小鼠(shu)支氣(qi)管成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞(bao)_復(fu)蘇(su)的

　　細(xi)胞(bao)作為(wei)生(sheng)命組(zu)成(cheng)的zui小單(dan)元，研究其(qi)相關的生(sheng)物行為(wei)及(ji)其(qi)規(gui)律與本(ben)質，對(dui)於揭示(shi)生(sheng)命的奧秘(mi)，探(tan)索(suo)疾病的機理與治療(liao)手段(duan)，提(ti)高(gao)人(ren)類的生(sheng)存(cun)壽命(ming)與(yu)質(zhi)量，都有著重(zhong)要的意義。對(dui)細胞(bao)的研究(jiu)是壹個(ge)復(fu)雜的工(gong)程，細(xi)胞(bao)在人(ren)體內(nei)處(chu)於(yu)復(fu)雜的微環(huan)境之(zhi)中(zhong)，包括(kuo)溫度、氧氣(qi)濃度(du)、生(sheng)物因(yin)子(zi)濃(nong)度(du)、機(ji)械作(zuo)用、細(xi)胞(bao)間相互作用、細(xi)胞(bao)基質(zhi)間相互作用等(deng)，同(tong)時，細胞(bao)體積(ji)微小(xiao)、種類多(duo)樣，在(zai)細(xi)胞(bao)水平(ping)進行細胞(bao)識別(bie)、代(dai)謝(xie)物檢測、內(nei)部(bu)組(zu)分(fen)分(fen)析、細胞(bao)結構與功(gong)能表征、細(xi)胞(bao)間相互作用分(fen)析等工(gong)作也(ye)都有著很(hen)大的難度。小鼠支(zhi)氣(qi)管成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞(bao)，上海乾(qian)思(si)生(sheng)物公(gong)司細(xi)胞(bao)近3000種(zhong)，來(lai)源(yuan)於(yu)美國ATCC,細胞(bao)都是經(jing)過嚴格質量控(kong)制，在中(zhong)國大陸(lu)努(nu)力搭(da)建(jian)正(zheng)牌細(xi)胞(bao)與國(guo)內(nei)廣大科(ke)研(yan)人(ren)員(yuan)之(zhi)間的溝(gou)通橋(qiao)梁(liang)。為(wei)您提供(gong)小鼠(shu)支(zhi)氣(qi)管成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞(bao)外(wai)，還(hai)有更(geng)多(duo)相關實驗(yan)產品(pin)，標準(zhun)品(pin)，細(xi)胞(bao)株(zhu)和(he)實(shi)驗技術(shu)服(fu)務(wu)等等(deng)前期(qi)後續服(fu)務(wu)。

　　1. 小(xiao)鼠(shu)支(zhi)氣(qi)管成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞(bao)液體培(pei)養(yang)基的保存(cun)是(shi)冷藏好(hao)？還(hai)是冷(leng)凍好(hao)？

　　要(yao)冷(leng)藏(zang)！！因(yin)為(wei)液(ye)體培(pei)養(yang)基經(jing)冷凍後再(zai)經(jing)溶(rong)化(hua)時，其(qi)溶(rong)液(ye)的pH值會發(fa)生(sheng)改變，溶(rong)液(ye)往(wang)往(wang)變堿，某些成(cheng)分(fen)溶(rong)解(jie)也會(hui)受到影(ying)響對細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)不(bu)利(li)。故(gu)液體培(pei)養(yang)基壹定(ding)要(yao)存(cun)放在冷藏箱(xiang)中(zhong)，通(tong)常液(ye)體培(pei)養(yang)基在(zai)冷(leng)藏條件(jian)下(xia)可存(cun)放6個月 ~ 壹年(nian)。

　　2.小(xiao)鼠(shu)支(zhi)氣(qi)管成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞(bao) 液體培(pei)養(yang)基中(zhong)谷氨酰胺的作用，及(ji)使用方(fang)法(fa)。

　　幾(ji)乎(hu)所有(you)的細胞(bao)對谷氨酰胺有(you)較(jiao)高(gao)的要求，細胞(bao)需要(yao)谷氨酰胺合(he)成(cheng)蛋(dan)白質(zhi)，在(zai)缺少谷氨酰胺時(shi)，細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)不(bu)良(liang)而死(si)亡(wang)。所以(yi)，各種(zhong)培養液(ye)中(zhong)都含有(you)較(jiao)大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在(zai)溶(rong)液(ye)中很(hen)不(bu)穩(wen)定，應(ying)置-20 ?C冰(bing)凍保存(cun)，用前(qian)加(jia)入(ru)培養(yang)基中(zhong)。加(jia)有(you)谷氨酰胺的液體培(pei)養(yang)基4 ?C 冰(bing)箱儲存(cun)兩(liang)周以上時，應(ying)重新(xin)加(jia)入(ru)原來(lai)量的谷氨酰胺。基礎(chu)醫(yi)學(xue)細(xi)胞(bao)中心在(zai)其(qi)服(fu)務(wu)項目(mu)中(zhong)配(pei)制分(fen)裝了(le)高(gao)濃(nong)度(du)（100倍）的谷氨酰胺溶(rong)液(ye)（1ml/支）。每(mei)支1ml的谷氨酰胺加(jia)到99ml*培(pei)養(yang)基中(zhong)，其(qi)終(zhong)濃度(du)為(wei)2mM/ml培(pei)養基。包(bao)裝為(wei)粉紅(hong)色(se)，-24?C保存(cun)。

