人I型膠原蛋白(bai)試(shi)劑(ji)盒
人(ren)I型膠(jiao)原蛋白(bai)試(shi)劑(ji)盒，多(duo)采用(yong)酶聯(lian)免疫(yi)吸附(fu)試驗（ELISA）技術(shu)，在(zai)科研領(ling)域發揮(hui)著(zhe)重(zhong)要(yao)作(zuo)用(yong)。其(qi)主(zhu)要(yao)用(yong)於測(ce)定(ding)人(ren)血(xue)清、血(xue)漿(jiang)、組織及(ji)相(xiang)關液(ye)體樣(yang)本中人(ren) I 型膠(jiao)原蛋白(bai)的(de)含量或(huo)活(huo)性(xing) 。
該(gai)試(shi)劑(ji)盒實(shi)驗原理基於雙抗體夾心法(fa)。以(yi)常(chang)見(jian)的(de) ELISA 試劑(ji)盒為(wei)例(li)，首先(xian)用(yong)純(chun)化的(de)人 I 型膠(jiao)原蛋白(bai)抗體包(bao)被(bei)微(wei)孔(kong)板，制(zhi)成固(gu)相(xiang)抗體。實(shi)驗時，往(wang)包(bao)被(bei)單(dan)抗的(de)微(wei)孔(kong)中依(yi)次(ci)加(jia)入樣(yang)本（如(ru)血(xue)清、血(xue)漿(jiang)等(deng)），樣(yang)本中的(de)人 I 型膠(jiao)原蛋白(bai)會(hui)與(yu)固(gu)相(xiang)抗體結(jie)合(he)。之(zhi)後再加(jia)入 HRP 標(biao)記(ji)的(de)相(xiang)關抗體，形(xing)成抗體 - 抗原 - 酶標(biao)抗體復(fu)合(he)物(wu)。經過(guo)洗滌(di)步驟去除未結(jie)合(he)物(wu)質後，加(jia)入底(di)物(wu) TMB 顯(xian)色(se)。TMB 在(zai)酶的(de)催化下發生顯(xian)色(se)反(fan)應，顏(yan)色(se)深(shen)淺(qian)與(yu)樣(yang)本中人(ren) I 型膠(jiao)原蛋白(bai)的(de)含量呈(cheng)正(zheng)相(xiang)關 。最後，用(yong)酶標(biao)儀(yi)在(zai) 450nm 波(bo)長下測定吸(xi)光度(du)（OD 值），通(tong)過(guo)預(yu)先(xian)繪(hui)制(zhi)的(de)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)，就能計算(suan)出樣(yang)品(pin)中人(ren) I 型膠(jiao)原蛋白(bai)的(de)濃度(du) 。
從(cong)試(shi)劑(ji)盒的(de)組成來看(kan)，通常包(bao)含結(jie)合(he)物(wu)及(ji)標(biao)本的(de)稀釋液、洗滌(di)液(ye)（常見(jian)含 0.05% 吐溫 20 磷酸(suan)緩(huan)沖(chong)鹽(yan)水(shui)）、酶標(biao)試(shi)劑(ji)、顯(xian)色(se)劑(ji) A 和 B、終(zhong)止(zhi)液(ye)以(yi)及(ji)標(biao)準(zhun)品(pin)等。標(biao)準(zhun)品(pin)壹(yi)般(ban)會(hui)提(ti)供(gong)不同(tong)濃度(du)梯(ti)度(du)，比如(ru) 800、400、200、100、50、25 pg/mL，用(yong)於繪(hui)制(zhi)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian) 。
在(zai)操作(zuo)時，需嚴(yan)格(ge)遵(zun)循步驟。優良行標(biao)準(zhun)品(pin)的(de)稀釋，按(an)照(zhao)說明(ming)書在(zai)小試(shi)管中準(zhun)確(que)操作。加(jia)樣環節，要(yao)分(fen)別(bie)設空白(bai)孔(kong)、標(biao)準(zhun)孔(kong)、待(dai)測(ce)樣(yang)品(pin)孔(kong)。