人(ren)眼(yan)脈絡膜(mo)成纖(xian)維細(xi)胞(bao) 6620_培養(yang)指南(nan)

非(fei)常讓(rang)人(ren)著(zhe)迷的實驗，其成功關鍵之壹(yi)是(shi)選(xuan)擇(ze)可信(xin)的實驗試劑(ji)。

我(wo)司細(xi)胞(bao)近(jin)3000種，來源(yuan)於美國(guo)ATCC,細(xi)胞(bao)都(dou)是(shi)經過嚴格(ge)質量(liang)控制，在(zai)中(zhong)國大(da)陸(lu)努力搭建正牌(pai)細(xi)胞(bao)與國(guo)內廣大(da)科研人(ren)員(yuan)之間(jian)的溝(gou)通橋梁。為(wei)您提供(gong)人(ren)眼(yan)脈絡膜(mo)成纖(xian)維細(xi)胞(bao) 6620外(wai)，還有(you)更(geng)多(duo)相(xiang)關實驗產品，標(biao)準(zhun)品(pin)，細(xi)胞(bao)株和實驗技(ji)術(shu)服務(wu)等(deng)等(deng)前期(qi)後(hou)續服務(wu)。

人(ren)眼(yan)脈絡膜(mo)成纖(xian)維細(xi)胞(bao) 6620的產(chan)品介紹

人(ren)眼(yan)脈絡膜(mo)成纖(xian)維細(xi)胞(bao) 6620由(you)我司(si)*銷(xiao)售(shou)人(ren)眼(yan)脈絡膜(mo)成纖(xian)維細(xi)胞(bao) 6620。

人(ren)眼(yan)脈絡膜(mo)成纖(xian)維細(xi)胞(bao) 6620細(xi)胞(bao)株

　　Q1. 人(ren)眼(yan)脈絡膜(mo)成纖(xian)維細(xi)胞(bao) 6620液體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)的保(bao)存是(shi)冷(leng)藏(zang)好？還(hai)是(shi)冷(leng)凍(dong)好？

　　要(yao)冷(leng)藏(zang)！！因(yin)為(wei)液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)經冷(leng)凍(dong)後(hou)再(zai)經溶(rong)化時(shi)，其溶(rong)液(ye)的pH值(zhi)會發(fa)生(sheng)改(gai)變，溶(rong)液(ye)往(wang)往(wang)變(bian)堿，某(mou)些成分溶(rong)解(jie)也(ye)會受到影(ying)響對(dui)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)不利(li)。故液體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)壹定要(yao)存放在冷(leng)藏(zang)箱(xiang)中(zhong)，通常液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)在冷(leng)藏(zang)條(tiao)件下可存放6個(ge)月(yue) ~ 壹年。

　　Q2.人(ren)眼(yan)脈絡膜(mo)成纖(xian)維細(xi)胞(bao) 6620 液體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)谷氨酰(xian)胺(an)的作用(yong)，及使(shi)用(yong)方(fang)法。

　　幾乎(hu)所有(you)的細(xi)胞(bao)對(dui)谷(gu)氨酰(xian)胺(an)有(you)較高(gao)的要(yao)求(qiu)，細(xi)胞(bao)需要(yao)谷(gu)氨酰(xian)胺(an)合(he)成蛋白質，在(zai)缺少谷(gu)氨酰(xian)胺(an)時(shi)，細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)不良(liang)而死(si)亡(wang)。所以(yi)，各種培(pei)養(yang)液(ye)中(zhong)都(dou)含(han)有(you)較大(da)量(liang)的谷(gu)氨酰(xian)胺(an)。谷(gu)氨酰(xian)胺(an)在(zai)溶(rong)液(ye)中(zhong)很不穩(wen)定，應置(zhi)-20 ?C冰凍(dong)保存，用(yong)前加(jia)入培(pei)養基中(zhong)。加(jia)有(you)谷氨酰(xian)胺(an)的液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)4 ?C 冰箱(xiang)儲(chu)存兩(liang)周以上時(shi)，應重新加(jia)入原(yuan)來量(liang)的谷(gu)氨酰(xian)胺(an)。基(ji)礎(chu)醫學(xue)細(xi)胞(bao)中(zhong)心在(zai)其服務(wu)項(xiang)目(mu)中(zhong)配制分(fen)裝了(le)高(gao)濃(nong)度（100倍(bei)）的谷(gu)氨酰(xian)胺(an)溶(rong)液(ye)（1ml/支）。每支1ml的谷(gu)氨酰(xian)胺(an)加(jia)到99ml*培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)，其終濃度為(wei)2mM/ml培養(yang)基。包(bao)裝為(wei)粉(fen)紅色(se)，-24?C保存。

