產(chan)品系(xi)統PRODUCT CENTER
在發(fa)展(zhan)中求(qiu)生(sheng)存(cun)，不斷完善(shan)，以良(liang)好(hao)信(xin)譽和(he)科(ke)學(xue)的(de)管理(li)促(cu)進(jin)企(qi)業(ye)迅速發展
首頁(ye)-產(chan)品(pin)系(xi)統--合作(zuo)品牌-glycotope
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glycotope
上海乾思生(sheng)物(wu)glycotope品(pin)牌(pai)代(dai)理(li)專(zhuan)業(ye)經(jing)營進(jin)口(kou)胎牛血(xue)清、細(xi)胞(bao)因子、ELISA試劑盒、細(xi)胞(bao)、抗(kang)體(ti)、生(sheng)物(wu)試劑、耗(hao)材、培養基、壹抗(kang)、二(er)抗(kang)、其(qi)產(chan)品吸(xi)附均(jun)勻，吸(xi)附性好(hao)，空(kong)白值(zhi)低(di)，孔(kong)底(di)透明度(du)高(gao)，代(dai)做ELISA實(shi)驗(yan)等(deng)。完善(shan)的(de)庫(ku)存(cun)及(ji)供(gong)應(ying)體系(xi)以及(ji)高效穩定(ding)的(de)純化(hua)技術(shu)，保證(zheng)產品(pin)均(jun)能現(xian)貨(huo)供(gong)應(ying)和(he)產(chan)品(pin)質(zhi)量(liang)的(de)穩定(ding)性。
怎樣(yang)查(zha)到(dao)壹個特定(ding)細(xi)胞(bao)株的(de)相關(guan)知識(shi)和(he)培(pei)養(yang)條件？
ATCC（American Type Culture Collection）收(shou)集了絕(jue)大(da)多數細(xi)胞(bao)的(de)詳細(xi)資料。打(da)開ATCC網頁(ye)的(de)Cells and hybridomas鏈接(jie)，輸入(ru)細(xi)胞(bao)名(ming)稱(cheng)就可以搜索(suo)ATCC的(de)細(xi)胞(bao)數據庫(ku)。數(shu)據(ju)庫(ku)中有(you)每(mei)壹種細(xi)胞(bao)的(de)詳細(xi)描(miao)述(shu)，包(bao)括(kuo)細(xi)胞(bao)的(de)來源(yuan)，培養(yang)和(he)凍(dong)存(cun)條件，以及(ji)相關(guan)文(wen)獻(xian)等(deng)資料。
如(ru)何(he)選用(yong)特殊細(xi)胞(bao)系培養基？
培養(yang)某類(lei)型(xing)細(xi)胞(bao)沒有固(gu)定(ding)的(de)培養(yang)條件。MEM中培(pei)養(yang)的(de)細(xi)胞(bao)，很可能在DMEM或(huo)M199中同樣(yang)容(rong)易(yi)生(sheng)長(chang)。總(zong)之(zhi)，*MEM、DMEM做(zuo)貼壁(bi)細(xi)胞(bao)培養；RPMI1640做懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)培養；各(ge)種目的(de)無血(xue)清培(pei)養(yang)*AIMV培(pei)養(yang)基（SFM）。
測(ce)序(xu)實(shi)驗(yan)流程：
1 收集樣(yang)品(pin)
2 相(xiang)關(guan)試劑 總RNA提(ti)取(qu)試劑TREzol Reagent (RNA提(ti)取(qu)試劑), M-MLV(cDNA逆(ni)轉(zhuan)錄(lu)酶(mei)), RNA 純(chun)化試劑, RealqPCR MasterMix (熒光定(ding)量(liang)PCR預混試劑)。
3 實(shi)驗(yan)儀(yi)器 熒光定(ding)量(liang)PCR儀; PCR儀;低(di)溫(wen)離心(xin)機。
4 總RNA提(ti)取(qu)
5 cDNA合成(cheng) 在0.5ml的(de)離心(xin)管中加入1µl模板(ban)總(zong)RNA(1µg/µl); 2µl隨機引物(wu)(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水(shui)至(zhi)15µl體系(xi)。混勻後(hou)70℃變性RNA 5分(fen)鐘(zhong)，冰上速冷1分(fen)鐘(zhong)，離心(xin)將溶液(ye)收(shou)集至(zhi)管底(di)加入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水(shui)至(zhi)30µl體系(xi)。PCR儀中反應(ying)條件設置(zhi) 37℃延(yan)伸60min，70℃保(bao)溫(wen)15min終止(zhi)反應(ying)。合成(cheng)好的(de)cDNA置於(yu) -20 ℃保存(cun)備用(yong)。
6 引物(wu)設計與thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成(cheng)
7 實(shi)時定(ding)量(liang)PCR 按(an)以下反應(ying)體系(xi)進(jin)行(xing): 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上遊引物(wu)F 1 ul，下遊引物(wu)R 1 ul;cDNA template 2ul。定(ding)量(liang)PCR儀擴(kuo)增(zeng)反應(ying)條件設置(zhi):50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個循環(huan))。
8 PCR產物(wu)溶解曲線(xian)分(fen)析(xi) 將所擴(kuo)增(zeng)的(de)PCR 產物(wu)進(jin)行(xing)溶解曲線(xian)分(fen)析(xi)，單峰溶解曲線(xian)表(biao)示擴(kuo)增(zeng)產物(wu)單壹，無非特異(yi)性擴(kuo)增(zeng)產物(wu)。溶解曲線(xian)生(sheng)成(cheng)的(de)反應(ying)程序為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。
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