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首(shou)頁(ye)-技(ji)術(shu)文(wen)章(zhang)-人輸(shu)子(zi)宮平滑肌細胞(bao)
迷人(ren)的(de)實驗,放(fang)心(xin)的(de)選擇(ze)
我(wo)司(si)細胞(bao)近3000種(zhong),來(lai)源於美國ATCC,細胞(bao)都是經(jing)過嚴(yan)格質量(liang)控制(zhi),在中(zhong)國大(da)陸(lu)努(nu)力(li)搭(da)建正(zheng)牌(pai)細胞(bao)與(yu)國內(nei)廣大科研人(ren)員(yuan)之(zhi)間的(de)溝通橋(qiao)梁(liang)。為您提供人輸(shu)子(zi)宮平滑肌細胞(bao)外,還有(you)更多相關實驗產(chan)品(pin),標準品(pin),細胞(bao)株和實驗技(ji)術(shu)服(fu)務(wu)等(deng)等前(qian)期(qi)後(hou)續(xu)服(fu)務(wu)。
人(ren)輸子(zi)宮平滑肌細胞(bao)的產(chan)品(pin)介紹(shao)
由(you)我司(si)*銷(xiao)售。

細胞(bao)株
Q1. 培養用(yong)液pH對細胞(bao)生長(chang)的(de)影響
由於(yu),大(da)多數(shu)細胞(bao)適宜pH為7.2~7.4,偏(pian)離此(ci)範(fan)圍對細胞(bao)將產(chan)生(sheng)有(you)害的(de)影(ying)響(xiang)。各(ge)種(zhong)細胞(bao)對pH的(de)要求(qiu)也不*相同(tong),原代培養細胞(bao)壹般對pH變(bian)動耐受差(cha),無限細胞(bao)系(xi)耐受力(li)強(qiang)。
但總(zong)體(ti)來說(shuo),細胞(bao)耐酸(suan)性(xing)比(bi)耐(nai)堿(jian)性(xing)強(qiang)壹(yi)些(xie),偏(pian)酸(suan)環境(jing)中(zhong)更利於(yu)細胞(bao)生長(chang)。因(yin)此,我們在(zai)配制培(pei)養用(yong)液時(shi),可(ke)把液體的pH稍(shao)微(wei)調(tiao)得偏(pian)酸(suan)壹些(xie)。液體在經過0.10um或0.22um濾(lv)膜(mo)過(guo)濾(lv)時(shi),溶(rong)液(ye)的(de)pH還會(hui)向(xiang)上(shang)浮動0.2左右(you)。
Q2. 液體培(pei)養基(ji)中(zhong)谷(gu)氨酰(xian)胺(an)的作用(yong),及使用(yong)方法。
幾(ji)乎所(suo)有(you)的細胞(bao)對谷(gu)氨酰(xian)胺(an)有(you)較(jiao)高的要(yao)求(qiu),細胞(bao)需(xu)要谷(gu)氨酰(xian)胺(an)合成(cheng)蛋(dan)白(bai)質,在(zai)缺少谷(gu)氨酰(xian)胺(an)時,細胞(bao)生長(chang)不(bu)良而死亡(wang)。所(suo)以,各種(zhong)培(pei)養液中(zhong)都含(han)有(you)較(jiao)大量(liang)的谷(gu)氨酰(xian)胺(an)。谷(gu)氨酰(xian)胺(an)在溶液中(zhong)很(hen)不(bu)穩(wen)定,應置(zhi)-20 ?C冰(bing)凍保(bao)存,用(yong)前加(jia)入(ru)培(pei)養基(ji)中(zhong)。加有(you)谷(gu)氨酰(xian)胺(an)的液體培(pei)養基(ji)4 ?C 冰(bing)箱儲存兩(liang)周以上(shang)時(shi),應(ying)重(zhong)新加入(ru)原來量(liang)的谷(gu)氨酰(xian)胺(an)。基(ji)礎(chu)醫學(xue)細胞(bao)中(zhong)心(xin)在(zai)其服(fu)務(wu)項目中(zhong)配制分裝(zhuang)了(le)高濃度(du)(100倍)的谷(gu)氨酰(xian)胺(an)溶液(1ml/支(zhi))。每支(zhi)1ml的谷(gu)氨酰(xian)胺(an)加到99ml*培養基(ji)中(zhong),其終(zhong)濃度(du)為2mM/ml培(pei)養基(ji)。包(bao)裝(zhuang)為粉(fen)紅色,-24?C保存。
