人(ren)肺(fei)巨細(xi)胞癌(ai)(PG)的(de)高轉移亞系(xi)

迷人的(de)實驗，放(fang)心的(de)選擇(ze)

我(wo)司(si)細(xi)胞(bao)近3000種，來源(yuan)於美(mei)國ATCC,細(xi)胞(bao)都(dou)是經(jing)過(guo)嚴(yan)格質(zhi)量(liang)控(kong)制，在(zai)中(zhong)國大(da)陸努(nu)力搭建正(zheng)牌(pai)細(xi)胞與國內(nei)廣(guang)大(da)科研人員之間的(de)溝(gou)通橋(qiao)梁(liang)。為(wei)您(nin)提供人(ren)肺(fei)巨細(xi)胞癌(ai)(PG)的(de)高轉移亞系(xi)外(wai)，還(hai)有(you)更(geng)多(duo)相關實驗產(chan)品(pin)，標(biao)準(zhun)品(pin)，細胞(bao)株(zhu)和(he)實驗技(ji)術服務(wu)等等前(qian)期(qi)後續服務(wu)。 

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人肺(fei)巨細(xi)胞癌(ai)(PG)的(de)高轉移亞系(xi)細(xi)胞株(zhu)

　　Q1. 人肺(fei)巨細(xi)胞癌(ai)(PG)的(de)高轉移亞系(xi)液體(ti)培養基(ji)的(de)保(bao)存是冷(leng)藏(zang)好(hao)？還(hai)是(shi)冷(leng)凍好(hao)？

　　要冷(leng)藏(zang)！！因為(wei)液體(ti)培養基(ji)經(jing)冷(leng)凍後再(zai)經溶化時，其(qi)溶液的(de)pH值會發(fa)生(sheng)改變，溶液往(wang)往(wang)變堿(jian)，某些(xie)成分溶解也(ye)會受(shou)到(dao)影(ying)響(xiang)對(dui)細(xi)胞(bao)生長(chang)不(bu)利。故(gu)液體(ti)培養基(ji)壹(yi)定(ding)要存放在(zai)冷(leng)藏(zang)箱中，通常(chang)液體(ti)培養基(ji)在(zai)冷(leng)藏(zang)條件下(xia)可存放6個(ge)月(yue) ~ 壹年。

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　　Q2.人肺(fei)巨細(xi)胞癌(ai)(PG)的(de)高轉移亞系(xi) 液體(ti)培養基(ji)中(zhong)谷(gu)氨(an)酰胺的(de)作用，及使(shi)用方法。

　　幾(ji)乎所有(you)的(de)細胞(bao)對谷(gu)氨酰胺有(you)較(jiao)高的(de)要求(qiu)，細胞(bao)需要谷(gu)氨(an)酰胺合成(cheng)蛋白質(zhi)，在(zai)缺(que)少(shao)谷氨酰(xian)胺(an)時，細胞(bao)生長(chang)不(bu)良而死亡(wang)。所以，各(ge)種培養液中(zhong)都含(han)有(you)較(jiao)大(da)量(liang)的(de)谷氨(an)酰胺(an)。谷氨酰胺(an)在(zai)溶液中(zhong)很(hen)不(bu)穩定(ding)，應(ying)置-20 ?C冰凍(dong)保(bao)存，用前(qian)加(jia)入培養基(ji)中(zhong)。加(jia)有(you)谷氨(an)酰(xian)胺(an)的(de)液體(ti)培養基(ji)4 ?C 冰(bing)箱(xiang)儲(chu)存兩周以上(shang)時(shi)，應(ying)重(zhong)新加(jia)入原來量(liang)的(de)谷氨(an)酰胺(an)。基(ji)礎醫(yi)學細(xi)胞(bao)中(zhong)心在(zai)其(qi)服務(wu)項(xiang)目(mu)中配制(zhi)分裝(zhuang)了(le)高濃(nong)度(du)（100倍）的(de)谷氨(an)酰胺(an)溶液（1ml/支(zhi)）。每支1ml的(de)谷氨(an)酰胺(an)加到(dao)99ml*培養基(ji)中(zhong)，其(qi)終(zhong)濃(nong)度(du)為(wei)2mM/ml培養基(ji)。包裝為(wei)粉紅(hong)色，-24?C保(bao)存。

