人(ren)脂肪(fang)細胞(bao)--內(nei)臟

迷人(ren)的(de)實(shi)驗，放(fang)心(xin)的(de)選擇(ze)

我(wo)司(si)細(xi)胞近(jin)3000種，來(lai)源(yuan)於(yu)美(mei)國(guo)ATCC,細(xi)胞(bao)都(dou)是(shi)經過嚴格質量(liang)控制，在(zai)中國(guo)大(da)陸(lu)努(nu)力搭(da)建(jian)正(zheng)牌細胞與(yu)國內(nei)廣(guang)大(da)科研人(ren)員之(zhi)間的(de)溝通(tong)橋(qiao)梁。為您提(ti)供人(ren)脂肪(fang)細胞(bao)--內(nei)臟外(wai)，還有(you)更(geng)多相(xiang)關實(shi)驗產(chan)品(pin)，標(biao)準(zhun)品(pin)，細胞株(zhu)和(he)實(shi)驗技(ji)術服務(wu)等等前(qian)期(qi)後(hou)續服務(wu)。

人(ren)脂肪(fang)細胞(bao)--內(nei)臟的(de)產品(pin)介(jie)紹

由我司(si)*銷售。

細胞株

　　Q1. 培(pei)養用液pH對(dui)細(xi)胞生(sheng)長的(de)影(ying)響

　　由於(yu)，大(da)多數細胞(bao)適(shi)宜pH為(wei)7.2~7.4，偏(pian)離此(ci)範圍(wei)對(dui)細(xi)胞(bao)將產(chan)生有(you)害的(de)影(ying)響。各種細(xi)胞(bao)對(dui)pH的(de)要求(qiu)也不(bu)*相(xiang)同，原(yuan)代(dai)培(pei)養(yang)細胞壹(yi)般對(dui)pH變(bian)動耐受差，無限細胞(bao)系(xi)耐受力強(qiang)。

　　但(dan)總體(ti)來(lai)說(shuo)，細(xi)胞耐酸性比(bi)耐堿性(xing)強(qiang)壹些，偏(pian)酸(suan)環(huan)境(jing)中更(geng)利於(yu)細(xi)胞(bao)生(sheng)長。因此(ci)，我們(men)在(zai)配(pei)制(zhi)培(pei)養用液時(shi)，可(ke)把(ba)液體(ti)的(de)pH稍微(wei)調(tiao)得(de)偏(pian)酸(suan)壹(yi)些。液體(ti)在(zai)經(jing)過(guo)0.10um或(huo)0.22um濾(lv)膜(mo)過(guo)濾(lv)時(shi)，溶(rong)液的(de)pH還會向上(shang)浮動(dong)0.2左(zuo)右(you)。

　　Q2. 液體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)中谷氨(an)酰(xian)胺(an)的(de)作用(yong)，及使用方法(fa)。

　　幾乎(hu)所(suo)有(you)的(de)細胞(bao)對谷氨(an)酰(xian)胺(an)有(you)較(jiao)高(gao)的(de)要求(qiu)，細胞需要谷氨(an)酰(xian)胺(an)合(he)成蛋白質，在(zai)缺(que)少(shao)谷氨(an)酰(xian)胺(an)時(shi)，細(xi)胞生長不良(liang)而(er)死亡(wang)。所(suo)以，各種培(pei)養(yang)液中都(dou)含(han)有(you)較(jiao)大(da)量的(de)谷氨(an)酰(xian)胺(an)。谷氨(an)酰(xian)胺(an)在(zai)溶(rong)液中很(hen)不(bu)穩定，應置-20 ?C冰凍保(bao)存(cun)，用(yong)前加(jia)入培(pei)養基(ji)中。加(jia)有(you)谷氨(an)酰(xian)胺(an)的(de)液體(ti)培(pei)養(yang)基(ji)4 ?C 冰箱(xiang)儲(chu)存(cun)兩(liang)周以上(shang)時(shi)，應重新(xin)加(jia)入原(yuan)來(lai)量(liang)的(de)谷氨(an)酰(xian)胺(an)。基(ji)礎醫學(xue)細胞(bao)中心(xin)在(zai)其服務(wu)項(xiang)目(mu)中配(pei)制(zhi)分(fen)裝了高(gao)濃(nong)度(du)（100倍）的(de)谷氨(an)酰(xian)胺(an)溶(rong)液（1ml/支(zhi)）。每(mei)支1ml的(de)谷氨(an)酰(xian)胺(an)加(jia)到99ml*培養基(ji)中，其終濃度(du)為(wei)2mM/ml培養基(ji)。包裝(zhuang)為粉(fen)紅色(se)，-24?C保(bao)存(cun)。