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Q3.細胞(bao)計數(shu)及存活(huo)測試
1、原理(li):
(1)計(ji)算細胞(bao)數(shu)目可用(yong)血球計數(shu)盤或是Coultercounter粒(li)子(zi)計數(shu)器自(zi)動計數(shu)。
(2)血球計數(shu)盤壹(yi)般有(you)二(er)個(ge)chambers,每(mei)個(ge)chamber中(zhong)細刻(ke)9個(ge)1mm2大(da)正(zheng)方(fang)形(xing),其(qi)中(zhong)4個(ge)角落之正(zheng)方(fang)形(xing)再(zai)細刻(ke)16個(ge)小格,深度(du)均(jun)為0.1mm。當(dang)chamber上(shang)方(fang)蓋(gai)上(shang)蓋(gai)玻片(pian)後(hou),每(mei)個(ge)大(da)正(zheng)方(fang)形(xing)之(zhi)體積(ji)為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使(shi)用(yong)時,計(ji)數(shu)每個(ge)大(da)正(zheng)方(fang)形(xing)內(nei)之細胞(bao)數(shu)目,乘以稀釋(shi)倍數(shu),再乘(cheng)以104,即為每(mei)ml中(zhong)之細胞(bao)數(shu)目。
(3)存活(huo)測試之(zhi)步(bu)驟(zhou)為dyeexclusion,利用(yong)染料會(hui)滲(shen)入死細胞(bao)中(zhong)而呈(cheng)色,而活(huo)細胞(bao)因細胞(bao)膜(mo)完整(zheng),染料無法滲(shen)入(ru)而不會(hui)呈(cheng)色。壹般(ban)使(shi)用(yong)藍(lan)色之trypan blue染料,如(ru)果(guo)細胞(bao)不易(yi)吸(xi)收trypan blue,則(ze)用(yong)紅色之Erythrosin bluish。計(ji)算細胞(bao)活(huo)率(lv):活(huo)細胞(bao)數(shu)/(活(huo)細胞(bao)數(shu)+死細胞(bao)數(shu))×100%。計數(shu)應在(zai)臺盼蘭染色後(hou)數(shu)分鐘(zhong)內完成(cheng),隨時(shi)間延(yan)長(chang),部(bu)分活(huo)細胞(bao)也開始攝取(qu)染料;因(yin)為臺盼蘭對蛋(dan)白(bai)質有(you)很(hen)強(qiang)的(de)親和力(li),用(yong)不含(han)血(xue)清(qing)的(de)稀(xi)釋(shi)液(ye),可(ke)以使染色計數(shu)更為準確(que)。
人小氣(qi)道(dao)上(shang)皮(pi)細胞(bao) 3230
Q4.細胞(bao)特性(xing)
在(zai)細胞(bao)培養之前(qian),我(wo)們要了(le)解(jie)壹下(xia)妳(ni)所(suo)要(yao)養細胞(bao)的基(ji)本(ben)特性(xing),這(zhe)點(dian)可(ke)以從細胞(bao)的產(chan)品(pin)說(shuo)明(ming)書或者(zhe)從ATCC細胞(bao)庫查詢(xun)。除(chu)此(ci)之外(wai)我們還要(yao)知(zhi)道(dao)每管細胞(bao)的數(shu)量(liang),建議分裂(lie)或傳代的(de)比(bi)例,和已知(zhi)細胞(bao)的傳代代(dai)次等(deng)信(xin)息(xi)。
Q5.準備(bei)培(pei)養基(ji)
復(fu)蘇(su)細胞(bao)時需(xu)要準備(bei)合(he)適(shi)的(de)培養基(ji),血(xue)清和細胞(bao)生長(chang)所(suo)需(xu)的添(tian)加(jia)劑。大(da)部(bu)分培養細胞(bao)所(suo)用(yong)的培(pei)養體系(xi),可以在訂(ding)購細胞(bao)系(xi)時獲(huo)得。
