新生(sheng)兒成(cheng)纖維(wei)細胞_選(xuan)購(gou)指(zhi)南(nan)

　　細胞作為生命組(zu)成(cheng)的zui小(xiao)單元(yuan)，研究其(qi)相(xiang)關的生物(wu)行為(wei)及(ji)其(qi)規(gui)律(lv)與本(ben)質(zhi)，對於(yu)揭示生(sheng)命(ming)的(de)奧秘，探(tan)索(suo)疾(ji)病的(de)機理與治(zhi)療(liao)手(shou)段(duan)，提高人類(lei)的生(sheng)存壽(shou)命與質(zhi)量(liang)，都(dou)有(you)著(zhe)重要(yao)的意(yi)義(yi)。對細(xi)胞的研究是壹個(ge)復(fu)雜的(de)工(gong)程(cheng)，細(xi)胞在人體內(nei)處於(yu)復(fu)雜的(de)微環境之中，包括(kuo)溫度(du)、氧(yang)氣(qi)濃度(du)、生(sheng)物(wu)因子(zi)濃(nong)度(du)、機(ji)械(xie)作(zuo)用、細(xi)胞間相(xiang)互作(zuo)用、細(xi)胞基質(zhi)間相(xiang)互作(zuo)用等(deng)，同時(shi)，細胞體積(ji)微小(xiao)、種(zhong)類(lei)多樣，在細(xi)胞水(shui)平(ping)進行細(xi)胞識別、代謝(xie)物檢(jian)測、內(nei)部組(zu)分分析、細胞結(jie)構(gou)與功(gong)能表征、細胞間相(xiang)互作(zuo)用分(fen)析(xi)等(deng)工(gong)作(zuo)也(ye)都有(you)著(zhe)很(hen)大的難度(du)。新(xin)生(sheng)兒成(cheng)纖維(wei)細胞，上海(hai)乾思生(sheng)物公(gong)司(si)細(xi)胞近3000種(zhong)，來(lai)源(yuan)於美國(guo)ATCC,細(xi)胞都是經(jing)過嚴(yan)格質(zhi)量(liang)控制，在(zai)中國(guo)大(da)陸努(nu)力搭建正牌(pai)細(xi)胞與國(guo)內(nei)廣(guang)大(da)科(ke)研人員(yuan)之(zhi)間(jian)的(de)溝(gou)通(tong)橋(qiao)梁。為(wei)您(nin)提供新生(sheng)兒成(cheng)纖維(wei)細胞外，還(hai)有(you)更多相(xiang)關實(shi)驗(yan)產品(pin)，標準品(pin)，細(xi)胞株和(he)實(shi)驗(yan)技(ji)術服務(wu)等(deng)等(deng)前期(qi)後(hou)續服務(wu)。

　　1. 新(xin)生兒成(cheng)纖維(wei)細胞液(ye)體(ti)培養(yang)基的(de)保存(cun)是冷藏(zang)好？還(hai)是冷凍好？

　　要(yao)冷藏(zang)！！因為(wei)液(ye)體(ti)培養(yang)基經(jing)冷凍後(hou)再(zai)經(jing)溶(rong)化(hua)時(shi)，其(qi)溶(rong)液(ye)的(de)pH值會發(fa)生(sheng)改(gai)變(bian)，溶(rong)液(ye)往(wang)往變(bian)堿，某(mou)些(xie)成(cheng)分溶(rong)解也(ye)會(hui)受到影響(xiang)對(dui)細胞生長不(bu)利(li)。故液(ye)體(ti)培養(yang)基壹定(ding)要(yao)存放(fang)在冷藏(zang)箱中，通(tong)常液(ye)體(ti)培養(yang)基在(zai)冷藏(zang)條(tiao)件下(xia)可存(cun)放6個(ge)月(yue) ~ 壹年(nian)。

　　2.新(xin)生(sheng)兒成(cheng)纖維(wei)細胞 液(ye)體(ti)培養(yang)基中谷(gu)氨酰胺(an)的作(zuo)用，及(ji)使用方(fang)法(fa)。