　　Q3.細胞計(ji)數及存活測試
1、原(yuan)理：
(1)計(ji)算細胞數目(mu)可用(yong)血(xue)球(qiu)計(ji)數盤(pan)或是Coultercounter粒(li)子計(ji)數器(qi)自動(dong)計(ji)數。
(2)血(xue)球(qiu)計(ji)數盤(pan)壹般(ban)有(you)二個(ge)chambers，每(mei)個(ge)chamber中(zhong)細刻(ke)9個(ge)1mm2大(da)正方形，其中4個(ge)角(jiao)落(luo)之正方(fang)形再(zai)細(xi)刻(ke)16個(ge)小格，深(shen)度(du)均(jun)為(wei)0.1mm。當chamber上(shang)方(fang)蓋上(shang)蓋玻片(pian)後(hou)，每(mei)個(ge)大(da)正方形之體(ti)積為(wei)1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使(shi)用時，計(ji)數每(mei)個(ge)大(da)正方形內(nei)之細胞(bao)數目(mu)，乘以稀(xi)釋(shi)倍(bei)數，再(zai)乘以104，即為(wei)每(mei)ml中之細胞(bao)數目(mu)。
(3)存活測試之步(bu)驟(zhou)為(wei)dyeexclusion，利用(yong)染料會滲(shen)入死(si)細胞(bao)中(zhong)而呈色(se)，而活細(xi)胞因(yin)細胞膜完整(zheng)，染料無(wu)法滲(shen)入而不(bu)會呈(cheng)色(se)。壹般(ban)使(shi)用藍色之trypan blue染料，如果細(xi)胞(bao)不(bu)易(yi)吸(xi)收trypan blue，則(ze)用(yong)紅(hong)色之Erythrosin bluish。計(ji)算細胞活(huo)率：活(huo)細(xi)胞數/(活(huo)細胞(bao)數+死(si)細胞(bao)數)×100%。計(ji)數應(ying)在(zai)臺(tai)盼蘭染色後數分鐘(zhong)內(nei)完成(cheng)，隨時間延長(chang)，部分活(huo)細(xi)胞也(ye)開(kai)始攝取(qu)染料;因(yin)為(wei)臺(tai)盼蘭對(dui)蛋白質(zhi)有(you)很(hen)強的(de)親(qin)和力(li)，用(yong)不(bu)含(han)血(xue)清(qing)的(de)稀(xi)釋(shi)液，可(ke)以使(shi)染色計(ji)數更(geng)為(wei)準(zhun)確(que)。

　　Q4.細胞特性
在(zai)細(xi)胞培養之前(qian)，我(wo)們(men)要(yao)了(le)解(jie)壹下(xia)妳所要(yao)養(yang)細(xi)胞的(de)基(ji)本(ben)特性，這(zhe)點(dian)可(ke)以從細(xi)胞的(de)產品(pin)說(shuo)明書(shu)或者從(cong)ATCC細胞(bao)庫(ku)查詢(xun)。除(chu)此(ci)之外(wai)我(wo)們(men)還(hai)要(yao)知(zhi)道每(mei)管細(xi)胞(bao)的(de)數量(liang)，建議(yi)分裂或傳代(dai)的(de)比例，和(he)已(yi)知細胞的(de)傳代(dai)代次(ci)等信(xin)息(xi)。

　　Q5.準備培養基(ji)
復(fu)蘇細(xi)胞時(shi)需要準(zhun)備(bei)合適(shi)的(de)培養基(ji)，血(xue)清(qing)和細胞(bao)生長(chang)所需的(de)添加(jia)劑(ji)。大(da)部分培養細胞所用(yong)的(de)培養體(ti)系(xi)，可(ke)以在(zai)訂購(gou)細(xi)胞(bao)系(xi)時(shi)獲得。
雖(sui)然(ran)大(da)多數細(xi)胞系(xi)可(ke)以在(zai)不(bu)止(zhi)壹種培養基(ji)中(zhong)生(sheng)長(chang)，但是當培養基(ji)改(gai)變時(shi)，細(xi)胞的(de)性質(zhi)也(ye)會變化。因此(ci)，使(shi)用細胞庫(ku)推薦(jian)的(de)培養基(ji)來培養細胞會獲得的(de)效果(guo)。

