ASH-S3盤羊(yang)皮膚(fu)細(xi)胞系(xi)
ASH-S3盤(pan)羊(yang)皮膚(fu)細(xi)胞系(xi)作(zuo)為(wei)針(zhen)對盤羊(yang)皮膚(fu)組(zu)織的特異性(xing)細(xi)胞模(mo)型，在(zai)牛科動物皮膚(fu)發(fa)育(yu)機制、ji端環境(jing)適應(ying)及(ji)皮膚(fu)疾病(bing)研究(jiu)領(ling)域具(ju)有重要(yao)價值(zhi)。它的建立為(wei)深(shen)入探(tan)究(jiu)盤(pan)羊(yang)皮膚(fu)細(xi)胞的增殖分(fen)化規(gui)律、環境(jing)適應(ying)機(ji)制(zhi)以(yi)及皮膚(fu)疾病(bing)的發(fa)生路徑等(deng)提供了穩(wen)定(ding)的體外研究(jiu)平(ping)臺，對(dui)盤羊(yang)保護(hu)繁(fan)育和(he)牛科動物皮膚(fu)生(sheng)物(wu)學研究(jiu)意(yi)義重大(da)。
盤羊(yang)作(zuo)為(wei)牛科珍xi野(ye)生(sheng)瀕(bin)危(wei)動物，其(qi)皮膚(fu)具(ju)有適應(ying)高原(yuan)嚴(yan)寒、強紫(zi)外線、晝(zhou)夜溫(wen)差(cha)大(da)等(deng)ji端環境(jing)的獨(du)te結構(gou)與(yu)功(gong)能(neng)，皮膚(fu)細(xi)胞作(zuo)為(wei)皮膚(fu)的基(ji)本(ben)功能(neng)單位，在(zai)體溫調(tiao)節(jie)、抗(kang)寒防曬(shai)、保持(chi)水(shui)分(fen)等(deng)方面(mian)發揮核(he)心作(zuo)用(yong)。盤羊(yang)皮膚(fu)細(xi)胞的角(jiao)質(zhi)形成(cheng)、脂質(zhi)分(fen)泌能(neng)力與(yu)其(qi)他(ta)牛科動物存(cun)在(zai)顯(xian)著差(cha)異，傳統的皮膚(fu)研究(jiu)多(duo)依(yi)賴家畜模型，難(nan)以(yi)反映(ying)高原(yuan)野(ye)生(sheng)牛科動物的特殊性(xing)。原(yuan)代(dai)皮膚(fu)細(xi)胞培(pei)養(yang)存(cun)在(zai)樣(yang)本(ben)獲取(qu)困難(nan)、存(cun)活時間(jian)短(duan)、傳代(dai)受(shou)限等(deng)問題，因(yin)此建立 ASH-S3 盤(pan)羊(yang)皮膚(fu)細(xi)胞系(xi)，成(cheng)為(wei)解(jie)析盤羊(yang)皮膚(fu)適(shi)應(ying)機(ji)制(zhi)、推(tui)動牛科動物皮膚(fu)研究(jiu)的重要(yao)突(tu)破(po)口(kou)。
ASH-S3 盤羊(yang)皮膚(fu)細(xi)胞系(xi)的建立經過了(le)嚴謹規(gui)範的操作(zuo)流程(cheng)。選取健康(kang)的盤(pan)羊(yang)幼體，在(zai)無(wu)菌(jun)條(tiao)件下取(qu)背部(bu)皮膚(fu)組(zu)織，去(qu)除皮下脂(zhi)肪、血管(guan)及(ji)結締組(zu)織。將皮膚(fu)組(zu)zhi剪切(qie)成(cheng) 1mm³ 左右(you)的小(xiao)塊，用(yong)含(han)雙(shuang)抗(kang)的磷酸(suan)鹽緩沖(chong)液反復(fu)沖(chong)洗以(yi)清(qing)除(chu)血液和(he)雜(za)質(zhi)。加(jia)入皮膚(fu)細(xi)胞專(zhuan)用(yong)分散(san)液，在(zai) 37℃條(tiao)件下處理 40-50 分鐘(zhong)，期間(jian)每隔(ge) 10 分鐘(zhong)輕(qing)輕(qing)吹打(da)壹(yi)次使細胞充(chong)分(fen)分散(san)。