　　幾乎所有(you)的(de)細(xi)胞對谷(gu)氨酰胺(an)有(you)較(jiao)高的要(yao)求(qiu)，細胞需要(yao)谷(gu)氨酰胺(an)合(he)成(cheng)蛋白(bai)質(zhi)，在缺少(shao)谷(gu)氨酰胺(an)時(shi)，細胞生長不(bu)良而死(si)亡。所以(yi)，各種(zhong)培養(yang)液(ye)中都(dou)含有(you)較(jiao)大量(liang)的(de)谷(gu)氨酰胺(an)。谷(gu)氨酰胺(an)在溶(rong)液(ye)中很(hen)不(bu)穩(wen)定，應置(zhi)-20 ?C冰(bing)凍保存(cun)，用前加入培(pei)養基(ji)中。加有(you)谷(gu)氨酰胺(an)的液(ye)體(ti)培養(yang)基4 ?C 冰(bing)箱儲(chu)存(cun)兩周(zhou)以上(shang)時(shi)，應重新(xin)加入原(yuan)來(lai)量(liang)的(de)谷(gu)氨酰胺(an)。基礎醫學(xue)細胞中心(xin)在(zai)其(qi)服務(wu)項(xiang)目(mu)中配(pei)制(zhi)分裝(zhuang)了(le)高濃度(du)（100倍）的(de)谷(gu)氨酰胺(an)溶(rong)液(ye)（1ml/支(zhi)）。每支(zhi)1ml的谷(gu)氨酰胺(an)加到99ml*培養(yang)基(ji)中，其(qi)終濃(nong)度(du)為(wei)2mM/ml培(pei)養(yang)基(ji)。包裝(zhuang)為(wei)粉紅色(se)，-24?C保存(cun)。

　　3. 新(xin)生兒成(cheng)纖維(wei)細胞 培養用液(ye)pH對(dui)細胞生長的影響

　　由(you)於(yu)，大(da)多數(shu)細胞適宜pH為(wei)7.2~7.4，偏(pian)離(li)此(ci)範(fan)圍對細(xi)胞將產生有(you)害(hai)的(de)影(ying)響(xiang)。各種(zhong)細胞對pH的要求也(ye)不(bu)*相(xiang)同，原代(dai)培(pei)養細胞壹般(ban)對(dui)pH變(bian)動(dong)耐受差(cha)，無限細(xi)胞系耐受力強。

　　但(dan)總(zong)體來(lai)說(shuo)，細胞耐酸(suan)性比(bi)耐堿性強壹些(xie)，偏(pian)酸(suan)環境(jing)中更利(li)於細(xi)胞生長。因此(ci)，我(wo)們在配(pei)制(zhi)培養用液(ye)時(shi)，可把(ba)液(ye)體(ti)的pH稍(shao)微調得偏(pian)酸(suan)壹些(xie)。液(ye)體(ti)在經(jing)過0.10um或0.22um濾膜(mo)過濾時(shi)，溶(rong)液(ye)的(de)pH還(hai)會(hui)向上浮(fu)動(dong)0.2左右。

　　4.新(xin)生兒成(cheng)纖維(wei)細胞 細胞傳代消化時(shi)所用胰(yi)酶(mei)濃度(du)越高越好嗎？

　　不(bu)見(jian)得！因為(wei)胰(yi)蛋(dan)白(bai)酶(mei)溶(rong)液(ye)的(de)消化能力是和(he)溶(rong)液(ye)的(de)pH、溫度(du)、胰(yi)酶(mei)濃度(du)及(ji)溶(rong)液(ye)中是否含有(you)Ca++, Mg++離(li)子(zi)和(he)血(xue)清等(deng)因素(su)有(you)關。通(tong)常情況下(xia)，pH 8.0 , 溫度(du) 37 oC 其(qi)作(zuo)用能力zui強。另(ling)外，鈣(gai)、鎂離(li)子(zi)及(ji)血清均(jun)能大大降低(di)其(qi)消化能力。我們每次(ci)進行傳(chuan)代(dai)消化前，壹定(ding)要(yao)用D-Hanks液(ye)或PBS液(ye)反(fan)復(fu)沖(chong)洗細(xi)胞培養瓶，以(yi)便(bian)於將(jiang)含(han)血(xue)清的培(pei)養基(ji)沖(chong)洗幹凈(jing)，這(zhe)樣就能大大提高消化液(ye)的(de)消化能力。本中心(xin)通(tong)常使用的(de)消化液(ye)濃(nong)度(du)為(wei)：

　　（1）０.０５％胰(yi)蛋(dan)白(bai)酶(mei)＋０.０２％ＥＤＴＡ；

　　（2）０.２５％胰(yi)蛋(dan)白(bai)酶(mei)＋０.０３％ＥＤＴＡ。

　　（3）0.25% 胰(yi)蛋(dan)白(bai)酶(mei)

　　溶(rong)液(ye)ｐＨ８.０～９.０；使用Ｄ－Ｈａｎｋ液(ye)配(pei)制(zhi)。

　　多數(shu)細胞傳代消化可使用０.０５％胰(yi)蛋(dan)白(bai)酶(mei)＋０.０２％ＥＤＴＡ這(zhe)種(zhong)消化液(ye)。

　　購(gou)買上(shang)海(hai)乾思生(sheng)物細(xi)胞註(zhu)意(yi)事(shi)項（乾思生(sheng)物）發(fa)布(bu)

