之(zhi)壹是選(xuan)擇(ze)可(ke)信的實(shi)驗試(shi)劑(ji)。

我司細(xi)胞(bao)近3000種(zhong)，來(lai)源於美國ATCC,細(xi)胞(bao)都是經(jing)過(guo)嚴格質(zhi)量控制(zhi)，在中國大陸努(nu)力(li)搭(da)建(jian)正牌(pai)細(xi)胞(bao)與國(guo)內廣大科(ke)研人員(yuan)之(zhi)間(jian)的溝通(tong)橋梁(liang)。為(wei)您提供(gong)人視(shi)網膜(mo)母(mu)細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao)外，還有更多相(xiang)關實(shi)驗產品，標準品，細(xi)胞(bao)株和實(shi)驗技術(shu)服(fu)務(wu)等等前期(qi)後續服(fu)務(wu)。

人視(shi)網膜(mo)母(mu)細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao)的產品介紹(shao)

人視(shi)網膜(mo)母(mu)細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao)由(you)我司*銷售人視(shi)網膜(mo)母(mu)細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao)。

人視(shi)網膜(mo)母(mu)細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao)細(xi)胞(bao)株

　　Q1. 人視(shi)網膜(mo)母(mu)細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao)液體培養(yang)基的保存是冷(leng)藏好？還是冷(leng)凍好？

　　要冷(leng)藏！！因為(wei)液體培養(yang)基經(jing)冷(leng)凍後再經(jing)溶(rong)化時(shi)，其(qi)溶(rong)液的pH值(zhi)會(hui)發生(sheng)改變，溶(rong)液往往變堿，某些(xie)成分溶(rong)解也(ye)會(hui)受到影響(xiang)對(dui)細(xi)胞(bao)生長(chang)不(bu)利(li)。故(gu)液(ye)體培養(yang)基壹定(ding)要(yao)存放在冷(leng)藏箱中(zhong)，通(tong)常(chang)液體培養(yang)基在冷(leng)藏條(tiao)件(jian)下(xia)可(ke)存放6個月(yue) ~ 壹年(nian)。

　　Q2.人視(shi)網膜(mo)母(mu)細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao) 液體培養(yang)基中(zhong)谷(gu)氨(an)酰胺(an)的作(zuo)用，及使用方法。

　　幾(ji)乎(hu)所有的細(xi)胞(bao)對(dui)谷(gu)氨(an)酰胺(an)有較高(gao)的要求(qiu)，細(xi)胞(bao)需要(yao)谷(gu)氨(an)酰胺(an)合成蛋白質，在缺少谷(gu)氨(an)酰胺(an)時(shi)，細(xi)胞(bao)生長(chang)不(bu)良而(er)死亡。所以，各種(zhong)培養(yang)液中(zhong)都含有較大量的谷(gu)氨(an)酰胺(an)。谷(gu)氨(an)酰胺(an)在溶(rong)液中很(hen)不(bu)穩定(ding)，應(ying)置(zhi)-20 ?C冰凍保存，用前加入(ru)培養(yang)基中(zhong)。加有谷(gu)氨(an)酰胺(an)的液體培養(yang)基4 ?C 冰箱儲(chu)存兩周(zhou)以上(shang)時(shi)，應(ying)重(zhong)新加入原來(lai)量的谷(gu)氨(an)酰胺(an)。基(ji)礎(chu)醫(yi)學(xue)細(xi)胞(bao)中心(xin)在其(qi)服(fu)務(wu)項目(mu)中配(pei)制(zhi)分(fen)裝了高(gao)濃(nong)度（100倍）的谷(gu)氨(an)酰胺(an)溶(rong)液（1ml/支(zhi)）。每(mei)支(zhi)1ml的谷(gu)氨(an)酰胺(an)加(jia)到99ml*培養(yang)基中(zhong)，其(qi)終濃(nong)度為(wei)2mM/ml培養(yang)基。包(bao)裝為(wei)粉(fen)紅色，-24?C保存。

