Hep-2人(ren)喉癌(ai)上(shang)皮(pi)細(xi)胞系
Hep-2人(ren)喉癌(ai)上(shang)皮(pi)細(xi)胞系是(shi)研究喉(hou)鱗狀細(xi)胞癌的(de)經典(dian)模(mo)型(xing)，因具備典(dian)型(xing)的上(shang)皮(pi)源性惡(e)性表(biao)型(xing)及(ji)穩定的增殖(zhi)特(te)性，在喉癌(ai)發病(bing)機(ji)制(zhi)、侵襲(xi)轉移及(ji)藥物(wu)敏感(gan)性研究中(zhong)應用廣(guang)泛(fan)，為解(jie)析喉癌從(cong)上(shang)皮(pi)異(yi)型(xing)增(zeng)生到惡性浸(jin)潤(run)的(de)演(yan)化(hua)過(guo)程(cheng)提供(gong)了(le)可(ke)靠實(shi)驗(yan)工具，是(shi)喉(hou)癌(ai)基(ji)礎研究與(yu)臨床轉化(hua)的重(zhong)要橋(qiao)梁(liang)。
來源與(yu)背(bei)景：該(gai)細(xi)胞系於(yu) 1954 年從(cong)壹名(ming) 56 歲男性喉(hou)鱗(lin)狀(zhuang)細(xi)胞癌患(huan)者的(de)原(yuan)發(fa)腫(zhong)瘤(liu)組織(zhi)中分(fen)離(li)建立(li)，是(shi)首ge被(bei)穩定傳代的(de)喉(hou)癌上(shang)皮(pi)細(xi)胞系。與(yu)轉移竈來源的(de)腫(zhong)瘤(liu)細(xi)胞系不(bu)同，其(qi)保留(liu)了(le)原發喉(hou)癌的(de)上(shang)皮(pi)組(zu)織(zhi)學特(te)征(zheng)，尤其(qi)適合(he)研究喉(hou)癌發生的早(zao)期(qi)分(fen)子(zi)事件(jian)。作為喉癌(ai)研究中(zhong)使用zui廣(guang)泛(fan)的(de)模型之壹，其(qi)長期(qi)傳代後仍保(bao)持(chi)穩定的遺(yi)傳學(xue)特(te)征(zheng)，為不(bu)同實(shi)驗(yan)室(shi)的(de)結果比對提供(gong)了(le)標準化(hua)平臺(tai)，彌(mi)補了(le)原代喉(hou)癌(ai)組織(zhi)樣本稀(xi)缺且體外存活時(shi)間短(duan)的缺陷，至(zhi)今仍(reng)是(shi)喉(hou)癌(ai)基(ji)礎研究的(de)標gan細(xi)胞系。
細(xi)胞特(te)性：形態上(shang)呈(cheng)現(xian)典(dian)型(xing)的上(shang)皮(pi)樣(yang)特(te)征(zheng)，多角(jiao)形或(huo)不(bu)規則形貼(tie)壁(bi)生長，細(xi)胞排列呈鋪(pu)路石(shi)樣，邊(bian)界(jie)清晰(xi)，細(xi)胞質(zhi)豐(feng)富(fu)，可(ke)見角(jiao)質(zhi)顆粒（鱗狀(zhuang)上(shang)皮(pi)分(fen)化(hua)標誌(zhi)），細(xi)胞核大(da)而(er)圓(yuan)，核仁明(ming)顯，核(he)質(zhi)比達(da) 1:1.5，顯著高於正常(chang)喉(hou)上(shang)皮(pi)細(xi)胞。核心特(te)性體(ti)現(xian)為強增(zeng)殖(zhi)活性，體(ti)外培養(yang)時(shi)倍增(zeng)時(shi)間約 48-60 小時(shi)，克(ke)隆(long)形成(cheng)率達(da) 70%，顯著高於低(di)惡性度的頭(tou)頸部腫瘤(liu)細(xi)胞系，裸(luo)鼠皮(pi)下(xia)接(jie)種(zhong)後 3-4 周(zhou)即(ji)可(ke)形成(cheng)實(shi)體(ti)瘤(liu)，成(cheng)瘤(liu)率達(da) 100%，模擬(ni)臨床喉癌的快速(su)生長特(te)性；鱗(lin)狀(zhuang)上(shang)皮(pi)標(biao)誌(zhi)物(wu)表達(da)，高表達(da)細(xi)胞角(jiao)蛋(dan)白 