人(ren)淋(lin)巴(ba)細胞

　　Q3.細胞計數(shu)及存(cun)活測試
1、原(yuan)理(li)：
(1)計算細胞(bao)數(shu)目(mu)可用血(xue)球(qiu)計數(shu)盤(pan)或(huo)是(shi)Coultercounter粒子(zi)計數器(qi)自動計數(shu)。
(2)血(xue)球(qiu)計數(shu)盤(pan)壹般有(you)二(er)個chambers，每個chamber中細(xi)刻(ke)9個1mm2大(da)正方形，其中4個角落之正方形再細(xi)刻(ke)16個小格，深度(du)均(jun)為(wei)0.1mm。當chamber上(shang)方蓋(gai)上(shang)蓋(gai)玻(bo)片(pian)後(hou)，每(mei)個大(da)正方形之體(ti)積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用時(shi)，計(ji)數每個大(da)正方形內(nei)之細胞數目(mu)，乘以稀(xi)釋(shi)倍數，再乘(cheng)以104，即(ji)為(wei)每ml中之(zhi)細(xi)胞(bao)數目(mu)。
(3)存(cun)活測試之步(bu)驟為(wei)dyeexclusion，利用(yong)染料會滲(shen)入(ru)死(si)細(xi)胞中而(er)呈色(se)，而(er)活細(xi)胞(bao)因細胞(bao)膜(mo)完(wan)整(zheng)，染料無法(fa)滲(shen)入(ru)而(er)不會(hui)呈色(se)。壹(yi)般(ban)使(shi)用(yong)藍色(se)之(zhi)trypan blue染料，如(ru)果(guo)細胞不(bu)易吸收trypan blue，則(ze)用(yong)紅色(se)之(zhi)Erythrosin bluish。計(ji)算(suan)細(xi)胞活率(lv)：活細(xi)胞(bao)數/(活細(xi)胞(bao)數+死細(xi)胞數)×100%。計(ji)數(shu)應在(zai)臺(tai)盼蘭染色(se)後(hou)數(shu)分(fen)鐘(zhong)內(nei)完成，隨(sui)時(shi)間(jian)延長，部(bu)分(fen)活細(xi)胞(bao)也開始攝(she)取(qu)染料;因為(wei)臺(tai)盼蘭對蛋白質有(you)很(hen)強(qiang)的(de)親和力(li)，用(yong)不含(han)血(xue)清(qing)的(de)稀(xi)釋(shi)液，可(ke)以使(shi)染色(se)計(ji)數(shu)更(geng)為(wei)準確(que)。

　人(ren)淋(lin)巴(ba)細胞

　　Q4.細胞特性(xing)
在(zai)細(xi)胞(bao)培(pei)養之前，我們(men)要(yao)了解壹(yi)下妳(ni)所(suo)要(yao)養細(xi)胞(bao)的(de)基本(ben)特性(xing)，這點可以從(cong)細胞(bao)的(de)產品(pin)說明書或(huo)者(zhe)從(cong)ATCC細胞(bao)庫(ku)查詢(xun)。除(chu)此(ci)之外(wai)我(wo)們(men)還要知道(dao)每管細胞(bao)的(de)數量(liang)，建議分裂(lie)或(huo)傳代的(de)比(bi)例，和已知細(xi)胞的(de)傳代代次(ci)等信(xin)息(xi)。

　　Q5.準備(bei)培養基
復蘇(su)細胞(bao)時(shi)需要準備合(he)適(shi)的(de)培養(yang)基，血(xue)清(qing)和(he)細(xi)胞生(sheng)長所(suo)需的(de)添加(jia)劑。大(da)部(bu)分(fen)培養細胞(bao)所(suo)用(yong)的(de)培養(yang)體(ti)系(xi)，可以在(zai)訂(ding)購細(xi)胞系(xi)時(shi)獲得(de)。
雖(sui)然(ran)大(da)多數細胞(bao)系(xi)可以在(zai)不(bu)止壹種培(pei)養(yang)基(ji)中生(sheng)長，但(dan)是(shi)當培(pei)養基(ji)改變(bian)時(shi)，細(xi)胞的(de)性質(zhi)也會(hui)變(bian)化。因此(ci)，使用(yong)細(xi)胞庫(ku)推薦的(de)培養(yang)基來培養細胞(bao)會(hui)獲得(de)的(de)效(xiao)果(guo)。

