人羊(yang)膜(mo)間(jian)充質基質細(xi)胞_復蘇(su)的(de)

非(fei)常(chang)讓人著(zhe)迷(mi)的(de)實驗(yan)，其成功(gong)關鍵(jian)之壹是選擇(ze)可(ke)信的(de)實驗(yan)試劑(ji)。

我司(si)細(xi)胞近3000種(zhong)，來(lai)源於(yu)美國ATCC,細(xi)胞都(dou)是經過嚴格(ge)質量(liang)控(kong)制，在(zai)中(zhong)國大(da)陸(lu)努(nu)力(li)搭建正(zheng)牌細(xi)胞與國內廣(guang)大(da)科研人員(yuan)之間(jian)的(de)溝通橋梁。為您提供(gong)人羊(yang)膜(mo)間(jian)充質基質細(xi)胞外，還有更(geng)多(duo)相(xiang)關實驗產(chan)品，標準品，細(xi)胞株(zhu)和實(shi)驗技術服務等等前(qian)期(qi)後(hou)續(xu)服務。

人羊(yang)膜(mo)間(jian)充質基質細(xi)胞的(de)產(chan)品介(jie)紹

人羊(yang)膜(mo)間(jian)充質基質細(xi)胞由我司(si)*銷售人羊(yang)膜(mo)間(jian)充質基質細(xi)胞。

人羊(yang)膜(mo)間(jian)充質基質細(xi)胞細(xi)胞株(zhu)

　　Q1. 人羊(yang)膜(mo)間(jian)充質基質細(xi)胞液體(ti)培養(yang)基的(de)保存(cun)是冷(leng)藏好(hao)？還是冷(leng)凍好(hao)？

　　要冷(leng)藏！！因(yin)為(wei)液(ye)體(ti)培(pei)養(yang)基經冷凍(dong)後再(zai)經溶(rong)化(hua)時(shi)，其(qi)溶(rong)液(ye)的(de)pH值(zhi)會發(fa)生(sheng)改變，溶(rong)液往往變(bian)堿，某些(xie)成分(fen)溶(rong)解(jie)也(ye)會(hui)受(shou)到(dao)影(ying)響(xiang)對細(xi)胞生長(chang)不利。故液(ye)體培(pei)養基壹定要存(cun)放(fang)在(zai)冷藏箱(xiang)中(zhong)，通常液體培(pei)養(yang)基在冷藏條(tiao)件下可(ke)存放6個月(yue) ~ 壹年。

　　Q2.人羊(yang)膜(mo)間(jian)充質基質細(xi)胞 液體(ti)培養(yang)基中谷氨(an)酰(xian)胺的(de)作用(yong)，及(ji)使(shi)用(yong)方(fang)法(fa)。

　　幾(ji)乎所(suo)有(you)的(de)細(xi)胞對谷氨(an)酰(xian)胺有較高的(de)要求(qiu)，細(xi)胞需要谷(gu)氨(an)酰(xian)胺合(he)成蛋(dan)白質，在缺(que)少谷(gu)氨(an)酰(xian)胺時(shi)，細(xi)胞生長(chang)不良而(er)死亡。所(suo)以(yi)，各(ge)種(zhong)培養(yang)液(ye)中都(dou)含(han)有較(jiao)大(da)量(liang)的(de)谷氨(an)酰(xian)胺。谷氨(an)酰(xian)胺在溶液(ye)中(zhong)很不(bu)穩定，應置(zhi)-20 ?C冰(bing)凍(dong)保(bao)存(cun)，用前(qian)加入(ru)培(pei)養(yang)基中。加有(you)谷(gu)氨(an)酰(xian)胺的(de)液體(ti)培養(yang)基4 ?C 冰(bing)箱(xiang)儲存兩(liang)周以上(shang)時(shi)，應(ying)重(zhong)新加入(ru)原來(lai)量(liang)的(de)谷氨(an)酰(xian)胺。基礎醫(yi)學(xue)細(xi)胞中心(xin)在其服(fu)務項(xiang)目(mu)中(zhong)配(pei)制分(fen)裝(zhuang)了(le)高濃(nong)度（100倍(bei)）的(de)谷氨(an)酰(xian)胺溶液（1ml/支）。每支1ml的(de)谷氨(an)酰(xian)胺加到(dao)99ml*培(pei)養(yang)基中，其終(zhong)濃度為(wei)2mM/ml培養基。包(bao)裝為(wei)粉(fen)紅色，-24?C保存(cun)。