　　3. 小(xiao)鼠(shu)支(zhi)氣(qi)管成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞(bao) 培養(yang)用液(ye)pH對(dui)細胞(bao)生(sheng)長(chang)的影響

　　由(you)於(yu)，大多(duo)數細胞(bao)適宜(yi)pH為(wei)7.2~7.4，偏(pian)離此(ci)範(fan)圍(wei)對(dui)細胞(bao)將(jiang)產生(sheng)有害的影響。各種(zhong)細胞(bao)對pH的要求也不(bu)*相同(tong)，原代培養細(xi)胞(bao)壹般對(dui)pH變動耐受差(cha)，無(wu)限(xian)細(xi)胞(bao)系(xi)耐受力強(qiang)。

　　但(dan)總體來(lai)說(shuo)，細(xi)胞(bao)耐酸(suan)性(xing)比(bi)耐(nai)堿性(xing)強(qiang)壹些，偏(pian)酸(suan)環(huan)境中更(geng)利(li)於細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)。因(yin)此，我(wo)們在(zai)配制培養(yang)用液(ye)時(shi)，可把(ba)液體的pH稍(shao)微調得(de)偏酸(suan)壹些。液(ye)體在(zai)經(jing)過0.10um或0.22um濾(lv)膜(mo)過濾(lv)時，溶(rong)液(ye)的pH還(hai)會向(xiang)上浮動0.2左(zuo)右。

　　4.小(xiao)鼠(shu)支(zhi)氣(qi)管成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞(bao) 細胞(bao)傳代(dai)消化時所用胰酶濃(nong)度越高(gao)越(yue)好(hao)嗎？

　　不(bu)見得(de)！因(yin)為(wei)胰蛋(dan)白酶(mei)溶(rong)液(ye)的消化能力是和(he)溶(rong)液(ye)的pH、溫度、胰酶濃(nong)度及(ji)溶(rong)液(ye)中是(shi)否(fou)含(han)有(you)Ca++, Mg++離子(zi)和(he)血(xue)清(qing)等(deng)因(yin)素有(you)關。通常(chang)情(qing)況下，pH 8.0 , 溫度 37 oC 其(qi)作(zuo)用能力zui強(qiang)。另外(wai)，鈣(gai)、鎂離子(zi)及(ji)血(xue)清均能大大降(jiang)低(di)其(qi)消化能力。我們每(mei)次進行傳代消化前，壹定(ding)要(yao)用D-Hanks液(ye)或PBS液(ye)反(fan)復(fu)沖洗細胞(bao)培養(yang)瓶(ping)，以便於將(jiang)含血(xue)清的培養(yang)基沖(chong)洗幹(gan)凈，這樣就能大大提(ti)高(gao)消化液的消化能力。本(ben)中心通(tong)常(chang)使用的消化液濃度(du)為(wei)：

　　（1）０.０５％胰蛋(dan)白酶(mei)＋０.０２％ＥＤＴＡ；

　　（2）０.２５％胰蛋(dan)白酶(mei)＋０.０３％ＥＤＴＡ。

　　（3）0.25% 胰蛋(dan)白酶(mei)

　　溶(rong)液(ye)ｐＨ８.０～９.０；使用Ｄ－Ｈａｎｋ液(ye)配(pei)制。

　　多(duo)數細胞(bao)傳代(dai)消化可使用０.０５％胰蛋(dan)白酶(mei)＋０.０２％ＥＤＴＡ這(zhe)種消化液。

　　購(gou)買(mai)上海乾(qian)思(si)生(sheng)物細胞(bao)註(zhu)意事項(xiang)（乾(qian)思(si)生(sheng)物）發(fa)布

　　壹、客(ke)戶(hu)收(shou)到細(xi)胞(bao)先不(bu)開(kai)蓋(gai)，放在培養箱(xiang)靜(jing)置(zhi)若(ruo)幹(gan)小時(shi)後（看細(xi)胞(bao)密度(du)而定(ding)）在(zai)倒置顯(xian)微鏡(jing)下觀(guan)察細胞(bao)生(sheng)長(chang)情(qing)況，並對細(xi)胞(bao)進行不(bu)同(tong)倍數拍照（建(jian)議(yi)受收(shou)細胞(bao)時的培養(yang)基拍壹張(zhang)照(zhao)片(pian)，觀(guan)察培養基的顏色(se)和是(shi)否(fou)有(you)漏(lou)液情(qing)況，顯(xian)微鏡(jing)下拍細胞(bao)100X，200X各壹張(zhang)），排(pai)除(chu)細(xi)胞(bao)本(ben)身(shen)汙染(ran)的情(qing)況；

