上海乾(qian)思生物Biotium品牌代理專業經(jing)營進(jin)口(kou)胎(tai)牛血(xue)清、細(xi)胞因(yin)子(zi)、ELISA試(shi)劑盒(he)、細(xi)胞、抗(kang)體、生物試(shi)劑、耗(hao)材、培(pei)養基、壹抗(kang)、二抗(kang)、其產(chan)品吸附(fu)均(jun)勻，吸(xi)附性好(hao)，空白值低(di)，孔(kong)底透明度高(gao)，代(dai)做(zuo)ELISA實驗(yan)等(deng)。完(wan)善(shan)的庫(ku)存及供應體系(xi)以(yi)及(ji)高(gao)效穩定(ding)的純化(hua)技(ji)術(shu)，保證(zheng)產(chan)品均(jun)能(neng)現(xian)貨供應和產(chan)品質(zhi)量的穩(wen)定(ding)性。

Biotium

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怎樣查到(dao)壹(yi)個(ge)特定(ding)細胞(bao)株的相(xiang)關(guan)知(zhi)識和培養(yang)條件(jian)？
ATCC（American Type Culture Collection）收(shou)集(ji)了(le)絕大(da)多數(shu)細(xi)胞的詳(xiang)細(xi)資(zi)料(liao)。打開(kai)ATCC網頁的Cells and hybridomas鏈(lian)接，輸入細(xi)胞名(ming)稱就(jiu)可(ke)以(yi)搜索(suo)ATCC的細(xi)胞(bao)數(shu)據(ju)庫。數(shu)據(ju)庫中有(you)每壹(yi)種(zhong)細(xi)胞(bao)的詳(xiang)細(xi)描述(shu)，包括細胞的來(lai)源，培(pei)養(yang)和凍存條件(jian)，以(yi)及(ji)相(xiang)關(guan)文(wen)獻等(deng)資(zi)料(liao)。
如何(he)選(xuan)用(yong)特殊(shu)細胞系(xi)培(pei)養(yang)基？
培養某(mou)類(lei)型(xing)細(xi)胞沒有(you)固定(ding)的培(pei)養(yang)條件(jian)。MEM中培養的細(xi)胞(bao)，很可(ke)能(neng)在DMEM或M199中同樣容易生長。總之，*MEM、DMEM做(zuo)貼壁細胞(bao)培(pei)養；RPMI1640做(zuo)懸浮(fu)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)；各(ge)種目(mu)的無(wu)血(xue)清培(pei)養*AIMV培(pei)養(yang)基（SFM）。