　　Q6.開啟凍存管
1.準備(bei)壹個(ge)培養瓶，加入(ru)適(shi)宜細(xi)胞培養的(de)培養基(ji)，液體(ti)體(ti)積按(an)照(zhao)說(shuo)明書(shu)的(de)推薦(jian)配置，並平衡培養基(ji)的(de)溫(wen)度(du)和pH（CO2）。　
2.在(zai)37℃水浴中或細胞(bao)的(de)正常(chang)生長(chang)溫(wen)度(du)下(xia)將凍(dong)存管輕輕搖動。解凍(dong)要(yao)快(kuai)，約2分鐘(zhong)或直到(dao)冰晶(jing)融(rong)化即可(ke)。
3.從(cong)水浴中取(qu)出(chu)凍(dong)存管並用(yong)浸(jin)泡(pao)或噴灑70%乙醇(chun)的(de)方式(shi)來消(xiao)毒(du)。進(jin)壹(yi)步(bu)的(de)操(cao)作均(jun)需在(zai)無(wu)菌(jun)操(cao)作臺(tai)中嚴(yan)格無(wu)菌(jun)條件下(xia)進(jin)行。
4.擰(ning)開(kai)凍存管的(de)管帽(mao)並將內(nei)容物(wu)轉移到(dao)壹個(ge)含(han)有(you)9 ml推薦(jian)培養基(ji)的(de)無菌(jun)離心管中(zhong)。通過(guo)溫(wen)和(he)離心（125×g 10 min）除(chu)去冷(leng)凍保(bao)護(hu)劑(ji)（DMSO）。棄去上(shang)清(qing)，並(bing)用(yong)1或2 ml*培養基(ji)重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞。將這(zhe)些(xie)細胞(bao)懸(xuan)液轉移到(dao)含(han)有(you)*培養基(ji)的(de)培養瓶中並(bing)輕輕搖動以*混(hun)勻。
5.培養24小時後檢(jian)查細(xi)胞狀(zhuang)態並在(zai)需要時(shi)進(jin)行傳代(dai)。

　　Q7. 人肺(fei)巨細(xi)胞癌(ai)(PG)的(de)高轉移亞系(xi) 培養用液pH對(dui)細胞生(sheng)長(chang)的(de)影(ying)響(xiang)

　　由於，大(da)多數細(xi)胞適(shi)宜pH為(wei)7.2~7.4，偏(pian)離此範圍(wei)對細(xi)胞將產(chan)生有(you)害的(de)影(ying)響(xiang)。各(ge)種細胞(bao)對(dui)pH的(de)要求(qiu)也(ye)不(bu)*相(xiang)同(tong)，原(yuan)代培養細胞壹(yi)般(ban)對pH變動(dong)耐(nai)受(shou)差(cha)，無(wu)限細(xi)胞系(xi)耐(nai)受(shou)力(li)強(qiang)。

　　但總(zong)體(ti)來說(shuo)，細胞(bao)耐(nai)酸性比耐堿性強(qiang)壹(yi)些(xie)，偏酸(suan)環(huan)境(jing)中更(geng)利於(yu)細(xi)胞生長(chang)。因此(ci)，我(wo)們(men)在(zai)配制(zhi)培養用液時(shi)，可把(ba)液體(ti)的(de)pH稍(shao)微(wei)調得偏酸壹些(xie)。液體(ti)在(zai)經(jing)過(guo)0.10um或0.22um濾膜過(guo)濾時，溶液的(de)pH還(hai)會向(xiang)上(shang)浮(fu)動(dong)0.2左(zuo)右(you)。

人肺(fei)巨細(xi)胞癌(ai)(PG)的(de)高轉移亞系(xi)

　　人肺(fei)巨細(xi)胞癌(ai)(PG)的(de)高轉移亞系(xi)質(zhi)量(liang)可靠(kao)，售(shou)後(hou)有(you)保(bao)障（編(bian)輯：tanxi）