人(ren)腦幹(gan)神(shen)經元(yuan)

迷人(ren)的(de)實驗(yan)，放(fang)心的(de)選(xuan)擇(ze)

我(wo)司(si)細(xi)胞近(jin)3000種(zhong)，來(lai)源(yuan)於(yu)美(mei)國ATCC,細(xi)胞都(dou)是(shi)經過嚴(yan)格質(zhi)量(liang)控制，在中國(guo)大陸努力(li)搭(da)建正牌(pai)細(xi)胞與(yu)國(guo)內(nei)廣大(da)科研人(ren)員之間的(de)溝通(tong)橋梁。為您提供人(ren)腦幹(gan)神(shen)經元(yuan)外(wai)，還有(you)更(geng)多相(xiang)關(guan)實驗(yan)產品，標(biao)準品，細(xi)胞株(zhu)和(he)實驗(yan)技術服務(wu)等等(deng)前(qian)期(qi)後(hou)續服務(wu)。 

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由我(wo)司(si)*銷售。

細(xi)胞株(zhu)

　　Q1. 液體培養(yang)基的(de)保(bao)存(cun)是(shi)冷(leng)藏(zang)好？還是(shi)冷(leng)凍好？

　　要(yao)冷藏(zang)！！因(yin)為液體培養(yang)基經冷(leng)凍後(hou)再經溶化時，其(qi)溶液(ye)的(de)pH值(zhi)會發(fa)生(sheng)改變，溶液(ye)往(wang)往(wang)變堿，某(mou)些(xie)成分(fen)溶解也(ye)會受(shou)到(dao)影響(xiang)對(dui)細(xi)胞生(sheng)長不利(li)。故液體培養(yang)基壹(yi)定要(yao)存放(fang)在冷藏(zang)箱(xiang)中，通常液(ye)體培養(yang)基在冷藏(zang)條(tiao)件(jian)下可存(cun)放(fang)6個月 ~ 壹年(nian)。

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　　Q2. 液體培養(yang)基中(zhong)谷(gu)氨酰胺的(de)作(zuo)用(yong)，及使(shi)用(yong)方法。

　　幾(ji)乎所(suo)有的(de)細(xi)胞對(dui)谷(gu)氨(an)酰胺有較(jiao)高的(de)要(yao)求(qiu)，細(xi)胞需(xu)要(yao)谷氨(an)酰胺合成蛋(dan)白(bai)質(zhi)，在缺(que)少(shao)谷(gu)氨(an)酰胺時，細(xi)胞生(sheng)長不良(liang)而死亡。所以(yi)，各(ge)種(zhong)培養(yang)液中(zhong)都(dou)含(han)有較(jiao)大量(liang)的(de)谷(gu)氨(an)酰(xian)胺。谷氨(an)酰(xian)胺在溶液(ye)中很(hen)不穩定，應置-20 ?C冰(bing)凍保(bao)存(cun)，用(yong)前加(jia)入培養(yang)基中(zhong)。加(jia)有(you)谷氨(an)酰胺的(de)液(ye)體培養(yang)基4 ?C 冰(bing)箱(xiang)儲存兩(liang)周以(yi)上(shang)時，應重(zhong)新(xin)加(jia)入原來(lai)量的(de)谷(gu)氨(an)酰(xian)胺。基礎(chu)醫(yi)學細(xi)胞中(zhong)心(xin)在其(qi)服務(wu)項目(mu)中配(pei)制分(fen)裝了高(gao)濃度（100倍(bei)）的(de)谷(gu)氨(an)酰(xian)胺溶液(ye)（1ml/支）。每支1ml的(de)谷(gu)氨(an)酰(xian)胺加(jia)到(dao)99ml*培養(yang)基中(zhong)，其(qi)終(zhong)濃度為2mM/ml培養(yang)基。包裝為粉(fen)紅(hong)色，-24?C保存(cun)。