　　Q3.細(xi)胞(bao)計數(shu)及存活測試
1、原(yuan)理：
(1)計算(suan)細(xi)胞(bao)數(shu)目(mu)可用(yong)血(xue)球(qiu)計數(shu)盤或是(shi)Coultercounter粒(li)子計數(shu)器自動計數(shu)。
(2)血球(qiu)計數(shu)盤壹般(ban)有(you)二個(ge)chambers，每個(ge)chamber中(zhong)細(xi)刻(ke)9個(ge)1mm2大(da)正方(fang)形，其中(zhong)4個(ge)角落之正方(fang)形再(zai)細(xi)刻(ke)16個(ge)小(xiao)格(ge)，深度均(jun)為(wei)0.1mm。當chamber上方(fang)蓋上蓋(gai)玻片(pian)後(hou)，每個(ge)大(da)正方(fang)形之體(ti)積(ji)為(wei)1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使(shi)用(yong)時(shi)，計數(shu)每個(ge)大(da)正方(fang)形內之細(xi)胞(bao)數(shu)目(mu)，乘(cheng)以稀釋(shi)倍(bei)數(shu)，再(zai)乘(cheng)以104，即(ji)為每ml中(zhong)之細(xi)胞(bao)數(shu)目(mu)。
(3)存活測試之步驟為dyeexclusion，利(li)用(yong)染料(liao)會滲入死(si)細(xi)胞(bao)中(zhong)而呈(cheng)色，而活細(xi)胞(bao)因(yin)細(xi)胞(bao)膜(mo)完(wan)整，染料(liao)無法滲入而(er)不會呈(cheng)色(se)。壹(yi)般(ban)使用(yong)藍(lan)色(se)之trypan blue染料(liao)，如果(guo)細(xi)胞(bao)不易吸(xi)收(shou)trypan blue，則用(yong)紅(hong)色(se)之Erythrosin bluish。計算(suan)細(xi)胞(bao)活率：活細(xi)胞(bao)數(shu)/(活細(xi)胞(bao)數(shu)+死細(xi)胞(bao)數(shu))×100%。計數(shu)應在臺(tai)盼蘭(lan)染色(se)後(hou)數(shu)分鐘(zhong)內(nei)完(wan)成，隨時(shi)間(jian)延(yan)長(chang)，部分活細(xi)胞(bao)也(ye)開(kai)始攝取(qu)染料(liao);因(yin)為(wei)臺(tai)盼蘭(lan)對(dui)蛋白質有(you)很強(qiang)的親(qin)和力，用(yong)不含(han)血(xue)清的稀釋(shi)液(ye)，可以(yi)使染色(se)計數(shu)更(geng)為準(zhun)確(que)。

　　Q4.細(xi)胞(bao)特性
在(zai)細(xi)胞(bao)培養(yang)之前，我(wo)們要(yao)了(le)解(jie)壹(yi)下(xia)妳所要(yao)養(yang)細(xi)胞(bao)的基(ji)本(ben)特(te)性，這點可以(yi)從(cong)細(xi)胞(bao)的產(chan)品說明書或者從(cong)ATCC細(xi)胞(bao)庫(ku)查詢(xun)。除此之外(wai)我們還(hai)要(yao)知(zhi)道每管(guan)細(xi)胞(bao)的數(shu)量(liang)，建議分(fen)裂(lie)或(huo)傳代(dai)的比(bi)例，和已知(zhi)細(xi)胞(bao)的傳(chuan)代(dai)代(dai)次(ci)等(deng)信(xin)息。

　　Q5.準(zhun)備(bei)培(pei)養(yang)基
復蘇細(xi)胞(bao)時(shi)需要(yao)準(zhun)備(bei)合(he)適(shi)的培(pei)養基，血清和細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)所需的添(tian)加(jia)劑(ji)。大(da)部分培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)所用(yong)的培(pei)養體(ti)系(xi)，可以(yi)在訂(ding)購(gou)細(xi)胞(bao)系(xi)時(shi)獲得。
雖(sui)然(ran)大(da)多(duo)數(shu)細(xi)胞(bao)系(xi)可以(yi)在不止(zhi)壹種培(pei)養(yang)基(ji)中(zhong)生(sheng)長(chang)，但(dan)是(shi)當培養基改變時(shi)，細(xi)胞(bao)的性質也(ye)會變(bian)化。因(yin)此(ci)，使(shi)用(yong)細(xi)胞(bao)庫(ku)推薦(jian)的培(pei)養基來培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)會獲得的效果(guo)。