雖然大(da)多數(shu)細胞(bao)系(xi)可以在不(bu)止(zhi)壹(yi)種(zhong)培(pei)養基(ji)中(zhong)生長(chang),但是當(dang)培養基(ji)改(gai)變時,細胞(bao)的性(xing)質也(ye)會(hui)變(bian)化(hua)。因此(ci),使用(yong)細胞(bao)庫推薦(jian)的培(pei)養基(ji)來(lai)培養細胞(bao)會(hui)獲(huo)得的(de)效(xiao)果。
Q6.開(kai)啟(qi)凍(dong)存管
1.準備(bei)壹(yi)個(ge)培(pei)養瓶(ping),加入適宜(yi)細胞(bao)培養的培(pei)養基(ji),液(ye)體體積(ji)按照(zhao)說明(ming)書的(de)推薦(jian)配置(zhi),並平衡培養基(ji)的(de)溫(wen)度(du)和pH(CO2)。
2.在(zai)37℃水(shui)浴中(zhong)或細胞(bao)的正(zheng)常(chang)生長(chang)溫(wen)度(du)下(xia)將凍存管輕(qing)輕(qing)搖(yao)動。解(jie)凍要快,約2分鐘(zhong)或直(zhi)到(dao)冰(bing)晶(jing)融化(hua)即可。
3.從水(shui)浴中(zhong)取(qu)出(chu)凍(dong)存管並(bing)用(yong)浸泡或噴(pen)灑70%乙(yi)醇的方式(shi)來(lai)消(xiao)毒(du)。進(jin)壹步(bu)的(de)操(cao)作(zuo)均(jun)需(xu)在無菌(jun)操(cao)作(zuo)臺中(zhong)嚴(yan)格無菌(jun)條件(jian)下(xia)進(jin)行(xing)。
4.擰(ning)開(kai)凍(dong)存管的(de)管帽(mao)並(bing)將內容(rong)物轉移到壹個(ge)含(han)有(you)9 ml推薦(jian)培養基(ji)的(de)無菌(jun)離心(xin)管中(zhong)。通過(guo)溫(wen)和離心(xin)(125×g 10 min)除(chu)去冷凍保護(hu)劑(ji)(DMSO)。棄(qi)去上(shang)清(qing),並(bing)用(yong)1或2 ml*培(pei)養基(ji)重(zhong)懸細胞(bao)。將這些(xie)細胞(bao)懸液轉移到含有(you)*培養基(ji)的(de)培養瓶(ping)中(zhong)並輕(qing)輕(qing)搖(yao)動以*混勻(yun)。
5.培(pei)養24小時後(hou)檢(jian)查細胞(bao)狀態(tai)並在需(xu)要時(shi)進行(xing)傳代。
Q7. 培養用(yong)液pH對細胞(bao)生長(chang)的(de)影響
由於(yu),大(da)多數(shu)細胞(bao)適宜pH為7.2~7.4,偏(pian)離此(ci)範(fan)圍對細胞(bao)將產(chan)生(sheng)有(you)害的(de)影(ying)響(xiang)。各(ge)種(zhong)細胞(bao)對pH的(de)要求(qiu)也不*相同(tong),原代培養細胞(bao)壹般對pH變(bian)動耐受差(cha),無限細胞(bao)系(xi)耐受力(li)強(qiang)。
但總(zong)體(ti)來說(shuo),細胞(bao)耐酸(suan)性(xing)比(bi)耐(nai)堿(jian)性(xing)強(qiang)壹(yi)些(xie),偏(pian)酸(suan)環境(jing)中(zhong)更利於(yu)細胞(bao)生長(chang)。因(yin)此,我們在(zai)配制培(pei)養用(yong)液時(shi),可(ke)把液體的pH稍(shao)微(wei)調(tiao)得偏(pian)酸(suan)壹些(xie)。液體在經過0.10um或0.22um濾(lv)膜(mo)過(guo)濾(lv)時(shi),溶(rong)液(ye)的(de)pH還會(hui)向(xiang)上(shang)浮動0.2左右(you)。
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