上海(hai)乾(qian)思(si)生(sheng)物(wu)BioThema品牌代(dai)理專業經營進口胎牛(niu)血(xue)清(qing)、細(xi)胞(bao)因子(zi)、ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)、細(xi)胞(bao)、抗體(ti)、生物(wu)試(shi)劑、耗(hao)材(cai)、培(pei)養基(ji)、壹(yi)抗、二抗、其(qi)產(chan)品吸附(fu)均(jun)勻，吸(xi)附(fu)性好，空白值(zhi)低，孔(kong)底(di)透明(ming)度高(gao)，代(dai)做ELISA實(shi)驗(yan)等(deng)。完(wan)善(shan)的庫(ku)存(cun)及(ji)供應(ying)體(ti)系(xi)以及(ji)高效(xiao)穩定(ding)的純(chun)化(hua)技(ji)術，保證(zheng)產品均(jun)能(neng)現(xian)貨(huo)供(gong)應和(he)產(chan)品質量(liang)的穩定(ding)性。

BioThema

上海(hai)乾(qian)思(si)生(sheng)物(wu)BioThema品牌代(dai)理專業經營進口胎牛(niu)血(xue)清(qing)、細(xi)胞(bao)因子(zi)、ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)、細(xi)胞(bao)、抗體(ti)、生物(wu)試(shi)劑、耗(hao)材(cai)、培(pei)養基(ji)、壹(yi)抗、二抗、其(qi)產(chan)品吸附(fu)均(jun)勻，吸(xi)附(fu)性好，空白值(zhi)低，孔(kong)底(di)透明(ming)度高(gao)，代(dai)做ELISA實(shi)驗(yan)等(deng)。完(wan)善(shan)的庫(ku)存(cun)及(ji)供應(ying)體(ti)系(xi)以及(ji)高效(xiao)穩定(ding)的純(chun)化(hua)技(ji)術，保證(zheng)產品均(jun)能(neng)現(xian)貨(huo)供(gong)應和(he)產(chan)品質量(liang)的穩定(ding)性。

怎(zen)樣查(zha)到(dao)壹(yi)個(ge)特(te)定(ding)細(xi)胞(bao)株(zhu)的相(xiang)關知識和(he)培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)？
ATCC（American Type Culture Collection）收集(ji)了絕大多數細(xi)胞(bao)的詳(xiang)細(xi)資(zi)料(liao)。打開ATCC網(wang)頁(ye)的Cells and hybridomas鏈(lian)接(jie)，輸(shu)入(ru)細(xi)胞(bao)名(ming)稱就可以搜(sou)索(suo)ATCC的細(xi)胞(bao)數(shu)據庫(ku)。數(shu)據庫(ku)中有每壹(yi)種細(xi)胞(bao)的詳(xiang)細(xi)描述，包括細(xi)胞(bao)的來源，培養(yang)和(he)凍(dong)存(cun)條(tiao)件(jian)，以及(ji)相關文(wen)獻等資(zi)料(liao)。
如何(he)選用(yong)特(te)殊細(xi)胞(bao)系(xi)培養(yang)基(ji)？
培(pei)養某類型(xing)細(xi)胞(bao)沒(mei)有固定(ding)的培(pei)養(yang)條(tiao)件(jian)。MEM中培養的細(xi)胞(bao)，很可能(neng)在(zai)DMEM或(huo)M199中同樣容易(yi)生(sheng)長(chang)。總之(zhi)，*MEM、DMEM做貼(tie)壁細(xi)胞(bao)培(pei)養；RPMI1640做懸浮(fu)細(xi)胞(bao)培(pei)養；各種(zhong)目的無(wu)血(xue)清(qing)培(pei)養(yang)*AIMV培(pei)養(yang)基（SFM）。