收(shou)集細(xi)胞懸(xuan)液，經 70μm 細胞濾(lv)網(wang)過濾(lv)後(hou)，1000r/min 離心(xin) 8 分鐘(zhong)，棄(qi)上(shang)清(qing)，用(yong)含(han) 12% 胎牛血清(qing)的 DMEM/F12 培(pei)養(yang)液重懸細胞，接(jie)種於(yu)培養(yang)瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於(yu) 37℃、5% CO₂恒溫(wen)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)進行(xing)原(yuan)代(dai)培養(yang)。培(pei)養(yang)初(chu)期，每 24 小(xiao)時更換壹(yi)次培養(yang)液以(yi)去(qu)除非貼(tie)壁細(xi)胞，待細胞匯(hui)合度達(da) 80% 時(shi)進行(xing)傳代(dai)，目前(qian)該(gai)細(xi)胞系(xi)已穩(wen)定(ding)傳代(dai)至(zhi) 40 代(dai)以(yi)上(shang)，細胞活力保持(chi)在(zai) 85% 以(yi)上(shang)。
該(gai)細(xi)胞系(xi)呈現典(dian)型的成(cheng)纖維樣形態(tai)，細(xi)胞呈長梭形，胞體細長且(qie)均(jun)勻(yun)，排(pai)列(lie)呈平(ping)行狀(zhuang)或網狀(zhuang)，胞質(zhi)豐(feng)富(fu)，細(xi)胞核(he)呈橢(tuo)圓(yuan)形，位於細(xi)胞中(zhong)央，具(ju)有較強的貼(tie)壁生(sheng)長能(neng)力。生長特性研究(jiu)顯(xian)示，ASH-S3 細胞在(zai) DMEM/F12 培(pei)養(yang)液中(zhong)生長狀態最(zui)佳，相(xiang)較(jiao)於(yu)其他培養(yang)液，細(xi)胞增殖速(su)度提高約 22%；最(zui)適培養(yang)溫(wen)度為(wei) 37℃，與(yu)哺乳(ru)動物體溫壹(yi)致；當(dang)胎(tai)牛血清(qing)濃度為(wei) 12% 時(shi)，細胞群(qun)體倍(bei)增時間(jian)最(zui)短(duan)，約(yue)為(wei) 70 小(xiao)時。傳代(dai)至(zhi) 30 代(dai)後，細(xi)胞形態(tai)和(he)增殖速(su)率(lv)無(wu)明顯變(bian)化，核型分(fen)析(xi)表(biao)明其染(ran)色體數目(mu)穩定(ding)（保持(chi)盤(pan)羊(yang)正常的 56 條(tiao)染色體），遺(yi)傳背景(jing)可(ke)靠，仍保留(liu)皮膚(fu)細(xi)胞的特性。
在(zai)功(gong)能(neng)特性方面(mian)，ASH-S3 盤羊(yang)皮膚(fu)細(xi)胞系(xi)展(zhan)現出(chu)豐(feng)富的皮膚(fu)細(xi)胞功(gong)能(neng)。免疫熒(ying)光檢測發(fa)現(xian)，細(xi)胞高表(biao)達(da)成(cheng)纖維細胞特異性(xing)標(biao)誌物如(ru)波(bo)形蛋(dan)白、Ⅰ 型膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白，證(zheng)實其皮膚(fu)成(cheng)纖維細胞屬(shu)性。該(gai)細(xi)胞系(xi)具(ju)有較強的膠(jiao)原(yuan)合成(cheng)能(neng)力，培養(yang)液中(zhong) Ⅰ 型膠(jiao)原(yuan)蛋(dan)白含(han)量(liang)較(jiao)高，且(qie)能(neng)分泌大(da)量(liang)的透(tou)明質(zhi)酸(suan)，這(zhe)對研究(jiu)盤(pan)羊(yang)皮膚(fu)的保濕(shi)和(he)彈(dan)性維(wei)持(chi)機(ji)制(zhi)具有重要(yao)意義(yi)。