DG-K1山羊(yang)腎細胞系
DG-K1山羊(yang)腎細胞系作為針(zhen)對(dui)山羊(yang)腎臟組織(zhi)的(de)特(te)異性細胞模(mo)型(xing)，在反(fan)芻(chu)動(dong)物(wu)腎臟發育(yu)機制(zhi)、腎功能調(tiao)控及腎臟疾病(bing)研究領(ling)域(yu)具有重(zhong)要價值。它(ta)的(de)建(jian)立(li)為深(shen)入(ru)探究山羊(yang)腎臟細胞的(de)生(sheng)理功能(neng)、腎臟內外(wai)環(huan)境平(ping)衡(heng)調(tiao)節機制(zhi)以及(ji)病(bing)原體(ti)感(gan)染路(lu)徑等(deng)提(ti)供(gong)了(le)穩(wen)定(ding)的(de)體(ti)外(wai)研究平(ping)臺(tai)，對(dui)山羊(yang)養(yang)殖(zhi)業(ye)的(de)健康(kang)發(fa)展(zhan)意義重(zhong)大。
山羊(yang)作為重(zhong)要的(de)反(fan)芻(chu)動(dong)物(wu)，在畜(chu)牧業(ye)中(zhong)占(zhan)據重(zhong)要地(di)位(wei)，腎臟作為其重要的(de)排(pai)泄(xie)和(he)代謝器官，對(dui)維(wei)持機體(ti)水(shui)鹽(yan)平衡(heng)、排泄(xie)代謝廢(fei)物(wu)等(deng)起(qi)著(zhe)關鍵作用。腎臟細胞的(de)正(zheng)常(chang)功(gong)能(neng)是(shi)保(bao)證(zheng)腎臟發揮(hui)生(sheng)理作用的(de)基(ji)礎，在(zai)養(yang)殖(zhi)過(guo)程中(zhong)，山羊(yang)的(de)腎臟易受(shou)病(bing)原體(ti)感(gan)染、飼料中(zhong)有(you)害物(wu)質(zhi)積累(lei)、環境變(bian)化等(deng)因(yin)素影響，引(yin)發(fa)腎炎(yan)、腎結(jie)石(shi)等(deng)疾(ji)病(bing)，導致(zhi)山羊(yang)生(sheng)長遲(chi)緩、生(sheng)產性能下(xia)降(jiang)，給(gei)養(yang)殖(zhi)產(chan)業(ye)帶(dai)來損(sun)失(shi)。因(yin)此(ci)，建(jian)立(li) DG-K1 山羊(yang)腎細胞系，對(dui)於(yu)揭(jie)示腎臟生理機制(zhi)、研發腎臟疾病(bing)防(fang)控技術(shu)具(ju)有重要的(de)理論和(he)實(shi)踐(jian)意義。
DG-K1 山羊(yang)腎細胞系的(de)建(jian)立(li)經過了(le)嚴謹(jin)規(gui)範的(de)操作流(liu)程。選取健康(kang)的(de)幼(you)齡山羊(yang)，經嚴格(ge)的(de)無(wu)菌處(chu)理後，在超(chao)凈工(gong)作臺中(zhong)小(xiao)心解(jie)剖(pou)分(fen)離出腎臟組織(zhi)，去除(chu)腎被膜(mo)及(ji)周(zhou)圍(wei)結(jie)締(di)組織(zhi)。將腎臟組zhi剪(jian)碎成 1mm³ 左右(you)的(de)小(xiao)塊，用含(han)雙抗(kang)（氨(an)基(ji)糖苷(gan)類(lei)與 β- 內酰(xian)胺類抗(kang)生(sheng)素）的(de)磷酸鹽(yan)緩沖(chong)液反(fan)復沖(chong)洗，以清(qing)除(chu)血細(xi)胞(bao)和(he)雜質(zhi)。隨後加入(ru)細(xi)胞分(fen)散液（含(han)酶解(jie)成(cheng)分(fen)），在 37℃條件下(xia)處(chu)理 40-50 分(fen)鐘，使(shi)細胞(bao)分(fen)散。收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液，經 70μm 細胞(bao)濾網(wang)過(guo)濾後，1000r/min 離心(xin) 5 分(fen)鐘，棄(qi)上清(qing)，用(yong)含(han) 10% 胎牛血清(qing)的(de) DMEM 培養(yang)液重懸(xuan)細胞(bao)，接種(zhong)於培養(yang)瓶中(zhong)，置於 37℃、5% CO₂恒(heng)溫(wen)培養(yang)箱(xiang)中(zhong)進(jin)行(xing)原(yuan)代培養(yang)。培養(yang)初(chu)期，每 2-3 天(tian)更換(huan)壹(yi)半(ban)培養(yang)液，待(dai)細胞匯(hui)合(he)度(du)達(da)到(dao) 70%-80% 時(shi)進行(xing)傳代，目(mu)前(qian)該細(xi)胞系已(yi)穩(wen)定(ding)傳代至 50 代以上，細(xi)胞(bao)活(huo)力保(bao)持在 85% 以(yi)上。