5/6（CK5/6）、CK14，部分(fen)表(biao)達(da) p63，符(fu)合(he)喉(hou)鱗(lin)狀上(shang)皮(pi)的(de)分(fen)化(hua)特(te)征(zheng)，而(er)正常(chang)喉(hou)上(shang)皮(pi)細(xi)胞高表(biao)達(da)的 CK13 表達(da)顯著下調，反映(ying)其(qi)惡性轉化(hua)後的表(biao)型(xing)改(gai)變(bian)；中(zhong)度侵襲(xi)能力(li)，體(ti)外 Transwell 實(shi)驗(yan)中(zhong)穿(chuan)透(tou)基(ji)質(zhi)膜的細(xi)胞數是(shi)正常(chang)喉(hou)上(shang)皮(pi)細(xi)胞的 8-10 倍，能分(fen)泌(mi)基(ji)質(zhi)金屬蛋(dan)白酶(mei)（MMP-1、MMP-3），可(ke)降解(jie)喉黏(nian)膜基(ji)底膜成(cheng)分(fen)，模(mo)擬(ni)喉(hou)癌局部浸潤(run)過(guo)程(cheng)。傳(chuan)代時(shi)采用(yong) 0.25% 胰dan白酶(mei) - EDTA 消(xiao)化(hua)，因細(xi)胞連接(jie)緊(jin)密(mi)，需消(xiao)化(hua) 3-5 分(fen)鐘(zhong)，傳代比(bi)例(li) 1:3-1:5，連續(xu)傳(chuan)代 50 次(ci)後仍保(bao)持(chi)上(shang)皮(pi)形態及(ji)增(zeng)殖(zhi)活性，但(dan)角(jiao)質(zhi)化(hua)特(te)征(zheng)可(ke)能略(lve)有(you)減(jian)弱。
培養(yang)條(tiao)件(jian)：適宜(yi)采用(yong)含(han) 10% 胎(tai)牛血清的(de) MEM 培養(yang)基(ji)，添加 1% 非(fei)必(bi)需氨(an)基(ji)酸(suan)和 1% 抗菌(jun)混合液(ye)以(yi)維(wei)持(chi)上(shang)皮(pi)細(xi)胞特(te)性。培養(yang)環(huan)境需控(kong)制(zhi)在 37℃、5% CO₂飽(bao)和濕(shi)度，每 2-3 天(tian)更換(huan)壹次培養(yang)基(ji)，細(xi)胞密度維持(chi)在 30%-70% 之間，過(guo)度匯合(he)會導致(zhi)細(xi)胞接(jie)觸抑制，增(zeng)殖(zhi)速(su)率下降 20%-30%。與其(qi)他(ta)上(shang)皮(pi)細(xi)胞系相(xiang)比(bi)，其(qi)對鈣(gai)離(li)子(zi)濃度敏感(gan)，培養(yang)基(ji)中鈣(gai)離子需維持(chi)在 1.8mM，過(guo)低(di)會導致(zhi)細(xi)胞形態變(bian)圓(yuan)，失去上(shang)皮(pi)極(ji)性，傳(chuan)代時(shi)消(xiao)化(hua)後需用(yong)含(han)血(xue)清培養(yang)基(ji)終止(zhi)反應，以保(bao)護細(xi)胞表面(mian)黏附(fu)分(fen)子(zi)，凍存液(ye)推(tui)薦(jian)含(han) 10% DMSO 的胎(tai)牛血清，復(fu)蘇(su)後存活率可(ke)達(da) 80% 以上(shang)，復(fu)蘇(su)後 24 小時(shi)貼壁(bi)率超(chao)過(guo) 90%。
