人眼(yan)脈絡黑色素瘤(liu)細胞(bao)_細胞(bao)株(zhu)

非常讓人著迷(mi)的實(shi)驗(yan)，其成(cheng)功關(guan)鍵(jian)之(zhi)壹是(shi)選擇可信(xin)的實驗(yan)試(shi)劑(ji)。

我司(si)細胞(bao)近(jin)3000種，來源於美國ATCC,細胞(bao)都是(shi)經(jing)過(guo)嚴格質量(liang)控(kong)制，在(zai)中國大陸(lu)努(nu)力(li)搭(da)建正(zheng)牌(pai)細胞(bao)與(yu)國(guo)內廣(guang)大科(ke)研(yan)人員(yuan)之(zhi)間(jian)的溝(gou)通(tong)橋(qiao)梁。為(wei)您提供(gong)人眼(yan)脈絡黑色素瘤(liu)細胞(bao)外，還有更(geng)多相(xiang)關(guan)實(shi)驗(yan)產(chan)品，標準(zhun)品，細胞(bao)株(zhu)和(he)實驗(yan)技(ji)術服務(wu)等(deng)等(deng)前期後續服務(wu)。

人眼(yan)脈絡黑色素瘤(liu)細胞(bao)的(de)產(chan)品介(jie)紹(shao)

人眼(yan)脈絡黑色素瘤(liu)細胞(bao)由(you)我司(si)*銷售人眼(yan)脈絡黑色素瘤(liu)細胞(bao)。

人眼(yan)脈絡黑色素瘤(liu)細胞(bao)細胞(bao)株(zhu)

　　Q1. 人眼(yan)脈絡黑色素瘤(liu)細胞(bao)液(ye)體培(pei)養(yang)基的保存是(shi)冷藏好？還(hai)是(shi)冷凍好(hao)？

　　要冷藏！！因為(wei)液體培(pei)養(yang)基經(jing)冷凍後再經(jing)溶化時(shi)，其溶液的(de)pH值(zhi)會發(fa)生(sheng)改(gai)變，溶液往(wang)往(wang)變堿(jian)，某(mou)些成(cheng)分溶解(jie)也(ye)會(hui)受(shou)到(dao)影(ying)響(xiang)對細胞(bao)生(sheng)長不利。故液體培(pei)養(yang)基壹定(ding)要(yao)存(cun)放在(zai)冷藏箱中(zhong)，通(tong)常(chang)液體培(pei)養(yang)基在冷藏條件下(xia)可存(cun)放6個月(yue) ~ 壹年。

　　Q2.人眼(yan)脈絡黑色素瘤(liu)細胞(bao) 液(ye)體培(pei)養(yang)基中谷(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)的作用(yong)，及使(shi)用(yong)方法(fa)。

　　幾(ji)乎所(suo)有(you)的細胞(bao)對谷(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)有較高的要求(qiu)，細胞(bao)需要谷(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)合成(cheng)蛋白質，在(zai)缺(que)少谷(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)時(shi)，細胞(bao)生(sheng)長不良(liang)而死亡(wang)。所(suo)以，各種培(pei)養(yang)液中都含(han)有較大量(liang)的(de)谷(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)。谷(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)在溶液中(zhong)很(hen)不穩定(ding)，應(ying)置(zhi)-20 ?C冰(bing)凍保(bao)存，用(yong)前加(jia)入培(pei)養(yang)基中。加(jia)有谷(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)的液體培(pei)養(yang)基4 ?C 冰(bing)箱儲(chu)存兩(liang)周(zhou)以上時(shi)，應(ying)重新(xin)加(jia)入原(yuan)來量(liang)的(de)谷(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)。基礎(chu)醫(yi)學(xue)細胞(bao)中(zhong)心(xin)在其服務(wu)項目(mu)中(zhong)配(pei)制分裝(zhuang)了高(gao)濃度（100倍(bei)）的(de)谷(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)溶液（1ml/支(zhi)）。每支(zhi)1ml的谷(gu)氨(an)酰(xian)胺(an)加(jia)到(dao)99ml*培(pei)養(yang)基中，其終濃度為(wei)2mM/ml培(pei)養(yang)基。包(bao)裝(zhuang)為(wei)粉紅色，-24?C保存。