測序(xu)實(shi)驗(yan)流(liu)程(cheng)：
1 收(shou)集(ji)樣品
2 相關試劑(ji) 總RNA提(ti)取試(shi)劑(ji)TREzol Reagent (RNA提(ti)取試(shi)劑(ji)), M-MLV(cDNA逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)酶(mei)), RNA 純(chun)化試劑, RealqPCR MasterMix (熒光(guang)定(ding)量(liang)PCR預(yu)混試劑(ji))。
3 實(shi)驗(yan)儀器 熒光(guang)定(ding)量(liang)PCR儀; PCR儀;低溫(wen)離(li)心(xin)機(ji)。
4 總(zong)RNA提(ti)取
5 cDNA合(he)成 在(zai)0.5ml的離(li)心(xin)管(guan)中加入(ru)1µl模(mo)板總(zong)RNA(1µg/µl); 2µl隨(sui)機引(yin)物(wu)(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水至15µl體(ti)系(xi)。混勻(yun)後(hou)70℃變性RNA 5分(fen)鐘，冰(bing)上速(su)冷(leng)1分(fen)鐘，離(li)心(xin)將(jiang)溶液收(shou)集(ji)至(zhi)管(guan)底(di)加入(ru)6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水至30µl體(ti)系(xi)。PCR儀中反應條(tiao)件(jian)設置(zhi) 37℃延(yan)伸(shen)60min，70℃保溫15min終止(zhi)反應。合(he)成好的cDNA置(zhi)於(yu) -20 ℃保存(cun)備用(yong)。
6 引(yin)物(wu)設(she)計與thermal cycler protocol thermal cycler protocol合(he)成
7 實(shi)時(shi)定(ding)量(liang)PCR 按以下(xia)反應體(ti)系(xi)進行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上遊引(yin)物(wu)F 1 ul，下(xia)遊引(yin)物(wu)R 1 ul;cDNA template 2ul。定(ding)量(liang)PCR儀擴增反應條(tiao)件(jian)設置(zhi):50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個(ge)循環)。
8 PCR產(chan)物(wu)溶解曲線(xian)分(fen)析(xi) 將(jiang)所(suo)擴增的PCR 產(chan)物(wu)進行溶解曲線(xian)分(fen)析(xi)，單峰溶解曲線(xian)表(biao)示(shi)擴增產物(wu)單壹(yi)，無非特(te)異(yi)性(xing)擴增產物(wu)。溶解曲線(xian)生(sheng)成的反應程(cheng)序(xu)為(wei): 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註意(yi)事項(xiang)：收集(ji)標(biao)本前必(bi)須(xu)清(qing)楚(chu)要(yao)檢(jian)測(ce)的成份是(shi)否(fou)足夠穩定(ding)，對收集(ji)後當(dang)天(tian)進行檢(jian)測(ce)的標(biao)本(ben)，儲存(cun)在(zai)4℃備(bei)用(yong)，如(ru)有(you)特(te)殊原(yuan)因需要(yao)周期收集標本(ben)，將(jiang)標(biao)本及(ji)時(shi)分(fen)裝後(hou)放在(zai)-20℃或(huo)-70℃條(tiao)件(jian)下(xia)保存(cun)。避免(mian)反復(fu)凍(dong)融(rong)，標(biao)本2-8℃可保存(cun)48小時(shi)，-20℃可保存(cun)1個(ge)月，-70度(du)可保存(cun)6個(ge)月，部(bu)分(fen)標本(ben)需添(tian)加抑(yi)肽酶。我公司(si)是(shi)國內(nei)信譽(yu)雙收的放心(xin)企(qi)業代(dai)理商，具(ju)有良好的市場(chang)信譽(yu)與口碑，專業的銷(xiao)售和(he)技(ji)術服(fu)務團(tuan)隊(dui)，歡迎(ying)廣(guang)大(da)師(shi)生、研(yan)究(jiu)機構等，洽(qia)商(shang)。

細(xi)胞(bao)出(chu)現問(wen)題，可重發的情(qing)況(kuang)有哪(na)些？判(pan)定(ding)標準(zhun)是(shi)什麽(me)？
　　（1）細(xi)胞(bao)運(yun)輸途(tu)中遭遇的各種(zhong)問題，細(xi)胞(bao)丟(diu)失、破損(sun)、漏(lou)液等(deng)，重(zhong)發(fa)；
　　（2）凍(dong)存(cun)的細(xi)胞(bao)復(fu)蘇後(hou)，絕大多數細(xi)胞(bao)未(wei)存(cun)活，重(zhong)發；
　　（3）存(cun)活的細(xi)胞(bao)靜(jing)置24小時(shi)後，絕大多數細(xi)胞(bao)未(wei)存(cun)活，重(zhong)發；
　　（4）凍(dong)存(cun)的細(xi)胞(bao)復(fu)蘇後(hou)或存(cun)活的細(xi)胞(bao)靜(jing)置4小時(shi)後並且(qie)未(wei)開封，出(chu)現汙(wu)染(ran)，重發；
　　（5）視(shi)具(ju)體(ti)情況而定(ding)。
細(xi)胞(bao)出(chu)現問(wen)題，不(bu)予(yu)以重發的情(qing)況(kuang)有哪(na)些？
　　（1）客戶(hu)造(zao)成細(xi)胞(bao)汙(wu)染，不(bu)重發；
　　（2）客戶(hu)不(bu)正確操作致細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)不(bu)好，不(bu)重發；
　　（3）細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)不(bu)好，未(wei)提(ti)供細(xi)胞(bao)培(pei)養前3天(tian)照(zhao)片(pian)的，不(bu)重發；
　　（4）細(xi)胞(bao)培(pei)養時(shi)經其它處(chu)理的，不(bu)重發；
　　（5）細(xi)胞(bao)收(shou)到(dao)2天(tian)內(nei)，未(wei)告(gao)知，不(bu)重發；
　　（6）視(shi)具(ju)體(ti)情況而定(ding)。