人磷酸(suan)化(hua)蛋(dan)白(bai)激酶 C （P-PKC） ELISA
人磷酸(suan)化(hua)蛋(dan)白(bai)激酶 C （P-PKC） ELISA是壹(yi)項(xiang)極為(wei)重(zhong)要的檢(jian)測技(ji)術(shu)，在生(sheng)命(ming)科(ke)學研(yan)究(jiu)與(yu)臨(lin)床診斷(duan)等領域發揮著(zhe)關(guan)鍵(jian)作用(yong)。
蛋(dan)白(bai)激酶 C（PKC）在細(xi)胞信(xin)號(hao)轉導通(tong)路中(zhong)占(zhan)據(ju)核(he)心地(di)位(wei)，參(can)與(yu)細胞增(zeng)殖、分化(hua)、雕亡等(deng)眾多(duo)生(sheng)理(li)過程(cheng)。而(er)其磷酸(suan)化(hua)形式(shi)（P - PKC）的水(shui)平變(bian)化(hua)，更是(shi)能夠(gou)敏(min)銳(rui)反(fan)映細胞內(nei)信(xin)號(hao)傳導的激(ji)活(huo)狀(zhuang)態(tai)。人 P - PKC ELISA 試(shi)劑(ji)盒便是專(zhuan)門(men)用(yong)於(yu)精(jing)準檢(jian)測人(ren)體(ti)樣本（如血清(qing)、血漿(jiang)、細(xi)胞培(pei)養(yang)上清(qing)或組(zu)織勻漿(jiang)等(deng)）中(zhong) P - PKC 含量的工(gong)具(ju)。
該技術主(zhu)要基於雙抗體夾(jia)心 ELISA 原(yuan)理(li)。試劑(ji)盒中預(yu)先包(bao)被了能夠(gou)特(te)異(yi)性(xing)識別(bie) P - PKC 的抗體於微孔(kong)板表面(mian)。當(dang)加入待測樣本時(shi)，樣本中(zhong)的 P - PKC 會與固(gu)相化(hua)的抗體緊(jin)密(mi)結(jie)合(he)。接(jie)著(zhe)，加入酶標記(ji)的抗 P - PKC 抗體，它(ta)會與已(yi)經(jing)結合(he)在固(gu)相抗體上的 P - PKC 進(jin)壹步結(jie)合(he)，從而(er)形(xing)成穩(wen)固的 “固(gu)相抗體 - P - PKC - 酶標抗體" 免疫(yi)復合(he)物。隨(sui)後(hou)進(jin)行嚴格(ge)的洗(xi)滌步(bu)驟(zhou)，徹di去(qu)除(chu)未結(jie)合(he)的雜(za)質(zhi)成分。此(ci)時，加入酶的底物顯(xian)色劑(ji)，在酶的高效催(cui)化(hua)作用(yong)下，底物發(fa)生(sheng)化(hua)學反(fan)應並(bing)呈現出(chu)特(te)定(ding)顏(yan)色(se)，且(qie)顏(yan)色(se)的深淺(qian)程(cheng)度(du)與(yu)樣本中(zhong) P - PKC 的含量呈正(zheng)相(xiang)關(guan)關(guan)系。最後(hou)，利(li)用(yong)酶標儀(yi)在特(te)定(ding)波長（常見為(wei) 450nm）下準確(que)測定(ding)吸(xi)光(guang)度(du)（OD 值(zhi)），通(tong)過與(yu)事先精心繪(hui)制(zhi)好(hao)的標準曲(qu)線相(xiang)對照(zhao)，便(bian)能(neng)精確(que)計算出(chu)樣本中(zhong) P - PKC 的濃(nong)度(du)。
在實(shi)際(ji)操(cao)作(zuo)過程(cheng)中(zhong)，有著(zhe)嚴(yan)謹(jin)的流(liu)程(cheng)規(gui)範(fan)。首(shou)先要對樣本進(jin)行妥(tuo)善(shan)采(cai)集與預(yu)處理(li)，保(bao)證樣本的完整(zheng)性(xing)與有效(xiao)性(xing)。同時(shi)，將(jiang)試劑(ji)盒從低溫(wen)儲存環境(jing)取(qu)出(chu)，恢(hui)復至(zhi)室(shi)溫狀(zhuang)態(tai)。在微(wei)孔(kong)板中(zhong)精確添加不(bu)同濃(nong)度(du)梯度(du)的標準品，如 0、50、100、200、400、800 pg/mL 等，用(yong)於(yu)構(gou)建(jian)標準曲(qu)線。之後(hou)將(jiang)處理(li)好的待(dai)測樣本加入相應孔(kong)中(zhong)，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩(dang)使(shi)樣本與(yu)固(gu)相(xiang)抗體充分接觸(chu)。封(feng)板後(hou)，放(fang)入 37℃恒(heng)溫培(pei)養(yang)箱孵(fu)育(yu)特定(ding)時(shi)長，壹般為(wei) 30 - 60 分鐘。孵(fu)育(yu)完成後(hou)，小心棄去(qu)孔(kong)內(nei)液(ye)體，用(yong)洗(xi)滌緩(huan)沖液(ye)反復洗(xi)滌微(wei)孔(kong)板，每次浸泡(pao)時(shi)間(jian)約為(wei) 30 - 60 秒(miao)，確(que)保(bao)徹di清(qing)除(chu)未結(jie)合(he)物，隨(sui)後(hou)將(jiang)板拍幹。接著(zhe)加入酶標工(gong)作(zuo)液(ye)，再次孵育(yu)並(bing)洗(xi)滌。之後(hou)依(yi)次添加顯(xian)色(se)劑(ji) A 和(he)顯色(se)劑(ji) B，輕柔(rou)振(zhen)蕩(dang)混(hun)勻，在 37℃避(bi)光(guang)條(tiao)件下進(jin)行顯色(se)反應，時(shi)間(jian)通(tong)常控(kong)制(zhi)在 15 - 30 分鐘。當(dang)顯色(se)達(da)到(dao)理(li)想效果(guo)時，迅速加入終(zhong)止(zhi)液(ye)終(zhong)止(zhi)反應，溶(rong)液(ye)顏色(se)會從藍(lan)色瞬間(jian)轉變(bian)為(wei)黃(huang)色。在加入終(zhong)止(zhi)液(ye)後(hou)的 15 分鐘內(nei)，立即(ji)使用(yong)酶標儀(yi)測定(ding)各孔(kong)的 OD 值(zhi)。
人 P - PKC ELISA 檢(jian)測具(ju)有靈(ling)敏(min)度(du)高、特異(yi)性(xing)強、重(zhong)復性(xing)佳等(deng)顯(xian)著(zhu)優勢，能夠(gou)精(jing)準檢(jian)測出(chu)極(ji)低含量的 P - PKC。在科(ke)研領域，有助(zhu)於深入探究細胞信(xin)號(hao)轉導機(ji)制(zhi)以及(ji)相關(guan)疾病(bing)的發(fa)病(bing)機(ji)理(li)；在臨(lin)床方面(mian)，可(ke)用(yong)於(yu)腫(zhong)瘤(liu)、心血(xue)管(guan)疾病(bing)、神經(jing)系統疾病(bing)等多種(zhong)疾病(bing)的輔(fu)助診斷(duan)、病(bing)情監測以及(ji)預(yu)後(hou)評(ping)估，為(wei)醫(yi)生(sheng)制(zhi)定(ding)科(ke)學合(he)理(li)的治(zhi)療方案(an)提供(gong)重(zhong)要依據(ju) 。
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