人(ren)細(xi)胞角蛋(dan)白17(CK17)ELISA
人細(xi)胞角蛋(dan)白17(CK17)ELISA 是壹(yi)種用(yong)於檢(jian)測(ce)人體(ti)樣(yang)本(ben)中細(xi)胞角蛋(dan)白 17 含量(liang)的酶聯(lian)免疫(yi)吸(xi)附(fu)測(ce)定(ding)技術(shu)，在醫(yi)學(xue)研(yan)究(jiu)和(he)臨(lin)床(chuang)診斷(duan)中具有重(zhong)要(yao)意義(yi)。
細(xi)胞角蛋(dan)白 17 屬(shu)於中間絲(si)蛋(dan)白家族(zu)，主要(yao)在復(fu)層(ceng)上皮及(ji)壹(yi)些(xie)惡性(xing)腫瘤(liu)細(xi)胞中表達。通過(guo)檢(jian)測(ce)其含(han)量(liang)，可輔(fu)助疾(ji)病的診斷(duan)與(yu)病情(qing)評估(gu)。人 CK17 ELISA 試(shi)劑盒(he)壹(yi)般采用(yong)雙抗(kang)體夾心(xin)法(fa)原(yuan)理。試劑盒中包(bao)含(han)已(yi)包(bao)被(bei)抗(kang)人(ren) CK17 抗(kang)體(ti)的微孔板，當(dang)加入(ru)待測(ce)樣(yang)本(ben)（如(ru)血清(qing)、血漿(jiang)或(huo)細(xi)胞培(pei)養(yang)上清(qing)等(deng)）時(shi)，樣(yang)本(ben)中的 CK17 會與(yu)固(gu)相抗(kang)體特(te)異性(xing)結合(he)。之後(hou)加入(ru)酶標(biao)抗人(ren) CK17 抗(kang)體，它(ta)會與(yu)已(yi)結合(he)在固(gu)相(xiang)抗(kang)體上的 CK17 結合，形(xing)成(cheng) “固相(xiang)抗體(ti) - CK17 - 酶標(biao)抗(kang)體(ti)" 免(mian)疫復合(he)物。經過(guo)徹di洗滌(di)，去除(chu)未結合的物質，此(ci)時(shi)加入(ru)酶底物(wu)顯(xian)色(se)劑(ji)。在酶(mei)的催化作(zuo)用(yong)下，底物(wu)發生(sheng)顯(xian)色(se)反(fan)應(ying)，顏色的深淺(qian)與(yu)樣(yang)本(ben)中 CK17 的含量(liang)成(cheng)正比(bi)。最後(hou)，使(shi)用(yong)酶標(biao)儀在特(te)定(ding)波(bo)長(chang)（通(tong)常(chang)為(wei) 450nm）下測(ce)定(ding)吸(xi)光度（OD 值(zhi)），通過(guo)與(yu)預(yu)先繪(hui)制(zhi)的標準曲(qu)線對(dui)比(bi)，就能(neng)準(zhun)確(que)計(ji)算(suan)出(chu)樣(yang)本(ben)中 CK17 的濃度。
以(yi)常(chang)見的試劑盒(he)操(cao)作為(wei)例，首(shou)先需(xu)準(zhun)備好(hao)樣(yang)本(ben)，按照規定(ding)進(jin)行采(cai)集與(yu)預(yu)處(chu)理，保證樣(yang)本(ben)的質量(liang)。同時(shi)，將(jiang)試劑(ji)盒(he)從(cong)冷藏環(huan)境取出，平衡(heng)至(zhi)室溫。在微(wei)孔(kong)板中準確(que)加入(ru)標準(zhun)品，設置(zhi)不(bu)同(tong)濃度梯度，如(ru) 0、10、20、40、80、160 pg/mL 等，用(yong)於繪(hui)制(zhi)標準(zhun)曲(qu)線(xian)。接著(zhe)，將(jiang)處(chu)理好(hao)的待測(ce)樣(yang)本(ben)加入(ru)對(dui)應(ying)的孔中。加入(ru)樣(yang)本(ben)後，輕輕振蕩混勻，用(yong)封板膜(mo)封板，置(zhi)於 37℃恒(heng)溫(wen)培養(yang)箱中孵育(yu)壹(yi)段時(shi)間，常(chang)見為(wei) 30 分鐘(zhong)。孵育(yu)結束(shu)後，棄(qi)去孔(kong)內(nei)液體，用(yong)洗滌(di)緩沖(chong)液洗滌(di)微(wei)孔板數(shu)次，每次浸(jin)泡壹(yi)定(ding)時(shi)間（如(ru) 30 秒），確(que)保(bao)徹di去除(chu)未結合物質(zhi)，然後拍(pai)幹。隨(sui)後加入(ru)酶標(biao)工(gong)作液，再次孵育(yu)並洗滌(di)。之後(hou)依(yi)次加入(ru)顯(xian)色(se)劑(ji) A 和(he)顯(xian)色(se)劑(ji) B，輕(qing)輕(qing)振蕩混勻，在 37℃避(bi)光環(huan)境下顯(xian)色(se)，顯(xian)色(se)時(shi)間壹(yi)般為(wei) 15 分鐘(zhong)左右。當顯(xian)色(se)達到預(yu)期(qi)效(xiao)果(guo)後，加入(ru)終(zhong)止(zhi)液終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)，此時(shi)溶(rong)液顏色由藍色(se)變為(wei)黃色。在加入(ru)終(zhong)止(zhi)液後的 15 分鐘(zhong)內(nei)，使(shi)用(yong)酶標(biao)儀測(ce)定(ding)各孔(kong)的 OD 值(zhi)。
人 CK17 ELISA 檢測(ce)具有(you)靈(ling)敏度高、特異性(xing)強、重(zhong)復(fu)性(xing)好(hao)等優(you)點(dian)，能夠(gou)準(zhun)確(que)檢(jian)測(ce)出低(di)含量(liang)的 CK17，為(wei)疾病的早(zao)期診斷(duan)提供依據。在臨(lin)床(chuang)應(ying)用(yong)方面，可(ke)用(yong)於某些(xie)上皮(pi)源(yuan)性(xing)腫瘤(liu)（如(ru)乳腺(xian)癌、肺(fei)癌等(deng)）的輔助診斷(duan)、病情(qing)監(jian)測(ce)以(yi)及(ji)預(yu)後(hou)評估(gu)，幫助醫生(sheng)更(geng)好(hao)地制(zhi)定(ding)治療方案(an)和(he)判(pan)斷(duan)患(huan)者的康復情(qing)況。
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