　　Q3.細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)及存活測(ce)試(shi)
1、原理(li)：
(1)計(ji)算(suan)細(xi)胞(bao)數(shu)目(mu)可(ke)用血(xue)球(qiu)計(ji)數(shu)盤或(huo)是Coultercounter粒子(zi)計(ji)數(shu)器自動(dong)計(ji)數(shu)。
(2)血(xue)球(qiu)計(ji)數(shu)盤壹般有二個chambers，每(mei)個chamber中(zhong)細(xi)刻9個1mm2大(da)正方形(xing)，其(qi)中4個角(jiao)落之正方形(xing)再細(xi)刻16個小(xiao)格，深(shen)度均(jun)為(wei)0.1mm。當chamber上(shang)方蓋上(shang)蓋玻(bo)片後，每(mei)個大(da)正方形(xing)之體積為(wei)1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用時(shi)，計(ji)數(shu)每(mei)個大(da)正方形(xing)內之(zhi)細(xi)胞(bao)數(shu)目(mu)，乘以稀釋(shi)倍(bei)數(shu)，再乘(cheng)以104，即為(wei)每(mei)ml中(zhong)之細(xi)胞(bao)數(shu)目(mu)。
(3)存活測(ce)試(shi)之步(bu)驟為(wei)dyeexclusion，利(li)用染料會(hui)滲入(ru)死(si)細(xi)胞(bao)中而(er)呈色，而(er)活細(xi)胞(bao)因細(xi)胞(bao)膜完(wan)整(zheng)，染料無法滲入(ru)而(er)不(bu)會(hui)呈(cheng)色。壹般使(shi)用藍(lan)色之(zhi)trypan blue染料，如(ru)果(guo)細(xi)胞(bao)不(bu)易吸(xi)收(shou)trypan blue，則用紅色之(zhi)Erythrosin bluish。計(ji)算(suan)細(xi)胞(bao)活率(lv)：活(huo)細(xi)胞(bao)數(shu)/(活細(xi)胞(bao)數(shu)+死細(xi)胞(bao)數(shu))×100%。計(ji)數(shu)應在臺盼蘭染色後數(shu)分鐘(zhong)內完(wan)成，隨時(shi)間(jian)延長(chang)，部(bu)分(fen)活細(xi)胞(bao)也(ye)開(kai)始(shi)攝取(qu)染料;因為(wei)臺盼蘭對(dui)蛋白質有很(hen)強的親(qin)和力(li)，用不(bu)含血(xue)清(qing)的稀釋(shi)液(ye)，可(ke)以使染色計(ji)數(shu)更為(wei)準確。

　　Q4.細(xi)胞(bao)特性(xing)
在細(xi)胞(bao)培養(yang)之前，我們要(yao)了(le)解壹下(xia)妳(ni)所要(yao)養細(xi)胞(bao)的基本(ben)特(te)性，這(zhe)點(dian)可(ke)以從細(xi)胞(bao)的產品說明(ming)書或者(zhe)從(cong)ATCC細(xi)胞(bao)庫查詢(xun)。除(chu)此(ci)之外我們還要知(zhi)道每(mei)管(guan)細(xi)胞(bao)的數(shu)量，建(jian)議(yi)分裂或(huo)傳代(dai)的比例(li)，和(he)已(yi)知(zhi)細(xi)胞(bao)的傳代(dai)代(dai)次(ci)等(deng)信息。

　　Q5.準備(bei)培養(yang)基
復(fu)蘇細(xi)胞(bao)時(shi)需(xu)要(yao)準備(bei)合適(shi)的培養(yang)基，血(xue)清(qing)和(he)細(xi)胞(bao)生長(chang)所需(xu)的添加(jia)劑(ji)。大部(bu)分(fen)培養(yang)細(xi)胞(bao)所用的培養(yang)體系(xi)，可(ke)以在訂(ding)購細(xi)胞(bao)系(xi)時(shi)獲(huo)得(de)。
雖然大多(duo)數(shu)細(xi)胞(bao)系(xi)可(ke)以在不(bu)止(zhi)壹種(zhong)培養(yang)基中(zhong)生長，但是當(dang)培養(yang)基改(gai)變時(shi)，細(xi)胞(bao)的性質(zhi)也(ye)會(hui)變化。因(yin)此(ci)，使用細(xi)胞(bao)庫推薦(jian)的培養(yang)基來(lai)培養(yang)細(xi)胞(bao)會(hui)獲(huo)得(de)的效果(guo)。