檢(jian)測鑒(jian)定(ding)：經微生物(wu)篩查，無支原體(ti)、細(xi)菌(jun)、真菌(jun)及(ji)常(chang)見(jian)病(bing)毒(du)汙(wu)染，符(fu)合(he)實(shi)驗(yan)細(xi)胞質(zhi)量(liang)標準。免疫(yi)細(xi)胞化(hua)學檢(jian)測顯(xian)示(shi)，CK5/6、p63 呈強陽(yang)性表(biao)達(da)，上(shang)皮(pi)膜抗原(yuan)（EMA）陽(yang)性，波(bo)形蛋(dan)白（vimentin）陰(yin)性，明(ming)確其(qi)上(shang)皮(pi)源性特(te)征(zheng)。染色體(ti)核型(xing)分(fen)析呈現(xian)亞(ya)四倍體(ti)核型(xing)，存在 7 號、11 號(hao)染色體(ti)三體及(ji) 13 號(hao)染色體(ti)缺失等(deng)異常(chang)，與(yu) 60% 的(de)喉(hou)鱗(lin)狀細(xi)胞癌患(huan)者的(de)遺(yi)傳學(xue)改(gai)變(bian)吻(wen)合(he)。功能驗(yan)證實(shi)驗(yan)中(zhong)，經(jing)表(biao)皮生長因子（EGF）處(chu)理(li)後，細(xi)胞增殖(zhi)速(su)率提升 40%，EGFR 磷酸(suan)化(hua)水(shui)平升高(gao)，證(zheng)實(shi)其(qi)對生長因子信(xin)號的(de)依(yi)賴性，與(yu)臨床喉癌中 EGFR 高表(biao)達(da)的特(te)征(zheng)壹致。
應用領(ling)域：在發病(bing)機(ji)制(zhi)研究中(zhong)，該(gai)細(xi)胞系被(bei)用於(yu)揭(jie)示(shi)喉癌發(fa)生的分(fen)子(zi)機(ji)制(zhi)，研究發(fa)現(xian)其(qi) p53 基(ji)因存在熱(re)點突變(bian)，導致(zhi)細(xi)胞周(zhou)期(qi)檢(jian)查點失控，同時(shi) HPV 陰(yin)性（與(yu)多數喉(hou)癌臨床樣本壹致），排(pai)除病(bing)毒(du)幹(gan)擾(rao)，更(geng)適合(he)研究非(fei)病(bing)毒(du)相(xiang)關喉癌(ai)的發(fa)生機(ji)制(zhi)。在藥物(wu)篩選領(ling)域，其(qi)對shun鉑(bo)等(deng)喉癌(ai)常(chang)用(yong)治(zhi)療藥物(wu)的敏(min)感(gan)性與(yu)臨床樣本高度相(xiang)關，IC50 值(zhi)約 2.5μM，常(chang)被(bei)用於(yu)評估(gu)新(xin)型hua療藥物(wu)及(ji)靶(ba)向(xiang)藥物(wu)的療效，近(jin)期(qi)研究發(fa)現(xian) EGFR 抑制劑(ji)可(ke)顯著抑制其(qi)增殖(zhi)，聯合(he)放(fang)療具有(you)協同效(xiao)應。在侵襲(xi)機(ji)制(zhi)研究中(zhong)，通過(guo)沈(chen)默 MMP-1 基(ji)因發現(xian)，其(qi)穿(chuan)透(tou)基(ji)底膜的能力(li)下(xia)降 60%，證(zheng)實(shi) MMP-1 在喉癌(ai)浸潤(run)中(zhong)的關鍵(jian)作(zuo)用，為開發(fa)抗侵(qin)襲(xi)治(zhi)療提供(gong)潛(qian)在靶點。
與其(qi)他(ta)頭頸部腫瘤(liu)細(xi)胞系（如(ru) FaDu）的對(dui)比(bi)顯(xian)示(shi)，Hep-2 更特(te)異表(biao)達(da)喉鱗狀上(shang)皮(pi)標(biao)誌(zhi)物(wu)（如 CK14 陽(yang)性率 90% vs 65%），更適合(he)研究喉(hou)癌te有(you)的生物(wu)學行(xing)為。其(qi)穩定的上(shang)皮(pi)表(biao)型(xing)及(ji)明(ming)確的(de)遺(yi)傳學(xue)特(te)征(zheng)，使其(qi)在喉癌(ai)早(zao)期(qi)診(zhen)斷標誌(zhi)物(wu)篩選及(ji)治(zhi)療方(fang)案優化(hua)中具有(you)不(bu)可(ke)替代的(de)價(jia)值(zhi)，為喉癌(ai)的(de)精(jing)準診(zhen)療提供(gong)了(le)從(cong)實(shi)驗(yan)室(shi)到臨床的重要參考。
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