Walker256細胞(bao)_選購(gou)指南(nan)

　　細(xi)胞(bao)作(zuo)為生命(ming)組(zu)成(cheng)的zui小單元(yuan)，研(yan)究(jiu)其(qi)相(xiang)關(guan)的生(sheng)物(wu)行為及(ji)其(qi)規律(lv)與(yu)本(ben)質，對(dui)於揭(jie)示生命的奧(ao)秘，探索疾(ji)病(bing)的機理(li)與(yu)治(zhi)療(liao)手(shou)段(duan)，提(ti)高(gao)人(ren)類的生(sheng)存壽(shou)命與(yu)質量，都有(you)著(zhe)重(zhong)要(yao)的意(yi)義。對細(xi)胞的研(yan)究(jiu)是壹(yi)個(ge)復(fu)雜(za)的工(gong)程，細胞(bao)在人(ren)體(ti)內處於復(fu)雜(za)的微(wei)環境之中(zhong)，包括(kuo)溫(wen)度(du)、氧氣(qi)濃度(du)、生物(wu)因(yin)子(zi)濃(nong)度(du)、機械(xie)作用、細胞間相(xiang)互(hu)作(zuo)用、細胞基質間(jian)相互(hu)作用等，同(tong)時(shi)，細(xi)胞體(ti)積(ji)微(wei)小、種類多樣(yang)，在細胞(bao)水平(ping)進行(xing)細胞(bao)識(shi)別(bie)、代謝(xie)物(wu)檢測(ce)、內部組(zu)分(fen)分析(xi)、細(xi)胞(bao)結構(gou)與(yu)功能(neng)表征(zheng)、細(xi)胞(bao)間(jian)相互作用分析(xi)等(deng)工(gong)作也(ye)都有(you)著(zhe)很大的難(nan)度(du)。Walker256細胞(bao)，上海(hai)乾思生物(wu)公(gong)司細(xi)胞近3000種(zhong)，來(lai)源於美(mei)國ATCC,細胞都是經過嚴(yan)格質量控制(zhi)，在中(zhong)國大陸(lu)努力搭建正(zheng)牌(pai)細(xi)胞(bao)與(yu)國內廣大科研人(ren)員(yuan)之間(jian)的溝(gou)通橋(qiao)梁(liang)。為您提供(gong)Walker256細(xi)胞外(wai)，還有(you)更(geng)多相(xiang)關實驗產(chan)品，標(biao)準(zhun)品，細(xi)胞株(zhu)和(he)實驗技術服務等(deng)等前期後(hou)續(xu)服務。

　　1. Walker256細(xi)胞(bao)液體(ti)培(pei)養基的保(bao)存是冷(leng)藏(zang)好(hao)？還是冷(leng)凍好(hao)？

　　要(yao)冷(leng)藏(zang)！！因(yin)為液體(ti)培(pei)養基經冷(leng)凍後(hou)再經(jing)溶化時(shi)，其(qi)溶液的pH值會發生改變(bian)，溶(rong)液往(wang)往(wang)變(bian)堿(jian)，某(mou)些成(cheng)分(fen)溶解(jie)也會受到影響對細胞生(sheng)長不利(li)。故液體(ti)培(pei)養基壹(yi)定(ding)要(yao)存放在冷(leng)藏(zang)箱中(zhong)，通常(chang)液體(ti)培(pei)養基在冷(leng)藏(zang)條(tiao)件(jian)下可(ke)存(cun)放(fang)6個月(yue) ~ 壹(yi)年(nian)。

　　2.Walker256細(xi)胞(bao) 液體(ti)培(pei)養基中(zhong)谷氨酰胺(an)的作(zuo)用，及(ji)使用方法。

　　幾(ji)乎所(suo)有(you)的細(xi)胞對谷氨酰胺(an)有較(jiao)高(gao)的要(yao)求(qiu)，細胞(bao)需要(yao)谷氨酰胺(an)合(he)成蛋(dan)白質，在缺(que)少(shao)谷氨酰胺(an)時(shi)，細(xi)胞生長不(bu)良(liang)而死(si)亡(wang)。所(suo)以(yi)，各(ge)種培養液中(zhong)都含(han)有較(jiao)大量的谷(gu)氨酰胺(an)。谷氨(an)酰胺(an)在溶液中(zhong)很不穩(wen)定(ding)，應(ying)置(zhi)-20 ?C冰(bing)凍保(bao)存，用前加入(ru)培(pei)養基中(zhong)。加有谷(gu)氨(an)酰胺(an)的液體(ti)培(pei)養基4 ?C 冰箱儲(chu)存兩周以(yi)上時(shi)，應(ying)重(zhong)新加(jia)入(ru)原(yuan)來(lai)量的谷(gu)氨酰胺(an)。基礎醫(yi)學(xue)細胞(bao)中(zhong)心(xin)在其服務項(xiang)目中(zhong)配(pei)制分(fen)裝(zhuang)了高(gao)濃(nong)度(du)（100倍(bei)）的谷(gu)氨酰胺(an)溶液（1ml/支）。每(mei)支1ml的谷(gu)氨酰胺(an)加到99ml*培養基中(zhong)，其終濃(nong)度(du)為2mM/ml培養基。包裝(zhuang)為粉紅(hong)色(se)，-24?C保(bao)存(cun)。

