上(shang)海(hai)乾(qian)思(si)生物(wu)Gene Bridges GmbH品牌代(dai)理專業經(jing)營進口胎牛(niu)血清、細(xi)胞(bao)因子、ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)、細(xi)胞(bao)、抗(kang)體、生物(wu)試劑(ji)、耗(hao)材、培(pei)養(yang)基(ji)、壹抗(kang)、二抗(kang)、其(qi)產(chan)品吸附均(jun)勻，吸(xi)附性好(hao)，空(kong)白(bai)值低(di)，孔底透明(ming)度高，代(dai)做(zuo)ELISA實驗(yan)等。完善(shan)的(de)庫存(cun)及供(gong)應(ying)體系以及高(gao)效(xiao)穩定(ding)的(de)純(chun)化(hua)技(ji)術，保(bao)證產品均能現貨供應(ying)和產(chan)品質量的(de)穩定(ding)性。

Gene Bridges GmbH

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怎(zen)樣查到(dao)壹個特(te)定細(xi)胞(bao)株(zhu)的相(xiang)關知識和(he)培養(yang)條(tiao)件(jian)？
ATCC（American Type Culture Collection）收集(ji)了(le)絕(jue)大(da)多(duo)數細(xi)胞(bao)的(de)詳(xiang)細(xi)資(zi)料。打開ATCC網頁(ye)的Cells and hybridomas鏈(lian)接，輸入(ru)細(xi)胞(bao)名稱(cheng)就可(ke)以(yi)搜(sou)索(suo)ATCC的細(xi)胞(bao)數據(ju)庫。數據(ju)庫中(zhong)有每(mei)壹種(zhong)細(xi)胞(bao)的(de)詳(xiang)細(xi)描述(shu)，包(bao)括(kuo)細(xi)胞(bao)的(de)來源，培(pei)養(yang)和(he)凍存(cun)條件(jian)，以及相(xiang)關文(wen)獻(xian)等資(zi)料。
如何選(xuan)用特(te)殊細(xi)胞(bao)系(xi)培(pei)養(yang)基(ji)？
培養(yang)某(mou)類型(xing)細(xi)胞(bao)沒(mei)有固(gu)定的(de)培養(yang)條(tiao)件(jian)。MEM中培養(yang)的(de)細(xi)胞(bao)，很(hen)可能在(zai)DMEM或(huo)M199中(zhong)同(tong)樣(yang)容(rong)易(yi)生長。總(zong)之(zhi)，*MEM、DMEM做(zuo)貼壁(bi)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)；RPMI1640做(zuo)懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)；各(ge)種目的無血清培(pei)養(yang)*AIMV培(pei)養(yang)基(ji)（SFM）。