　　收(shou)到細(xi)胞(bao)未開(kai)封，出現汙染狀況我們負(fu)責(ze)免費(fei)發(fa)送壹株(zhu)細(xi)胞(bao)。

　　二(er)、如為(wei)貼壁細胞(bao)，請在(zai)顯(xian)微鏡(jing)下觀(guan)察細胞(bao)密度(du)：

　　1. 未(wei)超(chao)過80%匯合(he)度時(shi)，用75%酒(jiu)精(jing)（建(jian)議配置75%酒(jiu)精(jing)的水也是滅菌超(chao)純水，噴灑整個瓶(ping)消毒後放到超(chao)菌臺內，嚴格無菌操(cao)作(zuo)；然(ran)後打(da)開(kai)蓋(gai)子(zi)，先(xian)把(ba)培(pei)養(yang)基吸出(chu)10ml左(zuo)右，放在離心管(guan)裏，然(ran)後瓶(ping)口過(guo)火(huo)（嚴禁(jin)直接(jie)傾(qing)倒），這樣可(ke)以保證不(bu)汙(wu)染，再(zai)用10ml的移(yi)液管(guan)，將(jiang)剩(sheng)余(yu)的培液(ye)全部(bu)吸出(chu)，放於離心管(guan)中(zhong)，培養(yang)瓶(ping)中只剩(sheng)余(yu)10ml左(zuo)右培(pei)液(ye)就可以了。培養(yang)16hr(時間根(gen)據細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)情(qing)況調整）之(zhi)後(hou)，傳代(dai)或者(zhe)凍存(cun)。

　　2. 超(chao)過80%匯合(he)度時(shi)，請按(an)細(xi)胞(bao)培養(yang)條件(jian)傳(chuan)代培養。具(ju)體步(bu)驟(zhou)如下：

　　1) 棄(qi)去(qu)培(pei)養液，用3ml PBS（不(bu)含(han)鈣(gai)，鎂離子(zi)）洗1-2次；

　　2) 加(jia)1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於T25培(pei)養(yang)瓶(ping)中，倒轉放於37度培養(yang)箱(xiang)1-3分(fen)鐘(zhong)預熱，然(ran)後又(you)將(jiang)培養(yang)瓶(ping)倒轉大約30秒(miao)後(hou)，在(zai)倒置顯(xian)微鏡(jing)下觀(guan)察細胞(bao)消化情(qing)況，若(ruo)細(xi)胞(bao)大部(bu)分(fen)變圓分(fen)散(san)，輕(qing)敲(qiao)幾下(xia)培養(yang)培養瓶(ping)，細胞(bao)隨(sui)即(ji)脫落(luo)下來(lai)；

　　3) 加(jia)入(ru)6-8ml*培養(yang)基，吸出(chu)，分(fen)到新(xin)的培養(yang)瓶(ping)中，按(an)要(yao)求分(fen)瓶(ping)。

　　三(san)、如為(wei)懸(xuan)浮細(xi)胞(bao)，吸出(chu)培養(yang)液，1000轉(zhuan)/分(fen)鐘(zhong)離心5分(fen)鐘(zhong)，吸出(chu)上清，管(guan)底細胞(bao)用新(xin)鮮(xian)培養(yang)基懸(xuan)浮(fu)細胞(bao)後移(yi)回培(pei)養瓶(ping)。

　　註(zhu)意：換液(ye)時壹半用我(wo)們的培養(yang)基，壹半用妳(ni)們的，以免細(xi)胞(bao)不(bu)適(shi)應(ying)而造成(cheng)生(sheng)長(chang)不(bu)好(hao)。

　　四(si)、細(xi)胞(bao)出現(xian)問(wen)題(ti)，可重發(fa)的情(qing)況有哪些？判(pan)定(ding)標準(zhun)是什(shen)麽(me)？

　　（1）細(xi)胞(bao)運輸(shu)途(tu)中(zhong)遭遇的各種(zhong)問題，細(xi)胞(bao)丟失、破(po)損、漏(lou)液等(deng)，重發(fa)；

　　（2）凍存(cun)的細胞(bao)復(fu)蘇(su)後，絕大多(duo)數細胞(bao)未存(cun)活，重發(fa)；

　　（3）存(cun)活的細胞(bao)靜(jing)置(zhi)24小(xiao)時(shi)後，絕大多(duo)數細胞(bao)未存(cun)活，重發(fa)；

　　（4）凍存(cun)的細胞(bao)復(fu)蘇(su)後或存(cun)活的細胞(bao)靜(jing)置(zhi)4小(xiao)時(shi)後並且(qie)未開(kai)封，出現汙染，重發(fa)；