　　3. Walker256細(xi)胞(bao) 培(pei)養用液pH對細胞(bao)生長(chang)的影響

　　由於，大多數(shu)細胞適(shi)宜pH為7.2~7.4，偏離此範(fan)圍(wei)對細胞將產(chan)生(sheng)有害的影響。各種細胞(bao)對pH的要(yao)求(qiu)也不(bu)*相同(tong)，原代培(pei)養細(xi)胞壹(yi)般(ban)對(dui)pH變(bian)動(dong)耐(nai)受差(cha)，無(wu)限細胞系(xi)耐(nai)受力強。

　　但(dan)總(zong)體(ti)來(lai)說，細(xi)胞(bao)耐(nai)酸性(xing)比耐(nai)堿性(xing)強壹(yi)些，偏(pian)酸(suan)環境中(zhong)更利(li)於細(xi)胞生長。因(yin)此，我(wo)們(men)在配(pei)制培(pei)養用液時(shi)，可(ke)把液體(ti)的pH稍微(wei)調(tiao)得(de)偏酸壹(yi)些。液體(ti)在經過(guo)0.10um或(huo)0.22um濾(lv)膜過濾(lv)時(shi)，溶(rong)液的pH還會向(xiang)上浮(fu)動(dong)0.2左右。

　　4.Walker256細(xi)胞(bao) 細(xi)胞傳(chuan)代消(xiao)化(hua)時(shi)所(suo)用胰酶(mei)濃(nong)度(du)越高(gao)越(yue)好(hao)嗎(ma)？

　　不(bu)見(jian)得(de)！因(yin)為胰蛋(dan)白酶(mei)溶(rong)液的消(xiao)化(hua)能(neng)力(li)是和(he)溶(rong)液的pH、溫(wen)度(du)、胰酶(mei)濃(nong)度(du)及(ji)溶(rong)液中(zhong)是否含(han)有Ca++, Mg++離子(zi)和(he)血(xue)清等因(yin)素有(you)關。通常(chang)情(qing)況下，pH 8.0 , 溫(wen)度(du) 37 oC 其作(zuo)用能力zui強。另外(wai)，鈣(gai)、鎂離子(zi)及(ji)血(xue)清均能大大降低其消(xiao)化(hua)能(neng)力(li)。我們(men)每(mei)次進行(xing)傳(chuan)代消(xiao)化(hua)前，壹(yi)定(ding)要(yao)用D-Hanks液或(huo)PBS液反復(fu)沖(chong)洗(xi)細(xi)胞(bao)培養瓶(ping)，以(yi)便(bian)於將含(han)血清的培(pei)養基沖洗(xi)幹凈(jing)，這(zhe)樣(yang)就(jiu)能(neng)大大提高(gao)消(xiao)化(hua)液的消(xiao)化(hua)能(neng)力(li)。本(ben)中(zhong)心(xin)通常(chang)使用的消(xiao)化(hua)液濃度(du)為：

　　（1）０.０５％胰(yi)蛋(dan)白酶(mei)＋０.０２％ＥＤＴＡ；

　　（2）０.２５％胰(yi)蛋(dan)白酶(mei)＋０.０３％ＥＤＴＡ。

　　（3）0.25% 胰(yi)蛋(dan)白酶(mei)

　　溶(rong)液ｐＨ８.０～９.０；使用Ｄ－Ｈａｎｋ液配(pei)制。

　　多數(shu)細胞傳(chuan)代消(xiao)化(hua)可(ke)使用０.０５％胰蛋(dan)白酶(mei)＋０.０２％ＥＤＴＡ這(zhe)種(zhong)消(xiao)化(hua)液。

　　購(gou)買上海(hai)乾思生物(wu)細胞(bao)註意(yi)事項（乾思生物(wu)）發布(bu)