標(biao)準(zhun)孔(kong)準(zhun)確(que)加(jia)樣 50μl，待測(ce)樣品(pin)孔(kong)則(ze)先(xian)加(jia) 40μl 樣品(pin)稀釋液，再加(jia) 10μl 待測樣(yang)品(pin)，加(jia)樣時將(jiang)樣品(pin)加(jia)於酶標(biao)板孔(kong)底(di)部(bu)，輕(qing)輕(qing)晃動混勻 。隨後用(yong)封(feng)板膜封(feng)板，置於(yu) 37℃溫(wen)育 30 分鐘(zhong)。接著(zhe)將(jiang) 30 倍濃縮洗滌(di)液(ye)用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水 30 倍稀釋後備用(yong)，小心揭(jie)掉(diao)封(feng)板膜，棄去液(ye)體(ti)、甩(shuai)幹，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗滌(di)液(ye)，靜置 30 秒(miao)後棄去(qu)，重(zhong)復(fu)洗滌(di) 5 次(ci)並(bing)拍(pai)幹。之(zhi)後每(mei)孔(kong)加(jia)入酶標(biao)試(shi)劑(ji) 50μl（空(kong)白(bai)孔(kong)除(chu)外(wai)），再次洗滌(di)後，每(mei)孔(kong)先(xian)加(jia)入顯(xian)色(se)劑(ji) A50μl，再加(jia)入顯(xian)色(se)劑(ji) B50μl，輕(qing)輕(qing)震(zhen)蕩(dang)混勻，37℃避光顯(xian)色(se) 10 分(fen)鐘(zhong)，最後每(mei)孔(kong)加(jia) 50μl 終止(zhi)液(ye)終止(zhi)反(fan)應，此時溶(rong)液(ye)顏(yan)色(se)由(you)藍色立轉(zhuan)黃色(se) 。在(zai)加(jia)終止(zhi)液(ye)後 15 分鐘(zhong)以(yi)內(nei)，以(yi)空(kong)白(bai)孔(kong)調零(ling)，450nm 波(bo)長依(yi)序(xu)測(ce)量(liang)各(ge)孔(kong)的(de)吸光度(du)（OD 值），根(gen)據(ju)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)計算(suan)樣品(pin)濃度(du) 。
人(ren) I 型(xing)膠原蛋白(bai)試(shi)劑(ji)盒保(bao)存(cun)條(tiao)件(jian)為(wei) 2 - 8℃，最佳(jia)溫(wen)度(du) 6 攝(she)氏度(du)，有(you)效(xiao)期(qi)通常為(wei) 6 個(ge)月。使用(yong)過(guo)程(cheng)中有(you)諸多(duo)註(zhu)意事項，如(ru)試(shi)劑(ji)應(ying)按(an)標(biao)簽(qian)說明(ming)書儲存(cun)，使(shi)用(yong)前恢(hui)復(fu)到室(shi)溫；實(shi)驗中不(bu)用(yong)的(de)板條(tiao)應(ying)立(li)即(ji)放(fang)回(hui)包(bao)裝袋(dai)中密(mi)封(feng)保(bao)存(cun)；要(yao)使(shi)用(yong)壹(yi)次性(xing)吸頭以(yi)免(mian)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)；配(pei)置洗滌(di)液(ye)要(yao)用(yong)幹凈的(de)塑料(liao)容(rong)器(qi)，且使(shi)用(yong)前充(chong)分(fen)混勻試(shi)劑(ji)盒裏(li)的(de)各(ge)種(zhong)成份(fen)及(ji)樣品(pin)等 。憑借(jie)其(qi)靈敏性(xing)高、高效(xiao)性(xing)、吸附均(jun)勻良好等(deng)特點(dian)，人(ren) I 型膠(jiao)原蛋白(bai)試(shi)劑(ji)盒為(wei)科研人(ren)員(yuan)研究(jiu)人(ren) I 型膠(jiao)原蛋白(bai)在(zai)生理和病(bing)理過(guo)程(cheng)中的(de)作用(yong)機制(zhi)等(deng)提(ti)供(gong)了(le)有(you)力工具 。
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