測序實驗(yan)流(liu)程(cheng)：
1 收(shou)集(ji)樣品
2 相關(guan)試(shi)劑 總(zong)RNA提(ti)取試(shi)劑TREzol Reagent (RNA提(ti)取試(shi)劑), M-MLV(cDNA逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)酶(mei)), RNA 純化(hua)試(shi)劑, RealqPCR MasterMix (熒(ying)光定(ding)量PCR預混(hun)試(shi)劑)。
3 實驗(yan)儀(yi)器(qi) 熒(ying)光定(ding)量PCR儀(yi); PCR儀;低溫離心(xin)機(ji)。
4 總RNA提(ti)取
5 cDNA合(he)成(cheng) 在(zai)0.5ml的離(li)心(xin)管中(zhong)加入(ru)1µl模(mo)板(ban)總RNA(1µg/µl); 2µl隨(sui)機引(yin)物(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水(shui)至(zhi)15µl體系(xi)。混(hun)勻後(hou)70℃變性(xing)RNA 5分(fen)鐘，冰(bing)上(shang)速冷1分鐘(zhong)，離(li)心將(jiang)溶液收(shou)集(ji)至(zhi)管底加入(ru)6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水(shui)至(zhi)30µl體系(xi)。PCR儀(yi)中(zhong)反應條件(jian)設置 37℃延(yan)伸(shen)60min，70℃保溫15min終止(zhi)反應。合(he)成(cheng)好(hao)的cDNA置(zhi)於(yu) -20 ℃保存備用。
6 引(yin)物設計(ji)與(yu)thermal cycler protocol thermal cycler protocol合(he)成(cheng)
7 實時定(ding)量PCR 按(an)以(yi)下反應體系(xi)進(jin)行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上(shang)遊引(yin)物F 1 ul，下遊(you)引(yin)物R 1 ul;cDNA template 2ul。定(ding)量PCR儀(yi)擴增反應條件(jian)設置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個循環(huan))。
8 PCR產(chan)物溶(rong)解曲線(xian)分(fen)析(xi) 將(jiang)所擴增(zeng)的PCR 產(chan)物進(jin)行溶(rong)解曲線(xian)分(fen)析(xi)，單(dan)峰溶(rong)解曲線(xian)表(biao)示擴增(zeng)產(chan)物單(dan)壹，無(wu)非(fei)特異(yi)性(xing)擴(kuo)增產(chan)物。溶(rong)解曲線(xian)生成(cheng)的反應程(cheng)序為(wei): 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註意(yi)事(shi)項：收(shou)集(ji)標本(ben)前必(bi)須清楚(chu)要檢(jian)測(ce)的成(cheng)份(fen)是(shi)否(fou)足夠穩(wen)定(ding)，對收(shou)集(ji)後(hou)當天進行檢(jian)測的標(biao)本(ben)，儲存在4℃備用(yong)，如(ru)有(you)特殊(shu)原因(yin)需(xu)要周(zhou)期(qi)收(shou)集(ji)標本(ben)，將(jiang)標本(ben)及時分裝後(hou)放(fang)在(zai)-20℃或(huo)-70℃條件(jian)下保(bao)存。避(bi)免(mian)反復凍(dong)融，標本(ben)2-8℃可(ke)保(bao)存48小時，-20℃可(ke)保(bao)存1個月，-70度可(ke)保(bao)存6個月，部(bu)分(fen)標(biao)本(ben)需添(tian)加抑(yi)肽(tai)酶(mei)。我公(gong)司是(shi)國內(nei)信譽雙(shuang)收(shou)的放(fang)心(xin)企業(ye)代理(li)商，具(ju)有(you)良(liang)好(hao)的市場(chang)信譽與(yu)口(kou)碑，專業的銷(xiao)售(shou)和技(ji)術(shu)服(fu)務團隊，歡迎廣(guang)大師生、研究機構等(deng)，洽商。

細(xi)胞(bao)出(chu)現(xian)問題(ti)，可(ke)重(zhong)發的情(qing)況(kuang)有(you)哪些(xie)？判(pan)定(ding)標準(zhun)是(shi)什(shen)麽(me)？
　　（1）細(xi)胞運(yun)輸途中(zhong)遭遇(yu)的各(ge)種(zhong)問題(ti)，細(xi)胞(bao)丟(diu)失、破損(sun)、漏液等(deng)，重發；
　　（2）凍(dong)存的細(xi)胞(bao)復蘇(su)後(hou)，絕大(da)多數(shu)細(xi)胞未(wei)存活(huo)，重(zhong)發(fa)；
　　（3）存活(huo)的細(xi)胞(bao)靜置(zhi)24小時後(hou)，絕大(da)多數(shu)細(xi)胞未(wei)存活(huo)，重(zhong)發(fa)；
　　（4）凍(dong)存的細(xi)胞(bao)復蘇(su)後(hou)或存活(huo)的細(xi)胞(bao)靜置(zhi)4小時後(hou)並且(qie)未(wei)開(kai)封，出(chu)現(xian)汙染，重發(fa)；
　　（5）視具(ju)體情(qing)況(kuang)而定(ding)。
細胞(bao)出現(xian)問題(ti)，不予以(yi)重(zhong)發(fa)的情(qing)況(kuang)有(you)哪些(xie)？
　　（1）客(ke)戶(hu)造成(cheng)細(xi)胞汙染，不重發(fa)；
　　（2）客(ke)戶(hu)不正確(que)操作(zuo)致(zhi)細(xi)胞狀態(tai)不好，不重發(fa)；
　　（3）細(xi)胞(bao)狀態(tai)不好，未(wei)提(ti)供細胞(bao)培養(yang)前3天照片的，不重發(fa)；
　　（4）細(xi)胞(bao)培養(yang)時經其它(ta)處(chu)理的，不重發(fa)；
　　（5）細(xi)胞(bao)收(shou)到(dao)2天內(nei)，未(wei)告(gao)知(zhi)，不重發(fa)；
　　（6）視具(ju)體情(qing)況(kuang)而定(ding)。