上(shang)海(hai)乾思生(sheng)物Goldbio​品牌(pai)代(dai)理專業經(jing)營(ying)進口胎牛血(xue)清(qing)、細胞因子、ELISA試劑盒(he)、細胞、抗(kang)體、生(sheng)物試劑、耗(hao)材、培養(yang)基、壹抗(kang)、二(er)抗(kang)、其(qi)產(chan)品吸(xi)附(fu)均勻(yun)，吸(xi)附(fu)性(xing)好(hao)，空(kong)白(bai)值(zhi)低，孔(kong)底透明度高(gao)，代(dai)做(zuo)ELISA實驗(yan)等(deng)。完善的庫(ku)存(cun)及供應(ying)體系(xi)以及高(gao)效穩(wen)定的純化(hua)技(ji)術，保證產(chan)品(pin)均能(neng)現(xian)貨供(gong)應(ying)和(he)產(chan)品(pin)質(zhi)量的穩(wen)定性。

Goldbio

上(shang)海(hai)乾思生(sheng)物Goldbio品牌(pai)代(dai)理專業經(jing)營(ying)進口胎牛血(xue)清(qing)、細胞因子、ELISA試劑盒(he)、細胞、抗(kang)體、生(sheng)物試劑、耗(hao)材、培養(yang)基、壹抗(kang)、二(er)抗(kang)、其(qi)產(chan)品吸(xi)附(fu)均勻(yun)，吸(xi)附(fu)性(xing)好(hao)，空(kong)白(bai)值(zhi)低，孔(kong)底透明度高(gao)，代(dai)做(zuo)ELISA實驗(yan)等(deng)。完善的庫(ku)存(cun)及供應(ying)體系(xi)以及高(gao)效穩(wen)定的純化(hua)技(ji)術，保證產(chan)品(pin)均能(neng)現(xian)貨供(gong)應(ying)和(he)產(chan)品(pin)質(zhi)量的穩(wen)定性。

怎(zen)樣(yang)查(zha)到壹個(ge)特定細胞株的相(xiang)關知識和(he)培養(yang)條(tiao)件？
ATCC（American Type Culture Collection）收集(ji)了絕(jue)大多(duo)數(shu)細胞(bao)的詳(xiang)細資(zi)料。打(da)開ATCC網頁的Cells and hybridomas鏈接，輸入細胞名(ming)稱(cheng)就可(ke)以(yi)搜索ATCC的細(xi)胞數(shu)據庫(ku)。數(shu)據庫(ku)中(zhong)有每(mei)壹種(zhong)細胞(bao)的詳(xiang)細描(miao)述，包(bao)括(kuo)細胞(bao)的來(lai)源，培養(yang)和(he)凍存(cun)條件，以及相關(guan)文(wen)獻等(deng)資(zi)料。
如(ru)何選用特殊細胞系(xi)培養(yang)基？
培養(yang)某(mou)類型細(xi)胞(bao)沒(mei)有固(gu)定的培養(yang)條(tiao)件。MEM中(zhong)培養(yang)的細(xi)胞，很可能(neng)在(zai)DMEM或M199中(zhong)同(tong)樣(yang)容易生(sheng)長。總(zong)之，*MEM、DMEM做貼(tie)壁細(xi)胞培養(yang)；RPMI1640做(zuo)懸浮(fu)細胞(bao)培養(yang)；各(ge)種(zhong)目(mu)的無(wu)血清(qing)培養(yang)*AIMV培養(yang)基（SFM）。