　　壹(yi)、客(ke)戶(hu)收(shou)到細胞先(xian)不開(kai)蓋(gai)，放(fang)在培養箱靜置若(ruo)幹(gan)小時(shi)後(hou)（看細(xi)胞(bao)密度(du)而定(ding)）在倒置(zhi)顯微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)細胞(bao)生長情(qing)況，並對細(xi)胞進行(xing)不同(tong)倍(bei)數(shu)拍照(zhao)（建(jian)議受收(shou)細(xi)胞時(shi)的培(pei)養基拍壹(yi)張(zhang)照(zhao)片(pian)，觀(guan)察(cha)培養基的顏色和(he)是否有漏液情(qing)況，顯微(wei)鏡下拍細(xi)胞(bao)100X，200X各壹(yi)張(zhang)），排(pai)除(chu)細胞(bao)本(ben)身汙染的情(qing)況；

　　收(shou)到細胞未(wei)開封(feng)，出現汙染狀況我(wo)們(men)負責免(mian)費(fei)發送壹(yi)株(zhu)細(xi)胞(bao)。

　　二(er)、如為貼壁(bi)細(xi)胞，請(qing)在顯微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)細胞(bao)密度(du)：

　　1. 未(wei)超過(guo)80%匯(hui)合(he)度(du)時(shi)，用75%酒精（建(jian)議配(pei)置75%酒(jiu)精的水也(ye)是滅菌超純(chun)水，噴(pen)灑整(zheng)個(ge)瓶(ping)消(xiao)毒後(hou)放到超菌(jun)臺(tai)內，嚴(yan)格無(wu)菌操(cao)作(zuo)；然(ran)後(hou)打開(kai)蓋子(zi)，先(xian)把培(pei)養基吸(xi)出10ml左右，放(fang)在離心(xin)管裏(li)，然(ran)後(hou)瓶(ping)口過火（嚴(yan)禁(jin)直(zhi)接傾(qing)倒(dao)），這(zhe)樣(yang)可(ke)以(yi)保(bao)證(zheng)不汙染，再用10ml的移(yi)液管，將剩余的培(pei)液全(quan)部(bu)吸(xi)出，放(fang)於離心(xin)管中(zhong)，培養瓶(ping)中(zhong)只剩余10ml左右培(pei)液就(jiu)可(ke)以(yi)了(le)。培養16hr(時(shi)間(jian)根(gen)據(ju)細胞(bao)生(sheng)長情(qing)況調(tiao)整(zheng)）之後(hou)，傳(chuan)代或(huo)者(zhe)凍存(cun)。

　　2. 超過(guo)80%匯(hui)合(he)度(du)時(shi)，請(qing)按細(xi)胞(bao)培養條(tiao)件(jian)傳(chuan)代培(pei)養。具(ju)體(ti)步(bu)驟如下：

　　1) 棄(qi)去(qu)培(pei)養液，用3ml PBS（不含(han)鈣，鎂離子(zi)）洗(xi)1-2次；

　　2) 加(jia)1ml消(xiao)化(hua)液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於T25培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，倒轉放於37度(du)培養箱1-3分鐘預熱(re)，然(ran)後(hou)又將培養瓶(ping)倒轉大約30秒(miao)後(hou)，在倒置(zhi)顯微(wei)鏡下觀(guan)察(cha)細胞(bao)消(xiao)化(hua)情(qing)況，若細胞(bao)大部分變(bian)圓(yuan)分散，輕(qing)敲(qiao)幾(ji)下培(pei)養培(pei)養瓶(ping)，細胞(bao)隨即脫(tuo)落下來(lai)；

　　3) 加(jia)入(ru)6-8ml*培(pei)養基，吸(xi)出，分(fen)到新的培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，按要(yao)求(qiu)分瓶(ping)。

　　三(san)、如為懸浮(fu)細(xi)胞(bao)，吸(xi)出培(pei)養液，1000轉/分鐘離心(xin)5分鐘，吸(xi)出上清，管底(di)細胞(bao)用新鮮培養基懸浮(fu)細胞(bao)後(hou)移回培(pei)養瓶(ping)。

　　註(zhu)意(yi)：換(huan)液時(shi)壹(yi)半用我們(men)的培(pei)養基，壹(yi)半用妳們(men)的，以(yi)免(mian)細(xi)胞(bao)不(bu)適(shi)應(ying)而造(zao)成(cheng)生(sheng)長(chang)不(bu)好。

　　四(si)、細胞(bao)出現問題(ti)，可(ke)重(zhong)發的情(qing)況有哪(na)些？判(pan)定(ding)標(biao)準(zhun)是什麽？

　　（1）細(xi)胞(bao)運(yun)輸途(tu)中(zhong)遭遇(yu)的各(ge)種問題(ti)，細(xi)胞丟失(shi)、破損、漏液等，重(zhong)發；