　　（5）視(shi)具(ju)體情(qing)況而定(ding)。

　　五、細(xi)胞(bao)出現(xian)問(wen)題(ti)，不(bu)予(yu)以重發(fa)的情(qing)況有哪些？

　　（1）客(ke)戶(hu)造成(cheng)細(xi)胞(bao)汙染(ran)，不(bu)重(zhong)發(fa)；

　　（2）客(ke)戶(hu)不(bu)正(zheng)確(que)操(cao)作(zuo)致細(xi)胞(bao)狀態(tai)不(bu)好(hao)，不(bu)重(zhong)發(fa)；

　　（3）細(xi)胞(bao)狀態(tai)不(bu)好(hao)，未提供(gong)細(xi)胞(bao)培養(yang)前(qian)3天(tian)照片(pian)的，不(bu)重(zhong)發(fa)；

　　（4）細(xi)胞(bao)培養(yang)時(shi)經(jing)其(qi)它(ta)處(chu)理的，不(bu)重(zhong)發(fa)；

　　（5）細(xi)胞(bao)收(shou)到2天(tian)內(nei)，未(wei)告知(zhi)，不(bu)重(zhong)發(fa)；

　　（6）視(shi)具(ju)體情(qing)況而定(ding)。

　　六、售(shou)後(hou)服(fu)務(wu)政策(ce)

　　Acris  abcam  cst  Biorbyt  santa  Novus  sigma  lifespan  NEB  roche  ABI  R&D millipore   BD  Qiagen Cayman  Jackson Life  GeneTex   Bio-Rad DSHB  tocris   peprotech 等(deng)品(pin)牌(pai)；部(bu)分(fen)產品(pin)現(xian)貨，超(chao)低(di)比(bi)價，另(ling)常(chang)備(bei)  Trizol  DMSO  lipo2000    lipo3000  SC-2004  SC-2005常(chang)備(bei)現(xian)貨 ；貨期短(duan)，價格優(you)，售(shou)後齊(qi)全(quan)。

　　細(xi)胞(bao)汙染(ran)問(wen)題(ti)，請在收(shou)到產品(pin)48小(xiao)時內，給(gei)我(wo)們提(ti)出真實(shi)的實驗(yan)結果(guo)；細(xi)胞(bao)活性問(wen)題(ti)，請在收(shou)到產品(pin)7天(tian)內給(gei)我(wo)們提(ti)出真實(shi)的實驗(yan)結果(guo)，我(wo)們調查核實後(hou)予(yu)免費(fei)調換，不(bu)收(shou)取任何費(fei)用。

　　需(xu)要(yao)客(ke)戶(hu)提(ti)供(gong)小(xiao)鼠支氣(qi)管成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞(bao)細胞(bao)培養(yang)說(shuo)明(ming)、細(xi)胞(bao)操(cao)作(zuo)處(chu)理方法、細(xi)胞(bao)質量問(wen)題(ti)反(fan)饋(kui)表。

　　如用戶(hu)收(shou)到細(xi)胞(bao)8-30天之(zhi)內(nei)，因(yin)處(chu)理不(bu)當(dang)造成(cheng)細(xi)胞(bao)死亡(wang)或汙(wu)染，我公(gong)司將(jiang)優(you)惠(hui)價重(zhong)新(xin)提供(gong)壹株(zhu)原細胞(bao)

　　小(xiao)鼠(shu)支(zhi)氣(qi)管成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞(bao)質量可(ke)靠(kao)，售後有(you)保障

　　★我(wo)庫(ku)細(xi)胞(bao)近3000種(zhong)，來(lai)源(yuan)於(yu)美國ATCC,細胞(bao)都是經(jing)過嚴格質量控(kong)制。

　　凍存(cun)細(xi)胞(bao)時間為(wei)5-7個(ge)工(gong)作日(ri)，活細胞(bao)為(wei)7-15個(ge)工(gong)作日(ri)。

　　★由(you)於(yu)細(xi)胞(bao)庫(ku)現(xian)有(you)細(xi)胞(bao)類目(mu)多(duo)，為(wei)了(le)不(bu)出(chu)現混(hun)亂(luan)錯(cuo)誤，需要(yao)了解(jie)小鼠支(zhi)氣(qi)管成(cheng)纖(xian)維細(xi)胞(bao)相關細胞(bao)價格及(ji)詳(xiang)細(xi)資(zi)料(liao)請(qing)老(lao)師(shi)，對您造成(cheng)的不(bu)便還(hai)請見諒(liang)！

（編(bian)輯：tanxi）