　　Q6.開(kai)啟(qi)凍存管
1.準備(bei)壹個培養(yang)瓶(ping)，加(jia)入(ru)適(shi)宜(yi)細(xi)胞(bao)培養(yang)的培養(yang)基，液(ye)體體積按照說明(ming)書的推薦(jian)配(pei)置(zhi)，並平衡培養(yang)基的溫(wen)度和pH（CO2）。　
2.在37℃水浴中或(huo)細(xi)胞(bao)的正常(chang)生長(chang)溫(wen)度下(xia)將凍存管輕(qing)輕搖動(dong)。解(jie)凍要(yao)快，約2分(fen)鐘或(huo)直(zhi)到冰晶融(rong)化即可(ke)。
3.從(cong)水(shui)浴中取(qu)出凍存管並(bing)用浸(jin)泡或(huo)噴灑70%乙醇(chun)的方式(shi)來(lai)消(xiao)毒(du)。進(jin)壹步(bu)的操作(zuo)均(jun)需(xu)在無菌(jun)操(cao)作(zuo)臺中嚴格無(wu)菌(jun)條(tiao)件(jian)下(xia)進(jin)行(xing)。
4.擰開(kai)凍存管的管帽並(bing)將內容物(wu)轉(zhuan)移(yi)到壹個含有9 ml推薦培養(yang)基的無菌(jun)離心管(guan)中(zhong)。通過(guo)溫(wen)和(he)離心（125×g 10 min）除(chu)去(qu)冷(leng)凍保護(hu)劑(ji)（DMSO）。棄去(qu)上(shang)清(qing)，並用1或2 ml*培養(yang)基重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞(bao)。將這(zhe)些(xie)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)到含有*培養(yang)基的培養(yang)瓶(ping)中(zhong)並(bing)輕輕搖動(dong)以*混(hun)勻。
5.培養(yang)24小(xiao)時(shi)後檢查(zha)細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態並(bing)在需要時(shi)進(jin)行(xing)傳代(dai)。

　　Q7. 人視(shi)網膜(mo)母(mu)細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao) 培養(yang)用液pH對(dui)細(xi)胞(bao)生長(chang)的影響(xiang)

　　由(you)於，大多數(shu)細(xi)胞(bao)適(shi)宜(yi)pH為(wei)7.2~7.4，偏離此(ci)範圍對(dui)細(xi)胞(bao)將產(chan)生有害的影響(xiang)。各種(zhong)細(xi)胞(bao)對(dui)pH的要求(qiu)也(ye)不(bu)*相(xiang)同，原代(dai)培養(yang)細(xi)胞(bao)壹般對(dui)pH變動耐受差，無(wu)限(xian)細(xi)胞(bao)系(xi)耐(nai)受力強(qiang)。

　　但總體來說，細(xi)胞(bao)耐酸性(xing)比耐堿性(xing)強壹些(xie)，偏(pian)酸環(huan)境(jing)中更(geng)利(li)於細(xi)胞(bao)生長(chang)。因(yin)此(ci)，我們在配制(zhi)培養(yang)用液時(shi)，可(ke)把(ba)液(ye)體的pH稍微(wei)調(tiao)得(de)偏酸壹些(xie)。液(ye)體在經過(guo)0.10um或0.22um濾(lv)膜(mo)過(guo)濾時(shi)，溶(rong)液的pH還會(hui)向上(shang)浮動0.2左(zuo)右。

　　人視(shi)網膜(mo)母(mu)細(xi)胞(bao)瘤(liu)細(xi)胞(bao)質量可(ke)靠(kao)，售(shou)後有保障（編(bian)輯：tanxi）