該細(xi)胞系呈現(xian)典(dian)型(xing)的(de)上皮(pi)樣(yang)細胞(bao)形(xing)態，細(xi)胞(bao)呈多邊(bian)形(xing)，排列(lie)緊(jin)密(mi)，胞(bao)質(zhi)豐富(fu)，細(xi)胞核清(qing)晰，具(ju)有(you)較強(qiang)的(de)貼壁(bi)生(sheng)長能(neng)力(li)。生(sheng)長(chang)特(te)性研究顯(xian)示，DG-K1 細胞在(zai) DMEM 培養(yang)液中(zhong)生(sheng)長(chang)狀(zhuang)態(tai)最佳，相(xiang)較於其他培養(yang)基(ji)，細胞增殖(zhi)速度(du)提(ti)高(gao)約(yue) 20%；最適(shi)培養(yang)溫(wen)度(du)為 37℃，與山羊(yang)的(de)體(ti)溫(wen)相符(fu)；當(dang)胎牛血清(qing)濃(nong)度(du)為 10% 時(shi)，細胞群(qun)體(ti)倍(bei)增時(shi)間最短，約(yue)為 48 小(xiao)時(shi)。傳代至 40 代後，細胞(bao)形(xing)態和(he)增殖(zhi)速率無(wu)明(ming)顯變(bian)化，核型(xing)分(fen)析表明(ming)其染色(se)體(ti)數(shu)目(mu)穩(wen)定(ding)，遺傳穩(wen)定(ding)性良(liang)好。
在(zai)功(gong)能(neng)特(te)性方(fang)面，DG-K1 山羊(yang)腎細胞系展(zhan)現(xian)出豐富(fu)的(de)腎臟細胞功(gong)能(neng)。免疫熒(ying)光檢測(ce)發現(xian)，細胞(bao)表(biao)達(da)腎臟上皮(pi)細(xi)胞(bao)特(te)異性標誌物(wu)如(ru)細(xi)胞(bao)角蛋白(bai) 18、鈉(na)鉀 ATP 酶，進(jin)壹步(bu)證(zheng)實(shi)了其腎臟細胞屬性(xing)。該細(xi)胞系具有(you)壹定(ding)的(de)物(wu)質(zhi)轉運(yun)功(gong)能，能模(mo)擬(ni)腎臟對(dui)水(shui)、電解(jie)質(zhi)等(deng)物(wu)質(zhi)的(de)重(zhong)吸收過(guo)程，這對(dui)研究腎臟的(de)排(pai)泄(xie)和(he)代謝機制(zhi)具有(you)重要意義。同(tong)時(shi)，DG-K1 細胞在(zai)受(shou)到(dao)病(bing)原體(ti)刺(ci)激(ji)時(shi)，會表現(xian)出免疫應(ying)答反(fan)應，如(ru)炎(yan)癥(zheng)因子分(fen)泌增加等(deng)，模(mo)擬(ni)腎臟的(de)免疫防(fang)禦過(guo)程，為研究腎臟的(de)抗(kang)感(gan)染機制(zhi)提供(gong)了(le)理想模(mo)型(xing)。此(ci)外(wai)，該細(xi)胞系對(dui)山羊(yang)常(chang)見(jian)的(de)腎臟病(bing)原菌(jun)如(ru)大腸桿菌(jun)、沙門氏(shi)菌(jun)等(deng)表(biao)現(xian)出敏感(gan)性，感(gan)染後會出現(xian)細胞(bao)形(xing)態改(gai)變(bian)、增殖(zhi)受(shou)抑等(deng)病(bing)變(bian)特(te)征(zheng)，為研究病(bing)原菌(jun)對(dui)腎臟的(de)侵染機制(zhi)提供(gong)了(le)良(liang)好材(cai)料(liao)。
DG-K1 山羊(yang)腎細胞系在(zai)多個研究領(ling)域(yu)應用廣(guang)泛(fan)。在腎臟功能調(tiao)控研究中(zhong)，通過(guo)檢測(ce)細胞(bao)在不同激(ji)素(su)處(chu)理下(xia)的(de)功(gong)能變(bian)化，揭(jie)示了抗(kang)利尿激(ji)素(su)對(dui)腎臟水重吸(xi)收(shou)的(de)調(tiao)控途徑；在環(huan)境毒(du)理學(xue)研究中(zhong)，利用該細(xi)胞系評估(gu)了飼料中(zhong)重(zhong)金(jin)屬、黴菌毒(du)素等(deng)有(you)害物(wu)質(zhi)對(dui)腎臟細胞的(de)毒(du)性影響，為山羊(yang)養(yang)殖(zhi)的(de)飼料安全(quan)提(ti)供(gong)了(le)依(yi)據；在(zai)藥(yao)物(wu)篩選(xuan)方面，建(jian)立(li)了(le)基(ji)於細胞(bao)活(huo)性和(he)功能(neng)的(de)篩(shai)選模(mo)型(xing)，已(yi)篩(shai)選出多種(zhong)具有(you)保(bao)護腎臟功能的(de)化合(he)物(wu)。
作為穩(wen)定(ding)可靠(kao)的(de)山羊(yang)腎細胞模(mo)型(xing)，DG-K1 不僅填bu了(le)山羊(yang)腎臟細胞研究的(de)空(kong)白，更為反(fan)芻(chu)動(dong)物(wu)腎臟生物(wu)學(xue)研究提(ti)供(gong)了(le)重(zhong)要工(gong)具，推(tui)動(dong)了山羊(yang)腎臟疾病(bing)防(fang)控技術(shu)的(de)研發，對(dui)保(bao)障(zhang)山羊(yang)養(yang)殖(zhi)產(chan)業(ye)的(de)可(ke)持續發(fa)展(zhan)具(ju)有(you)重(zhong)要意義。
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