　　Q6.開(kai)啟(qi)凍存管(guan)
1.準(zhun)備(bei)壹(yi)個(ge)培養瓶，加(jia)入適(shi)宜(yi)細(xi)胞(bao)培養(yang)的培(pei)養基，液體(ti)體(ti)積(ji)按照(zhao)說明書的推(tui)薦配置(zhi)，並(bing)平衡培(pei)養(yang)基(ji)的溫(wen)度和pH（CO2）。　
2.在37℃水(shui)浴(yu)中(zhong)或細(xi)胞(bao)的正常生(sheng)長(chang)溫(wen)度下(xia)將凍(dong)存管(guan)輕輕搖(yao)動。解(jie)凍(dong)要(yao)快(kuai)，約(yue)2分(fen)鐘(zhong)或(huo)直(zhi)到(dao)冰晶(jing)融化即(ji)可。
3.從(cong)水(shui)浴中(zhong)取出(chu)凍存管(guan)並(bing)用(yong)浸(jin)泡(pao)或噴灑70%乙醇(chun)的方(fang)式來消(xiao)毒。進(jin)壹(yi)步的操(cao)作均(jun)需在無菌(jun)操(cao)作臺(tai)中(zhong)嚴格(ge)無菌(jun)條(tiao)件下進行(xing)。
4.擰開(kai)凍存管(guan)的管(guan)帽(mao)並(bing)將內(nei)容物(wu)轉(zhuan)移(yi)到(dao)壹(yi)個(ge)含(han)有(you)9 ml推薦(jian)培(pei)養(yang)基的無菌(jun)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)。通過溫(wen)和離心(xin)（125×g 10 min）除去冷(leng)凍(dong)保(bao)護(hu)劑(ji)（DMSO）。棄(qi)去上(shang)清，並(bing)用(yong)1或(huo)2 ml*培(pei)養(yang)基重懸(xuan)細(xi)胞(bao)。將這些(xie)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液轉(zhuan)移(yi)到(dao)含(han)有(you)*培養(yang)基(ji)的培(pei)養瓶中(zhong)並(bing)輕輕搖(yao)動以(yi)*混(hun)勻(yun)。
5.培(pei)養24小(xiao)時(shi)後(hou)檢(jian)查細(xi)胞(bao)狀態並(bing)在(zai)需要(yao)時(shi)進行(xing)傳代(dai)。

　　Q7. 人(ren)眼(yan)脈絡膜(mo)成纖(xian)維細(xi)胞(bao) 6620 培養(yang)用(yong)液(ye)pH對(dui)細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)的影(ying)響

　　由(you)於，大(da)多(duo)數(shu)細(xi)胞(bao)適(shi)宜(yi)pH為7.2~7.4，偏(pian)離(li)此範圍對(dui)細(xi)胞(bao)將產(chan)生(sheng)有(you)害的影(ying)響。各(ge)種細(xi)胞(bao)對(dui)pH的要(yao)求(qiu)也(ye)不*相(xiang)同(tong)，原(yuan)代(dai)培(pei)養(yang)細(xi)胞(bao)壹般(ban)對(dui)pH變(bian)動耐(nai)受差(cha)，無限細(xi)胞(bao)系(xi)耐受力強。

　　但(dan)總(zong)體(ti)來說，細(xi)胞(bao)耐酸(suan)性比(bi)耐堿性強(qiang)壹些，偏(pian)酸環(huan)境中(zhong)更(geng)利(li)於細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)。因(yin)此(ci)，我(wo)們在(zai)配制培(pei)養用(yong)液(ye)時(shi)，可把(ba)液體(ti)的pH稍(shao)微調(tiao)得偏酸壹些。液(ye)體(ti)在(zai)經過0.10um或(huo)0.22um濾膜(mo)過濾時(shi)，溶(rong)液(ye)的pH還(hai)會向上浮動0.2左(zuo)右。

　　人(ren)眼(yan)脈絡膜(mo)成纖(xian)維細(xi)胞(bao) 6620質量(liang)可靠，售(shou)後(hou)有(you)保障(zhang)（編輯(ji)：tanxi）