　　壹、客(ke)戶(hu)收到細胞先(xian)不(bu)開(kai)蓋，放(fang)在培養箱靜置(zhi)若(ruo)幹小(xiao)時(shi)後(hou)（看(kan)細(xi)胞密度(du)而(er)定(ding)）在(zai)倒(dao)置(zhi)顯(xian)微鏡下觀(guan)察細(xi)胞生長情況，並(bing)對(dui)細胞進行不(bu)同倍數(shu)拍照(zhao)（建議(yi)受收細(xi)胞時(shi)的培(pei)養基拍(pai)壹張(zhang)照(zhao)片(pian)，觀(guan)察培(pei)養(yang)基的顏色(se)和(he)是否有(you)漏(lou)液(ye)情況，顯(xian)微鏡下拍(pai)細(xi)胞100X，200X各壹張(zhang)），排(pai)除細胞本身汙(wu)染的情況；

　　收到細胞未(wei)開(kai)封，出(chu)現汙(wu)染狀(zhuang)況我們負(fu)責(ze)免費發(fa)送(song)壹株(zhu)細(xi)胞。

　　二、如為(wei)貼壁(bi)細(xi)胞，請(qing)在顯(xian)微鏡下觀(guan)察細(xi)胞密度(du)：

　　1. 未(wei)超(chao)過80%匯合(he)度(du)時(shi)，用75%酒(jiu)精（建議(yi)配(pei)置(zhi)75%酒精的水(shui)也是滅菌超(chao)純水(shui)，噴灑(sa)整(zheng)個(ge)瓶消毒後(hou)放到超(chao)菌臺(tai)內(nei)，嚴(yan)格(ge)無菌操作(zuo)；然後(hou)打開(kai)蓋子(zi)，先(xian)把培(pei)養(yang)基(ji)吸(xi)出(chu)10ml左右，放在(zai)離(li)心(xin)管(guan)裏，然後(hou)瓶口(kou)過(guo)火（嚴禁直接傾倒(dao)），這(zhe)樣可以(yi)保證(zheng)不(bu)汙(wu)染，再(zai)用10ml的(de)移(yi)液(ye)管(guan)，將剩(sheng)余(yu)的(de)培(pei)液(ye)全(quan)部吸(xi)出(chu)，放於(yu)離(li)心(xin)管(guan)中，培(pei)養瓶中只(zhi)剩(sheng)余(yu)10ml左(zuo)右培液(ye)就(jiu)可以(yi)了。培養16hr(時(shi)間根據(ju)細(xi)胞生長情況調(tiao)整(zheng)）之後(hou)，傳代或者凍存。

　　2. 超(chao)過80%匯合(he)度(du)時(shi)，請(qing)按(an)細(xi)胞培養條(tiao)件傳(chuan)代(dai)培(pei)養。具體(ti)步(bu)驟如下：

　　1) 棄(qi)去培養液(ye)，用3ml PBS（不(bu)含(han)鈣(gai)，鎂離(li)子(zi)）洗(xi)1-2次(ci)；

　　2) 加1ml消化液(ye)（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu)T25培養(yang)瓶中，倒(dao)轉放(fang)於37度(du)培(pei)養(yang)箱(xiang)1-3分(fen)鐘預(yu)熱(re)，然後(hou)又將培(pei)養(yang)瓶倒(dao)轉(zhuan)大約(yue)30秒後(hou)，在倒置(zhi)顯(xian)微鏡下觀(guan)察細(xi)胞消化情況，若(ruo)細胞大部分(fen)變(bian)圓分(fen)散，輕敲(qiao)幾下培(pei)養(yang)培養(yang)瓶，細(xi)胞隨(sui)即脫(tuo)落(luo)下來(lai)；

　　3) 加入6-8ml*培(pei)養基(ji)，吸(xi)出(chu)，分到新的(de)培(pei)養瓶中，按(an)要(yao)求(qiu)分瓶。

　　三、如為懸浮細(xi)胞，吸(xi)出(chu)培養(yang)液(ye)，1000轉(zhuan)/分鐘離(li)心(xin)5分(fen)鐘，吸(xi)出(chu)上清(qing)，管(guan)底(di)細胞用新(xin)鮮培(pei)養(yang)基懸(xuan)浮細胞後(hou)移(yi)回培(pei)養(yang)瓶。

　　註(zhu)意(yi)：換液(ye)時(shi)壹半用我(wo)們的培養(yang)基(ji)，壹半用妳(ni)們的，以免細胞不(bu)適應(ying)而造成(cheng)生長不(bu)好。

　　四(si)、細胞出(chu)現問題(ti)，可重發(fa)的(de)情況有(you)哪(na)些(xie)？判(pan)定(ding)標準是什麽？

　　（1）細(xi)胞運輸途中遭(zao)遇(yu)的各種(zhong)問題(ti)，細(xi)胞丟(diu)失(shi)、破損(sun)、漏(lou)液(ye)等(deng)，重發(fa)；