　　Q3.細胞(bao)計數及存活(huo)測(ce)試(shi)
1、原(yuan)理(li)：
(1)計算細胞(bao)數目(mu)可(ke)用(yong)血(xue)球(qiu)計數盤(pan)或(huo)是(shi)Coultercounter粒(li)子(zi)計數器(qi)自動計數。
(2)血(xue)球(qiu)計數盤(pan)壹般有二(er)個chambers，每(mei)個chamber中(zhong)細刻(ke)9個1mm2大正(zheng)方形(xing)，其中(zhong)4個角(jiao)落(luo)之正(zheng)方形(xing)再(zai)細刻(ke)16個小(xiao)格，深(shen)度均(jun)為(wei)0.1mm。當chamber上方蓋(gai)上蓋(gai)玻片後，每個大正(zheng)方形(xing)之(zhi)體積為(wei)1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使(shi)用(yong)時(shi)，計數每(mei)個大正(zheng)方形(xing)內之(zhi)細胞(bao)數目(mu)，乘以稀釋(shi)倍數，再(zai)乘以104，即(ji)為(wei)每ml中(zhong)之細胞(bao)數目(mu)。
(3)存(cun)活(huo)測(ce)試(shi)之(zhi)步驟為(wei)dyeexclusion，利用(yong)染料(liao)會滲(shen)入死(si)細胞(bao)中(zhong)而呈色，而活細胞(bao)因細胞(bao)膜(mo)完(wan)整(zheng)，染料(liao)無法(fa)滲入而不會呈(cheng)色。壹般使(shi)用(yong)藍色之trypan blue染料(liao)，如(ru)果細胞(bao)不易吸(xi)收(shou)trypan blue，則(ze)用(yong)紅色之Erythrosin bluish。計算細胞(bao)活(huo)率(lv)：活細胞(bao)數/(活(huo)細胞(bao)數+死(si)細胞(bao)數)×100%。計數應(ying)在臺(tai)盼蘭(lan)染色後數分(fen)鐘內完(wan)成(cheng)，隨時(shi)間(jian)延長，部(bu)分(fen)活(huo)細胞(bao)也(ye)開(kai)始(shi)攝(she)取(qu)染料(liao);因為(wei)臺盼(pan)蘭(lan)對蛋白質有(you)很(hen)強的(de)親(qin)和(he)力，用(yong)不含(han)血(xue)清的(de)稀釋(shi)液，可以使(shi)染色計數更(geng)為(wei)準確。

　　Q4.細胞(bao)特(te)性(xing)
在(zai)細胞(bao)培(pei)養(yang)之前，我們要(yao)了解(jie)壹下妳(ni)所(suo)要(yao)養(yang)細胞(bao)的(de)基(ji)本(ben)特(te)性(xing)，這(zhe)點可以從細胞(bao)的(de)產(chan)品說(shuo)明(ming)書(shu)或(huo)者從ATCC細胞(bao)庫(ku)查(zha)詢(xun)。除(chu)此(ci)之外我們還(hai)要知道(dao)每(mei)管(guan)細胞(bao)的(de)數量(liang)，建(jian)議(yi)分裂或(huo)傳代(dai)的比(bi)例(li)，和(he)已知細胞(bao)的(de)傳代(dai)代(dai)次等(deng)信息(xi)。

　　Q5.準備(bei)培(pei)養(yang)基
復蘇(su)細胞(bao)時(shi)需要準備(bei)合適(shi)的(de)培(pei)養(yang)基，血(xue)清和(he)細胞(bao)生(sheng)長所(suo)需的添加(jia)劑。大部(bu)分(fen)培(pei)養(yang)細胞(bao)所(suo)用(yong)的培(pei)養(yang)體系(xi)，可以在訂購(gou)細胞(bao)系(xi)時(shi)獲(huo)得(de)。
雖(sui)然(ran)大多數細胞(bao)系(xi)可以在不止(zhi)壹種培(pei)養(yang)基中生(sheng)長，但是(shi)當培(pei)養(yang)基改變時(shi)，細胞(bao)的(de)性(xing)質(zhi)也(ye)會(hui)變化。因此，使(shi)用(yong)細胞(bao)庫(ku)推(tui)薦(jian)的(de)培(pei)養(yang)基來培(pei)養(yang)細胞(bao)會(hui)獲(huo)得的效果。