　　Q3.細(xi)胞計數(shu)及存活測(ce)試
1、原理：
(1)計(ji)算細(xi)胞數(shu)目可用血球計數(shu)盤或是Coultercounter粒子計數(shu)器自(zi)動計數(shu)。
(2)血球計數(shu)盤壹般有二個chambers，每個(ge)chamber中(zhong)細(xi)刻9個(ge)1mm2大(da)正(zheng)方形，其中(zhong)4個角(jiao)落(luo)之正方形再(zai)細(xi)刻16個(ge)小格，深度均為0.1mm。當(dang)chamber上(shang)方蓋上(shang)蓋玻(bo)片(pian)後，每個(ge)大(da)正(zheng)方形之體積為(wei)1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使(shi)用(yong)時(shi)，計(ji)數(shu)每個(ge)大(da)正(zheng)方形內之細(xi)胞數(shu)目，乘以稀釋(shi)倍(bei)數(shu)，再(zai)乘以(yi)104，即為每ml中(zhong)之細(xi)胞數(shu)目。
(3)存活測(ce)試之步驟為(wei)dyeexclusion，利用染(ran)料(liao)會(hui)滲(shen)入(ru)死(si)細(xi)胞中而(er)呈(cheng)色，而(er)活細(xi)胞因細(xi)胞膜完整(zheng)，染(ran)料(liao)無(wu)法滲(shen)入(ru)而(er)不會呈(cheng)色。壹(yi)般使(shi)用(yong)藍(lan)色(se)之trypan blue染(ran)料(liao)，如(ru)果細(xi)胞不易(yi)吸收trypan blue，則用紅色之Erythrosin bluish。計算細(xi)胞活率(lv)：活細(xi)胞數(shu)/(活細(xi)胞數(shu)+死細(xi)胞數(shu))×100%。計數(shu)應在臺盼蘭染(ran)色後(hou)數(shu)分(fen)鐘(zhong)內(nei)完成，隨時(shi)間(jian)延長(chang)，部(bu)分(fen)活細(xi)胞也開(kai)始(shi)攝(she)取(qu)染(ran)料(liao);因(yin)為臺(tai)盼蘭對蛋白質有很強(qiang)的(de)親和(he)力(li)，用不(bu)含(han)血清的(de)稀釋(shi)液(ye)，可以使(shi)染(ran)色計(ji)數(shu)更(geng)為(wei)準確。

　　Q4.細(xi)胞特性(xing)
在細(xi)胞培養(yang)之前(qian)，我們(men)要了(le)解(jie)壹下妳所(suo)要養(yang)細(xi)胞的(de)基本特性(xing)，這點(dian)可(ke)以(yi)從(cong)細(xi)胞的(de)產(chan)品說(shuo)明(ming)書(shu)或(huo)者(zhe)從(cong)ATCC細(xi)胞庫(ku)查(zha)詢(xun)。除此(ci)之外我們(men)還要知道每管(guan)細(xi)胞的(de)數(shu)量(liang)，建(jian)議(yi)分(fen)裂(lie)或(huo)傳(chuan)代(dai)的(de)比例(li)，和已(yi)知細(xi)胞的(de)傳代(dai)代(dai)次等信(xin)息。

　　Q5.準備(bei)培養基
復蘇(su)細(xi)胞時(shi)需要準備(bei)合(he)適(shi)的(de)培養(yang)基，血清和(he)細(xi)胞生長(chang)所需的(de)添加劑(ji)。大(da)部(bu)分(fen)培(pei)養(yang)細(xi)胞所用(yong)的(de)培養(yang)體系(xi)，可以在訂購(gou)細(xi)胞系時(shi)獲(huo)得(de)。
雖(sui)然(ran)大(da)多(duo)數(shu)細(xi)胞系可(ke)以在(zai)不(bu)止(zhi)壹(yi)種(zhong)培養(yang)基中生長(chang)，但(dan)是當(dang)培養(yang)基改變時(shi)，細(xi)胞的(de)性質也會變(bian)化(hua)。因(yin)此，使(shi)用(yong)細(xi)胞庫(ku)推(tui)薦(jian)的(de)培養(yang)基來(lai)培養細(xi)胞會獲(huo)得(de)的(de)效果。