測序實驗(yan)流(liu)程(cheng)：
1 收集(ji)樣(yang)品
2 相關試劑(ji) 總(zong)RNA提取(qu)試劑(ji)TREzol Reagent (RNA提取(qu)試劑(ji)), M-MLV(cDNA逆(ni)轉錄酶), RNA 純(chun)化(hua)試(shi)劑(ji), RealqPCR MasterMix (熒(ying)光定(ding)量PCR預混試(shi)劑(ji))。
3 實驗(yan)儀(yi)器 熒光(guang)定量(liang)PCR儀; PCR儀;低(di)溫(wen)離心機。
4 總(zong)RNA提取(qu)
5 cDNA合成 在(zai)0.5ml的離心管中(zhong)加(jia)入(ru)1µl模板(ban)總(zong)RNA(1µg/µl); 2µl隨(sui)機(ji)引物(wu)(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加(jia)水(shui)至15µl體系。混勻後(hou)70℃變(bian)性RNA 5分(fen)鐘，冰(bing)上速(su)冷(leng)1分(fen)鐘，離心將(jiang)溶(rong)液收集(ji)至管底(di)加(jia)入(ru)6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加(jia)水(shui)至30µl體系。PCR儀中反應(ying)條件(jian)設(she)置 37℃延伸60min，70℃保(bao)溫15min終(zhong)止(zhi)反應(ying)。合成好(hao)的cDNA置於(yu) -20 ℃保存(cun)備用。
6 引物(wu)設(she)計與(yu)thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成
7 實時(shi)定量PCR 按(an)以(yi)下反應(ying)體系進行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上(shang)遊(you)引物(wu)F 1 ul，下遊引物(wu)R 1 ul;cDNA template 2ul。定量(liang)PCR儀擴(kuo)增反應(ying)條件(jian)設(she)置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個循環(huan))。
8 PCR產物(wu)溶解(jie)曲(qu)線分(fen)析 將(jiang)所(suo)擴(kuo)增的(de)PCR 產物(wu)進行(xing)溶解(jie)曲(qu)線分(fen)析，單(dan)峰(feng)溶解(jie)曲(qu)線表示擴(kuo)增產(chan)物(wu)單壹(yi)，無非特(te)異性擴(kuo)增產(chan)物(wu)。溶解(jie)曲(qu)線生成的(de)反應(ying)程(cheng)序為(wei): 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註(zhu)意事(shi)項(xiang)：收(shou)集(ji)標本(ben)前(qian)必須清楚(chu)要檢(jian)測的成份(fen)是否足夠(gou)穩(wen)定(ding)，對(dui)收(shou)集(ji)後(hou)當天進行(xing)檢(jian)測的標本(ben)，儲存(cun)在(zai)4℃備用(yong)，如有特(te)殊原因需(xu)要周期收集(ji)標本(ben)，將(jiang)標本(ben)及時(shi)分(fen)裝(zhuang)後放(fang)在(zai)-20℃或(huo)-70℃條(tiao)件(jian)下保存(cun)。避(bi)免(mian)反復凍融(rong)，標本(ben)2-8℃可保(bao)存48小時(shi)，-20℃可保存1個月，-70度(du)可(ke)保(bao)存6個月，部(bu)分(fen)標本(ben)需(xu)添加(jia)抑肽(tai)酶(mei)。我公司(si)是國內信譽(yu)雙收的放(fang)心(xin)企業(ye)代(dai)理商(shang)，具有(you)良(liang)好(hao)的(de)市場信譽(yu)與口碑(bei)，專業的(de)銷(xiao)售和技(ji)術服(fu)務(wu)團(tuan)隊，歡迎廣大(da)師生、研(yan)究機構(gou)等，洽商(shang)。

細(xi)胞(bao)出(chu)現問(wen)題(ti)，可重發的(de)情(qing)況有哪(na)些(xie)？判定(ding)標準是什(shen)麽？
　　（1）細(xi)胞(bao)運(yun)輸途中(zhong)遭遇(yu)的(de)各(ge)種(zhong)問題(ti)，細(xi)胞(bao)丟(diu)失(shi)、破(po)損(sun)、漏(lou)液等，重發；
　　（2）凍(dong)存(cun)的細(xi)胞(bao)復蘇後(hou)，絕(jue)大(da)多(duo)數細(xi)胞(bao)未(wei)存(cun)活(huo)，重發；
　　（3）存(cun)活(huo)的(de)細(xi)胞(bao)靜(jing)置24小時(shi)後，絕(jue)大(da)多(duo)數細(xi)胞(bao)未(wei)存(cun)活(huo)，重發；
　　（4）凍(dong)存(cun)的細(xi)胞(bao)復蘇後(hou)或(huo)存(cun)活(huo)的(de)細(xi)胞(bao)靜(jing)置4小時(shi)後並(bing)且(qie)未(wei)開封，出現汙(wu)染，重發；
　　（5）視(shi)具體情(qing)況而(er)定(ding)。
細(xi)胞(bao)出(chu)現問(wen)題(ti)，不予(yu)以(yi)重發的(de)情(qing)況有哪(na)些(xie)？
　　（1）客(ke)戶(hu)造(zao)成細(xi)胞(bao)汙(wu)染，不重發；
　　（2）客(ke)戶(hu)不正確(que)操(cao)作(zuo)致細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)不好(hao)，不重發；
　　（3）細(xi)胞(bao)狀(zhuang)態(tai)不好(hao)，未(wei)提供(gong)細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)前(qian)3天照片(pian)的，不重發；
　　（4）細(xi)胞(bao)培(pei)養(yang)時(shi)經(jing)其(qi)它(ta)處(chu)理(li)的，不重發；
　　（5）細(xi)胞(bao)收(shou)到(dao)2天內，未(wei)告(gao)知，不重發；
　　（6）視(shi)具體情(qing)況而(er)定(ding)。