　　Q6.開(kai)啟凍存(cun)管
1.準(zhun)備(bei)壹個培(pei)養(yang)瓶，加(jia)入適(shi)宜(yi)細胞(bao)培(pei)養(yang)的培(pei)養(yang)基，液體體積按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書(shu)的(de)推(tui)薦(jian)配(pei)置，並平衡培(pei)養(yang)基的溫度和(he)pH（CO2）。　
2.在37℃水浴(yu)中或(huo)細胞(bao)的(de)正(zheng)常生(sheng)長溫度下(xia)將凍存(cun)管輕(qing)輕搖動。解(jie)凍要(yao)快，約2分鐘或(huo)直到(dao)冰(bing)晶融化即(ji)可(ke)。
3.從水浴(yu)中取出(chu)凍存(cun)管並(bing)用(yong)浸泡(pao)或(huo)噴灑(sa)70%乙(yi)醇(chun)的方式(shi)來消毒(du)。進壹步的(de)操(cao)作均(jun)需在無菌操(cao)作臺(tai)中(zhong)嚴格無菌條(tiao)件下(xia)進行(xing)。
4.擰(ning)開(kai)凍存(cun)管的(de)管帽並將內容物轉(zhuan)移到(dao)壹個含(han)有9 ml推(tui)薦(jian)培(pei)養(yang)基的無菌離(li)心管(guan)中。通(tong)過(guo)溫和(he)離心(xin)（125×g 10 min）除(chu)去(qu)冷凍保(bao)護劑（DMSO）。棄(qi)去上清，並(bing)用(yong)1或(huo)2 ml*培(pei)養(yang)基重懸細胞(bao)。將這些(xie)細胞(bao)懸(xuan)液(ye)轉(zhuan)移到(dao)含(han)有*培(pei)養(yang)基的培(pei)養(yang)瓶中並輕輕搖動以*混(hun)勻(yun)。
5.培(pei)養(yang)24小時(shi)後檢查(zha)細胞(bao)狀(zhuang)態並(bing)在需要時(shi)進(jin)行(xing)傳代(dai)。

　　Q7. 人眼(yan)脈絡黑色素瘤(liu)細胞(bao) 培(pei)養(yang)用(yong)液pH對細胞(bao)生(sheng)長的(de)影響

　　由(you)於，大多數細胞(bao)適(shi)宜(yi)pH為(wei)7.2~7.4，偏離(li)此(ci)範(fan)圍(wei)對細胞(bao)將產生(sheng)有(you)害的影響(xiang)。各(ge)種(zhong)細胞(bao)對pH的要(yao)求(qiu)也(ye)不*相同(tong)，原(yuan)代(dai)培(pei)養(yang)細胞(bao)壹般對pH變動耐受(shou)差，無(wu)限(xian)細胞(bao)系(xi)耐受(shou)力強。

　　但總(zong)體來說(shuo)，細胞(bao)耐(nai)酸(suan)性(xing)比(bi)耐(nai)堿(jian)性(xing)強壹些，偏酸(suan)環(huan)境中(zhong)更(geng)利於細胞(bao)生(sheng)長。因此，我們在(zai)配(pei)制培(pei)養(yang)用(yong)液時(shi)，可(ke)把液體的pH稍(shao)微調得(de)偏酸(suan)壹些。液(ye)體在經(jing)過(guo)0.10um或(huo)0.22um濾膜(mo)過(guo)濾時(shi)，溶液的(de)pH還會(hui)向(xiang)上浮動0.2左(zuo)右。

　　人眼(yan)脈絡黑色素瘤(liu)細胞(bao)質(zhi)量(liang)可(ke)靠(kao)，售(shou)後有保障（編(bian)輯：tanxi）