測序實(shi)驗(yan)流程(cheng)：
1 收集(ji)樣(yang)品
2 相(xiang)關試劑 總(zong)RNA提取試(shi)劑TREzol Reagent (RNA提取試(shi)劑), M-MLV(cDNA逆(ni)轉錄酶(mei)), RNA 純化(hua)試(shi)劑, RealqPCR MasterMix (熒(ying)光(guang)定量PCR預(yu)混(hun)試(shi)劑)。
3 實(shi)驗儀器(qi) 熒(ying)光(guang)定量PCR儀; PCR儀;低溫(wen)離心(xin)機(ji)。
4 總(zong)RNA提取
5 cDNA合(he)成 在0.5ml的離心(xin)管(guan)中(zhong)加入1µl模板(ban)總(zong)RNA(1µg/µl); 2µl隨機(ji)引(yin)物(wu)(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水(shui)至15µl體系(xi)。混勻(yun)後70℃變(bian)性RNA 5分鐘，冰(bing)上(shang)速冷1分鐘，離心(xin)將溶液收集(ji)至管(guan)底(di)加入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水(shui)至30µl體系(xi)。PCR儀中(zhong)反(fan)應(ying)條件設置 37℃延(yan)伸(shen)60min，70℃保(bao)溫(wen)15min終(zhong)止反(fan)應(ying)。合(he)成好(hao)的cDNA置於 -20 ℃保存(cun)備用。
6 引(yin)物(wu)設計(ji)與(yu)thermal cycler protocol thermal cycler protocol合(he)成
7 實時定量PCR 按(an)以(yi)下(xia)反(fan)應(ying)體系(xi)進行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上(shang)遊(you)引(yin)物(wu)F 1 ul，下遊(you)引(yin)物(wu)R 1 ul;cDNA template 2ul。定量PCR儀擴增(zeng)反(fan)應(ying)條件設置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個循環(huan))。
8 PCR產物(wu)溶解(jie)曲線分析(xi) 將所(suo)擴(kuo)增的PCR 產(chan)物進行溶解(jie)曲線分析(xi)，單峰(feng)溶解(jie)曲線表示(shi)擴增產物(wu)單壹，無(wu)非特異性(xing)擴(kuo)增產物(wu)。溶解(jie)曲線生(sheng)成的反(fan)應(ying)程(cheng)序(xu)為(wei): 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註(zhu)意(yi)事項：收集(ji)標本(ben)前必(bi)須(xu)清(qing)楚要(yao)檢測(ce)的成份(fen)是(shi)否(fou)足(zu)夠(gou)穩(wen)定，對(dui)收集(ji)後當天進行檢測(ce)的標(biao)本(ben)，儲存(cun)在4℃備用，如有特殊原因需要(yao)周期收集(ji)標本(ben)，將標(biao)本(ben)及時分裝後放(fang)在(zai)-20℃或-70℃條(tiao)件下保(bao)存(cun)。避免反(fan)復(fu)凍融(rong)，標本(ben)2-8℃可保(bao)存(cun)48小(xiao)時(shi)，-20℃可(ke)保(bao)存(cun)1個月(yue)，-70度可(ke)保存(cun)6個月(yue)，部分標(biao)本(ben)需添加抑肽(tai)酶(mei)。我(wo)公(gong)司是(shi)國內(nei)信譽(yu)雙收的放(fang)心(xin)企業代(dai)理商(shang)，具(ju)有良(liang)好(hao)的市場信譽與(yu)口碑，專業的銷(xiao)售和(he)技(ji)術服務團(tuan)隊，歡(huan)迎廣(guang)大師(shi)生(sheng)、研究機(ji)構等(deng)，洽商。

細(xi)胞出現(xian)問題(ti)，可重發(fa)的情(qing)況有哪(na)些？判定標準(zhun)是(shi)什麽？
　　（1）細(xi)胞運(yun)輸(shu)途中(zhong)遭遇的各(ge)種問(wen)題(ti)，細胞丟失(shi)、破(po)損(sun)、漏液等(deng)，重發(fa)；
　　（2）凍存(cun)的細(xi)胞復(fu)蘇(su)後，絕大多(duo)數(shu)細胞(bao)未(wei)存(cun)活，重發(fa)；
　　（3）存(cun)活的細(xi)胞靜(jing)置24小(xiao)時(shi)後，絕大多(duo)數(shu)細胞(bao)未(wei)存(cun)活，重發(fa)；
　　（4）凍存(cun)的細(xi)胞復(fu)蘇(su)後或存(cun)活的細(xi)胞靜(jing)置4小(xiao)時(shi)後並且未(wei)開(kai)封，出現(xian)汙染(ran)，重發(fa)；
　　（5）視具體情(qing)況而定。
細胞出現(xian)問題(ti)，不(bu)予(yu)以(yi)重發(fa)的情(qing)況有哪(na)些？
　　（1）客(ke)戶(hu)造成細胞汙染(ran)，不(bu)重發(fa)；
　　（2）客(ke)戶(hu)不(bu)正(zheng)確(que)操作致(zhi)細胞狀態不(bu)好(hao)，不(bu)重發(fa)；
　　（3）細(xi)胞狀態不(bu)好(hao)，未(wei)提供細(xi)胞(bao)培養(yang)前3天照(zhao)片的，不(bu)重發(fa)；
　　（4）細(xi)胞培養(yang)時(shi)經(jing)其(qi)它處(chu)理的，不(bu)重發(fa)；
　　（5）細(xi)胞收到(dao)2天內，未(wei)告知，不(bu)重發(fa)；
　　（6）視具體情(qing)況而定。