　　（2）凍存的(de)細胞復蘇後(hou)，絕大(da)多數(shu)細胞未(wei)存(cun)活(huo)，重發(fa)；

　　（3）存活(huo)的(de)細(xi)胞靜置(zhi)24小(xiao)時(shi)後(hou)，絕大(da)多數(shu)細胞未(wei)存(cun)活(huo)，重發(fa)；

　　（4）凍存的(de)細胞復蘇後(hou)或存活(huo)的(de)細(xi)胞靜置(zhi)4小(xiao)時(shi)後(hou)並且未(wei)開(kai)封，出(chu)現汙(wu)染，重發(fa)；

　　（5）視具體(ti)情況而(er)定(ding)。

　　五(wu)、細胞出(chu)現問題(ti)，不(bu)予(yu)以重發(fa)的(de)情況有(you)哪(na)些(xie)？

　　（1）客戶(hu)造成(cheng)細胞汙(wu)染，不(bu)重發(fa)；

　　（2）客戶(hu)不(bu)正確(que)操作(zuo)致細胞狀(zhuang)態不(bu)好，不(bu)重發(fa)；

　　（3）細胞狀(zhuang)態不(bu)好，未(wei)提供細胞培養前3天(tian)照(zhao)片(pian)的，不(bu)重發(fa)；

　　（4）細胞培養時(shi)經(jing)其(qi)它(ta)處理的(de)，不(bu)重發(fa)；

　　（5）細胞收到2天(tian)內(nei)，未(wei)告(gao)知(zhi)，不(bu)重發(fa)；

　　（6）視具體(ti)情況而(er)定(ding)。

　　六(liu)、售(shou)後(hou)服務(wu)政(zheng)策(ce)

　　Acris  abcam  cst  Biorbyt  santa  Novus  sigma  lifespan  NEB  roche  ABI  R&D millipore   BD  Qiagen Cayman  Jackson Life  GeneTex   Bio-Rad DSHB  tocris   peprotech 等(deng)品(pin)牌(pai)；部分(fen)產(chan)品(pin)現(xian)貨，超(chao)低(di)比價(jia)，另(ling)常備  Trizol  DMSO  lipo2000    lipo3000  SC-2004  SC-2005常備現(xian)貨(huo) ；貨(huo)期(qi)短(duan)，價格優(you)，售(shou)後(hou)齊全。

　　細(xi)胞汙(wu)染問題(ti)，請(qing)在收到產品(pin)48小(xiao)時(shi)內(nei)，給(gei)我(wo)們提出(chu)真(zhen)實(shi)的(de)實(shi)驗(yan)結(jie)果；細胞活(huo)性問題(ti)，請(qing)在收到產品(pin)7天(tian)內(nei)給(gei)我(wo)們提出(chu)真(zhen)實(shi)的(de)實(shi)驗(yan)結(jie)果，我們調查核(he)實(shi)後(hou)予免費調換，不(bu)收取(qu)任(ren)何費用。

　　需要(yao)客(ke)戶(hu)提供新生(sheng)兒成(cheng)纖維(wei)細胞細胞培養說明(ming)、細胞操作(zuo)處理方(fang)法(fa)、細胞質(zhi)量(liang)問題(ti)反(fan)饋(kui)表。

　　如(ru)用戶(hu)收到細胞8-30天(tian)之內(nei)，因處理不(bu)當(dang)造成(cheng)細胞死亡或汙(wu)染，我公(gong)司(si)將(jiang)優(you)惠價(jia)重新(xin)提供壹株(zhu)原(yuan)細胞

　　新生兒成(cheng)纖維(wei)細胞質(zhi)量(liang)可靠(kao)，售(shou)後(hou)有(you)保障(zhang)

　　★我(wo)庫細胞近3000種(zhong)，來(lai)源(yuan)於美國(guo)ATCC,細(xi)胞都是經(jing)過嚴(yan)格質(zhi)量(liang)控制。

　　凍存細(xi)胞時(shi)間為(wei)5-7個(ge)工(gong)作日(ri)，活(huo)細(xi)胞為7-15個(ge)工(gong)作日(ri)。

　　★由(you)於(yu)細(xi)胞庫現有(you)細(xi)胞類(lei)目(mu)多，為(wei)了不(bu)出(chu)現混(hun)亂(luan)錯(cuo)誤，需要(yao)了(le)解新(xin)生(sheng)兒成(cheng)纖維(wei)細胞相(xiang)關細胞價格及詳細(xi)資(zi)料請(qing)老師，對(dui)您(nin)造成(cheng)的不(bu)便(bian)還(hai)請(qing)見(jian)諒！

（編(bian)輯(ji)：tanxi）