　　Q6.開(kai)啟凍(dong)存(cun)管(guan)
1.準備(bei)壹個培養瓶，加入(ru)適(shi)宜(yi)細(xi)胞培養(yang)的(de)培養(yang)基，液體體(ti)積按照說(shuo)明(ming)書(shu)的(de)推薦(jian)配(pei)置(zhi)，並(bing)平衡(heng)培養(yang)基的(de)溫(wen)度和(he)pH（CO2）。　
2.在37℃水(shui)浴中(zhong)或細(xi)胞的(de)正常(chang)生長(chang)溫(wen)度下將(jiang)凍存管(guan)輕輕搖(yao)動。解凍(dong)要快(kuai)，約2分(fen)鐘(zhong)或(huo)直(zhi)到(dao)冰(bing)晶(jing)融(rong)化(hua)即(ji)可。
3.從水(shui)浴中(zhong)取(qu)出(chu)凍(dong)存(cun)管(guan)並(bing)用浸泡(pao)或(huo)噴灑70%乙(yi)醇的(de)方式(shi)來(lai)消毒。進壹步(bu)的(de)操作均(jun)需在無菌操作臺(tai)中(zhong)嚴格(ge)無菌條件下進(jin)行(xing)。
4.擰開(kai)凍存(cun)管(guan)的(de)管(guan)帽(mao)並將內容物轉(zhuan)移(yi)到(dao)壹(yi)個(ge)含(han)有9 ml推(tui)薦(jian)培(pei)養基的(de)無菌離心(xin)管(guan)中(zhong)。通過溫(wen)和離心(xin)（125×g 10 min）除去(qu)冷(leng)凍(dong)保(bao)護劑(ji)（DMSO）。棄(qi)去(qu)上(shang)清，並(bing)用1或(huo)2 ml*培(pei)養(yang)基重(zhong)懸細(xi)胞。將這些細(xi)胞懸液(ye)轉移(yi)到(dao)含(han)有*培(pei)養基的(de)培養(yang)瓶中並(bing)輕輕搖(yao)動以*混勻。
5.培養24小時(shi)後(hou)檢(jian)查(zha)細(xi)胞狀態(tai)並在(zai)需要時(shi)進(jin)行(xing)傳代(dai)。

　　Q7. 人羊(yang)膜(mo)間(jian)充質基質細(xi)胞 培養(yang)用液(ye)pH對細(xi)胞生長(chang)的(de)影(ying)響(xiang)

　　由於(yu)，大(da)多(duo)數(shu)細(xi)胞適(shi)宜(yi)pH為(wei)7.2~7.4，偏離此(ci)範(fan)圍(wei)對細(xi)胞將產(chan)生有(you)害的(de)影(ying)響(xiang)。各(ge)種(zhong)細(xi)胞對pH的(de)要求(qiu)也(ye)不(bu)*相(xiang)同，原代(dai)培養(yang)細(xi)胞壹般(ban)對pH變動耐受(shou)差(cha)，無限(xian)細(xi)胞系耐(nai)受(shou)力(li)強。

　　但(dan)總體(ti)來(lai)說(shuo)，細(xi)胞耐酸(suan)性比耐(nai)堿性強壹些(xie)，偏酸(suan)環境(jing)中(zhong)更(geng)利於(yu)細(xi)胞生長(chang)。因此(ci)，我們(men)在配(pei)制培(pei)養(yang)用液時(shi)，可(ke)把(ba)液體的(de)pH稍微(wei)調得(de)偏酸(suan)壹些(xie)。液(ye)體在(zai)經過0.10um或(huo)0.22um濾(lv)膜(mo)過濾(lv)時(shi)，溶(rong)液(ye)的(de)pH還會向(xiang)上(shang)浮(fu)動0.2左(zuo)右(you)。

　　人羊(yang)膜(mo)間(jian)充質基質細(xi)胞質量(liang)可(ke)靠，售後有保(bao)障（編(bian)輯(ji)：tanxi）