同(tong)時，ASH-S3 細(xi)胞在(zai)高強度紫(zi)外線（UVB）照射(she)下仍(reng)能(neng)保持(chi) 75% 以(yi)上(shang)的活力，黑(hei)色素合成(cheng)相關基(ji)因(yin)（如(ru) TYR）表(biao)達(da)量(liang)上(shang)調約(yue) 55%，谷(gu)胱gan肽過(guo)氧(yang)化物酶活性顯(xian)著增強，體現出(chu)對高原(yuan)強紫(zi)外線環境(jing)的適(shi)應(ying)能(neng)力，為(wei)研究(jiu)野(ye)生(sheng)牛科動物皮膚(fu)的紫(zi)外線防護(hu)機制(zhi)提(ti)供了理想模(mo)型。此外，該(gai)細(xi)胞系(xi)對(dui)較大(da)的溫(wen)差(cha)刺(ci)激（-5℃至(zhi) 30℃）表(biao)現(xian)出良(liang)好的耐(nai)受(shou)性，熱休克(ke)蛋(dan)白（如(ru) HSP90）和(he)冷(leng)休克(ke)蛋(dan)白（如(ru) HSP70）表(biao)達(da)量(liang)均(jun)能(neng)快速響應(ying)變(bian)化，為(wei)研究(jiu)皮膚(fu)細(xi)胞的溫(wen)差(cha)適應(ying)機(ji)制(zhi)提(ti)供了良(liang)好材料(liao)。
ASH-S3 盤羊(yang)皮膚(fu)細(xi)胞系(xi)在(zai)多(duo)個(ge)研究(jiu)領(ling)域應(ying)用(yong)廣泛。在(zai)皮膚(fu)發(fa)育(yu)研究(jiu)中(zhong)，通過(guo)對該(gai)細(xi)胞系(xi)進行(xing)基(ji)因(yin)編(bian)輯實驗(yan)，揭示了 ELN 基(ji)因(yin)在(zai)盤(pan)羊(yang)皮膚(fu)彈(dan)性(xing)維持(chi)中(zhong)的關鍵調控作(zuo)用(yong)；在(zai)比(bi)較生(sheng)理學研究(jiu)方面(mian)，利用(yong)該(gai)細(xi)胞系(xi)與(yu)其(qi)他(ta)牛科動物皮膚(fu)細(xi)胞系(xi)的對(dui)比分析，闡(chan)明了高原(yuan)野(ye)生(sheng)牛科動物皮膚(fu)適(shi)應(ying)ji端環境(jing)的分(fen)子機制；在(zai)保護(hu)生物(wu)學研究(jiu)中(zhong)，建立了(le)基(ji)於(yu)該(gai)細(xi)胞系(xi)的多(duo)環境(jing)脅迫(po)模型，為(wei)盤(pan)羊(yang)棲(qi)息地(di)保護(hu)策略制定(ding)提(ti)供了理論(lun)依(yi)據(ju)。
作(zuo)為(wei)穩(wen)定(ding)可(ke)靠的盤(pan)羊(yang)皮膚(fu)細(xi)胞模(mo)型，ASH-S3 不(bu)僅(jin)填(tian)bu了(le)牛科高原(yuan)野(ye)生(sheng)動物皮膚(fu)細(xi)胞長期體外培養(yang)的空(kong)白，更(geng)為(wei)盤(pan)羊(yang)保護(hu)和(he)牛科動物ji端環境(jing)適應(ying)機(ji)制(zhi)研究(jiu)提(ti)供了重要(yao)工具，推動了瀕(bin)危(wei)野(ye)生(sheng)動物繁(fan)育技(ji)術(shu)的發(fa)展和(he)牛科動物比(bi)較(jiao)生理學研究(jiu)的深(shen)入，對(dui)提(ti)升(sheng)野(ye)生(sheng)動物保護(hu)水平(ping)和(he)學術(shu)研究(jiu)價(jia)值(zhi)具有重要(yao)意義(yi)。
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