　　Q6.開啟凍(dong)存(cun)管
1.準備(bei)壹個培養瓶(ping)，加(jia)入適(shi)宜細(xi)胞培養的(de)培養(yang)基，液體(ti)體(ti)積按照說明書的(de)推薦(jian)配置，並平(ping)衡(heng)培(pei)養(yang)基(ji)的(de)溫度(du)和(he)pH（CO2）。　
2.在(zai)37℃水(shui)浴(yu)中或(huo)細(xi)胞的(de)正常(chang)生長溫度(du)下(xia)將凍(dong)存(cun)管輕輕(qing)搖動(dong)。解(jie)凍(dong)要(yao)快(kuai)，約(yue)2分鐘(zhong)或(huo)直(zhi)到冰晶融(rong)化即可。
3.從(cong)水浴(yu)中取(qu)出凍(dong)存(cun)管並用(yong)浸泡(pao)或(huo)噴(pen)灑(sa)70%乙(yi)醇(chun)的(de)方式來消(xiao)毒(du)。進(jin)壹步的(de)操(cao)作(zuo)均(jun)需在(zai)無(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)臺(tai)中嚴格無菌(jun)條件下(xia)進(jin)行。
4.擰(ning)開凍存(cun)管的(de)管帽並(bing)將內(nei)容物轉移到壹個含有(you)9 ml推(tui)薦(jian)培(pei)養(yang)基的(de)無菌(jun)離心(xin)管中。通(tong)過(guo)溫和離心(xin)（125×g 10 min）除(chu)去(qu)冷(leng)凍(dong)保(bao)護劑（DMSO）。棄(qi)去(qu)上(shang)清(qing)，並(bing)用(yong)1或(huo)2 ml*培(pei)養基(ji)重懸(xuan)細(xi)胞(bao)。將這些細(xi)胞(bao)懸(xuan)液轉(zhuan)移到含有(you)*培(pei)養(yang)基(ji)的(de)培養(yang)瓶(ping)中並(bing)輕(qing)輕(qing)搖動以*混勻(yun)。
5.培養24小時(shi)後(hou)檢(jian)查細(xi)胞(bao)狀態(tai)並(bing)在(zai)需要時(shi)進(jin)行傳代。

　　Q7. 培(pei)養用(yong)液pH對(dui)細(xi)胞生(sheng)長的(de)影(ying)響

　　由於(yu)，大(da)多數細胞(bao)適(shi)宜pH為(wei)7.2~7.4，偏(pian)離此(ci)範圍(wei)對(dui)細(xi)胞(bao)將產(chan)生有(you)害的(de)影(ying)響。各種細(xi)胞(bao)對(dui)pH的(de)要求(qiu)也不(bu)*相(xiang)同，原(yuan)代(dai)培(pei)養(yang)細胞壹(yi)般對(dui)pH變(bian)動耐受差，無限細胞(bao)系(xi)耐受力強(qiang)。

　　但(dan)總體(ti)來(lai)說(shuo)，細(xi)胞耐酸性比(bi)耐堿性(xing)強(qiang)壹些，偏(pian)酸(suan)環(huan)境(jing)中更(geng)利於(yu)細(xi)胞(bao)生(sheng)長。因此(ci)，我們(men)在(zai)配(pei)制(zhi)培(pei)養用液時(shi)，可(ke)把(ba)液體(ti)的(de)pH稍微(wei)調(tiao)得(de)偏(pian)酸(suan)壹(yi)些。液體(ti)在(zai)經(jing)過(guo)0.10um或(huo)0.22um濾(lv)膜(mo)過(guo)濾(lv)時(shi)，溶(rong)液的(de)pH還會向上(shang)浮動(dong)0.2左(zuo)右(you)。

　　質量可靠，售後(hou)有(you)保(bao)障（編(bian)輯：tanxi）