　　（2）凍存(cun)的細(xi)胞復(fu)蘇後(hou)，絕大多數(shu)細胞未(wei)存活(huo)，重(zhong)發；

　　（3）存(cun)活(huo)的細(xi)胞靜置24小時(shi)後(hou)，絕大多數(shu)細胞未(wei)存活(huo)，重(zhong)發；

　　（4）凍存(cun)的細(xi)胞復(fu)蘇後(hou)或(huo)存活(huo)的細(xi)胞靜置4小時(shi)後(hou)並且未(wei)開封(feng)，出現汙染，重(zhong)發；

　　（5）視(shi)具(ju)體(ti)情(qing)況而定(ding)。

　　五(wu)、細(xi)胞(bao)出現問題(ti)，不(bu)予以(yi)重(zhong)發的情(qing)況有哪(na)些？

　　（1）客(ke)戶(hu)造(zao)成(cheng)細(xi)胞(bao)汙染，不重(zhong)發；

　　（2）客(ke)戶(hu)不(bu)正(zheng)確(que)操(cao)作(zuo)致細胞(bao)狀態(tai)不(bu)好(hao)，不(bu)重(zhong)發；

　　（3）細(xi)胞(bao)狀態(tai)不(bu)好(hao)，未(wei)提供(gong)細(xi)胞培(pei)養前3天(tian)照(zhao)片(pian)的，不(bu)重(zhong)發；

　　（4）細(xi)胞(bao)培(pei)養時(shi)經(jing)其它處理的，不(bu)重(zhong)發；

　　（5）細(xi)胞(bao)收(shou)到2天(tian)內，未(wei)告知(zhi)，不(bu)重(zhong)發；

　　（6）視(shi)具(ju)體(ti)情(qing)況而定(ding)。

　　六(liu)、售(shou)後(hou)服務政(zheng)策

　　Acris  abcam  cst  Biorbyt  santa  Novus  sigma  lifespan  NEB  roche  ABI  R&D millipore   BD  Qiagen Cayman  Jackson Life  GeneTex   Bio-Rad DSHB  tocris   peprotech 等(deng)品牌(pai)；部(bu)分(fen)產(chan)品現(xian)貨，超低比價，另常(chang)備(bei)  Trizol  DMSO  lipo2000    lipo3000  SC-2004  SC-2005常(chang)備(bei)現(xian)貨(huo) ；貨(huo)期短，價格(ge)優(you)，售(shou)後(hou)齊(qi)全(quan)。

　　細(xi)胞(bao)汙染問題(ti)，請(qing)在收(shou)到產(chan)品48小時(shi)內，給我們(men)提(ti)出(chu)真實的實驗結果(guo)；細胞(bao)活(huo)性問(wen)題(ti)，請(qing)在收(shou)到產(chan)品7天(tian)內給我們(men)提(ti)出(chu)真實的實驗結果(guo)，我們(men)調(tiao)查(zha)核實後(hou)予免(mian)費(fei)調(tiao)換(huan)，不(bu)收(shou)取任(ren)何費(fei)用。

　　需(xu)要(yao)客戶提(ti)供(gong)Walker256細(xi)胞細(xi)胞(bao)培(pei)養說(shuo)明、細(xi)胞操(cao)作(zuo)處(chu)理(li)方法、細(xi)胞質量問題(ti)反(fan)饋表。

　　如用戶收(shou)到細胞8-30天(tian)之內，因(yin)處理(li)不當(dang)造(zao)成(cheng)細(xi)胞(bao)死(si)亡(wang)或(huo)汙染，我公(gong)司將優(you)惠(hui)價重(zhong)新提(ti)供(gong)壹(yi)株(zhu)原(yuan)細(xi)胞(bao)

　　Walker256細(xi)胞(bao)質量可靠(kao)，售(shou)後(hou)有保(bao)障

　　★我(wo)庫(ku)細(xi)胞近3000種(zhong)，來(lai)源於美(mei)國ATCC,細胞都是經過嚴(yan)格質量控制(zhi)。

　　凍存(cun)細胞(bao)時(shi)間(jian)為5-7個工(gong)作日(ri)，活(huo)細胞(bao)為7-15個工(gong)作日(ri)。

　　★由於細(xi)胞庫(ku)現(xian)有細胞類目多，為了不(bu)出(chu)現(xian)混(hun)亂錯(cuo)誤，需要(yao)了解Walker256細(xi)胞(bao)相關(guan)細(xi)胞(bao)價格(ge)及(ji)詳(xiang)細資料請(qing)老(lao)師，對(dui)您造(zao)成(cheng)的不(bu)便還請(qing)見(jian)諒(liang)！

（編(bian)輯(ji)：tanxi）