　　Q3.細(xi)胞計數(shu)及存(cun)活(huo)測試
1、原理(li)：
(1)計算(suan)細(xi)胞數(shu)目(mu)可用(yong)血球計數(shu)盤(pan)或是(shi)Coultercounter粒(li)子計數(shu)器自(zi)動計數(shu)。
(2)血球計數(shu)盤(pan)壹般(ban)有二個chambers，每個chamber中細(xi)刻9個(ge)1mm2大正(zheng)方(fang)形，其(qi)中4個(ge)角(jiao)落(luo)之正方(fang)形再(zai)細(xi)刻16個(ge)小(xiao)格，深度(du)均(jun)為0.1mm。當(dang)chamber上(shang)方蓋上(shang)蓋玻片後(hou)，每個大正(zheng)方(fang)形之體積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用(yong)時，計數(shu)每個大正(zheng)方(fang)形內(nei)之細(xi)胞數(shu)目(mu)，乘以(yi)稀釋倍(bei)數，再(zai)乘以(yi)104，即為每ml中之細(xi)胞數(shu)目(mu)。
(3)存活(huo)測試之步(bu)驟為dyeexclusion，利(li)用(yong)染料(liao)會(hui)滲(shen)入死細(xi)胞中(zhong)而(er)呈色，而(er)活(huo)細(xi)胞因(yin)細(xi)胞膜完整，染料(liao)無(wu)法滲入而(er)不會(hui)呈色。壹(yi)般(ban)使(shi)用(yong)藍色之trypan blue染料(liao)，如(ru)果(guo)細(xi)胞不易(yi)吸收(shou)trypan blue，則(ze)用(yong)紅色(se)之Erythrosin bluish。計算(suan)細(xi)胞活(huo)率：活細(xi)胞數(shu)/(活(huo)細(xi)胞數(shu)+死細(xi)胞數(shu))×100%。計數(shu)應在臺盼(pan)蘭染色後(hou)數分(fen)鐘(zhong)內(nei)完成，隨(sui)時(shi)間延(yan)長，部(bu)分(fen)活(huo)細(xi)胞也(ye)開始(shi)攝(she)取(qu)染料(liao);因(yin)為(wei)臺盼(pan)蘭對(dui)蛋(dan)白(bai)質(zhi)有(you)很強的(de)親(qin)和(he)力(li)，用(yong)不含(han)血清(qing)的(de)稀(xi)釋液，可(ke)以(yi)使染色計數(shu)更為(wei)準(zhun)確(que)。

　　Q4.細(xi)胞特(te)性(xing)
在細(xi)胞培養(yang)之前，我(wo)們(men)要(yao)了解壹下(xia)妳(ni)所要(yao)養(yang)細(xi)胞的(de)基本特性(xing)，這(zhe)點(dian)可以(yi)從細(xi)胞的(de)產(chan)品說明(ming)書或者(zhe)從(cong)ATCC細(xi)胞庫查詢(xun)。除此之外我(wo)們(men)還要(yao)知道(dao)每管細(xi)胞的(de)數(shu)量(liang)，建議分(fen)裂(lie)或(huo)傳(chuan)代(dai)的(de)比(bi)例(li)，和已知細(xi)胞的(de)傳(chuan)代(dai)代(dai)次等(deng)信(xin)息(xi)。

　　Q5.準備培養(yang)基
復(fu)蘇(su)細(xi)胞時(shi)需(xu)要(yao)準備合(he)適(shi)的(de)培養(yang)基，血(xue)清(qing)和細(xi)胞生(sheng)長所(suo)需的(de)添加(jia)劑(ji)。大部(bu)分(fen)培養(yang)細(xi)胞所(suo)用(yong)的(de)培養(yang)體系，可以(yi)在訂(ding)購細(xi)胞系時獲得(de)。
雖然大(da)多數細(xi)胞系可以(yi)在不止壹種(zhong)培養(yang)基中(zhong)生(sheng)長，但(dan)是(shi)當(dang)培養(yang)基改(gai)變時，細(xi)胞的(de)性(xing)質(zhi)也(ye)會變化。因此，使用(yong)細(xi)胞庫推薦(jian)的(de)培養(yang)基來(lai)培養(yang)細(xi)胞會(hui)獲(huo)得(de)的(de)效(xiao)果(guo)。

　　Q6.開啟(qi)凍存(cun)管
1.準(zhun)備壹(yi)個(ge)培養(yang)瓶，加(jia)入適(shi)宜細(xi)胞培養(yang)的(de)培養(yang)基，液(ye)體體積按照說明(ming)書的(de)推薦(jian)配(pei)置(zhi)，並(bing)平衡(heng)培養(yang)基的(de)溫(wen)度(du)和(he)pH（CO2）。　
2.在37℃水浴中(zhong)或(huo)細(xi)胞的(de)正(zheng)常(chang)生(sheng)長溫(wen)度下將凍存(cun)管輕(qing)輕(qing)搖動。解凍要(yao)快(kuai)，約(yue)2分(fen)鐘(zhong)或(huo)直(zhi)到(dao)冰晶(jing)融化即可。
3.從水浴中(zhong)取(qu)出(chu)凍存(cun)管並(bing)用(yong)浸泡或(huo)噴(pen)灑(sa)70%乙醇的(de)方(fang)式(shi)來(lai)消毒(du)。進(jin)壹步(bu)的(de)操(cao)作均(jun)需在無(wu)菌操(cao)作臺中嚴格無(wu)菌條(tiao)件(jian)下進(jin)行。
4.擰開凍存(cun)管的(de)管帽(mao)並將內(nei)容(rong)物轉移到(dao)壹個(ge)含有(you)9 ml推薦(jian)培養(yang)基的(de)無(wu)菌離(li)心(xin)管中(zhong)。通過溫(wen)和(he)離(li)心(xin)（125×g 10 min）除去(qu)冷(leng)凍保(bao)護(hu)劑(ji)（DMSO）。棄去(qu)上(shang)清(qing)，並用(yong)1或2 ml*培養(yang)基重(zhong)懸(xuan)細(xi)胞。將這些(xie)細(xi)胞懸(xuan)液轉移到(dao)含有(you)*培養(yang)基的(de)培養(yang)瓶中並(bing)輕(qing)輕(qing)搖動以(yi)*混勻。
5.培養(yang)24小(xiao)時(shi)後(hou)檢查細(xi)胞狀(zhuang)態並(bing)在需要(yao)時進(jin)行傳(chuan)代(dai)。

　　Q7. 培養(yang)用(yong)液pH對(dui)細(xi)胞生(sheng)長的(de)影響(xiang)

　　由於(yu)，大(da)多數細(xi)胞適(shi)宜pH為(wei)7.2~7.4，偏(pian)離(li)此(ci)範圍對(dui)細(xi)胞將產生(sheng)有害(hai)的(de)影響(xiang)。各(ge)種(zhong)細(xi)胞對(dui)pH的(de)要(yao)求(qiu)也(ye)不*相(xiang)同(tong)，原代(dai)培養(yang)細(xi)胞壹(yi)般(ban)對(dui)pH變動耐受差，無(wu)限(xian)細(xi)胞系耐受力(li)強(qiang)。

　　但總(zong)體來(lai)說，細(xi)胞耐酸性(xing)比(bi)耐堿性(xing)強(qiang)壹(yi)些(xie)，偏(pian)酸(suan)環(huan)境(jing)中更(geng)利於(yu)細(xi)胞生(sheng)長。因(yin)此，我(wo)們(men)在配制培養(yang)用(yong)液時(shi)，可(ke)把(ba)液體的(de)pH稍(shao)微調(tiao)得(de)偏(pian)酸(suan)壹(yi)些(xie)。液(ye)體在經過0.10um或(huo)0.22um濾(lv)膜過濾(lv)時，溶液(ye)的(de)pH還會(hui)向(xiang)上(shang)浮動0.2左(zuo)右(you)。

　　質(zhi)量(liang)可靠，售後(hou)有保障（編輯(ji)：tanxi）