BHK/slam/v倉鼠(shu)腎(shen)細胞(bao)系，成(cheng)纖維(wei)樣，貼(tie)壁(bi)生長，穩定(ding)表(biao)達 SLAM 受體，對多種病(bing)毒敏感(gan)，適用(yong)於(yu)病(bing)毒感(gan)染(ran)機(ji)制(zhi)研究(jiu)、疫苗(miao)開發(fa)及(ji)抗病du藥(yao)物篩選，應用(yong)前景(jing)廣(guang)泛(fan)。

來(lai)源(yuan)與(yu)構(gou)建：該(gai)細胞(bao)系以(yi) BHK-21（幼(you)倉鼠(shu)腎(shen)細胞(bao)）為親(qin)本(ben)，通(tong)過(guo)慢病毒載(zai)體介導(dao)將(jiang)犬源(yuan)或人源(yuan) SLAM 基(ji)因導(dao)入(ru)細胞(bao)基因組(zu)，經(jing) G418 抗性篩(shai)選及(ji)單克隆純(chun)化獲得穩(wen)定(ding)株，“slam/v" 標識其(qi)表(biao)達的 SLAM 受體及(ji)病毒敏感(gan)性特(te)征(zheng)。構(gou)建過(guo)程中(zhong)采(cai)用(yong) EF1α 啟動子(zi)驅(qu)動表(biao)達，結合(he) kozak 序列優(you)化翻(fan)譯起始效率，使(shi) SLAM 受體膜(mo)定(ding)位率達(da) 90% 以(yi)上(shang)，顯(xian)著(zhu)提升病毒結合(he)效率。

形態與(yu)增殖(zhi)：體外培養呈(cheng)典型成(cheng)纖維(wei)樣形態，貼(tie)壁(bi)生長，細胞(bao)呈長梭(suo)形，排列疏松(song)，邊界(jie)清(qing)晰(xi)，核(he)質(zhi)比適中(zhong)，形態與(yu)親(qin)本(ben) BHK-21 細胞(bao)壹致。在(zai) 37℃、5% CO₂條(tiao)件(jian)下，增(zeng)殖(zhi)速度快，傳代(dai)周期(qi)約(yue) 18-24 小(xiao)時，可(ke)適應含 10% 胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing)的 DMEM 培養基(ji)，傳代(dai) 50 次以(yi)上(shang)仍(reng)能(neng)維(wei)持 SLAM 高(gao)表(biao)達（表(biao)達量(liang)為親(qin)本(ben)細胞(bao)的 30-40 倍(bei)），病(bing)毒敏感(gan)性無明顯(xian)衰(shuai)減(jian)，優(you)於(yu)瞬(shun)時轉(zhuan)染(ran)系(xi)統。

表(biao)達特(te)征(zheng)：SLAM 為 I 型跨(kua)膜(mo)糖(tang)蛋白，膜(mo)表(biao)達量(liang)達（2.5-3.0）×10⁵分(fen)子 / 細(xi)胞(bao)（流式(shi)細(xi)胞(bao)術(shu)檢測），對副黏病(bing)毒科(ke)病毒（如(ru)犬(quan)瘟(wen)熱(re)病毒、麻(ma)疹(zhen)病毒）的親(qin)和(he)力高(gao)（解(jie)離常(chang)數 Kd≈3×10⁻⁹ M）。其(qi)胞(bao)外域可(ke)特(te)異性結合(he)病毒血(xue)凝素(su)蛋白，介導(dao)病(bing)毒包膜(mo)與(yu)細胞(bao)膜(mo)融(rong)合(he)，顯著提(ti)升(sheng)病毒入(ru)侵(qin)效率（感(gan)染(ran)滴度(du)比(bi)親(qin)本(ben) BHK-21 細胞(bao)高(gao) 10-100 倍(bei)），且(qie)支(zhi)持病毒完(wan)整復制(zhi)周期(qi)（從(cong)吸附到(dao)釋(shi)放約 48-72 小(xiao)時）。

優(you)勢：SLAM 受體表(biao)達穩(wen)定(ding)，長期(qi)傳代(dai)後病(bing)毒敏感(gan)性波(bo)動＜10%，實驗重(zhong)復性優(you)於(yu)原(yuan)代(dai)細(xi)胞(bao)；增殖(zhi)速度快於(yu) CHO 等(deng)細胞(bao)系，病毒培養周期(qi)縮短 30%-40%，適合(he)高(gao)通(tong)量(liang)實驗；兼(jian)容(rong)貼(tie)壁(bi)與(yu)懸(xuan)浮培養，可(ke)實現從(cong)實驗室(shi)研究(jiu)到(dao)工(gong)業化生產的無縫銜(xian)接；對多種 SLAM 依(yi)賴(lai)型病(bing)毒敏感(gan)，適用(yong)範圍覆蓋犬(quan)瘟熱(re)、麻(ma)疹(zhen)、牛(niu)瘟等(deng)重要(yao)病(bing)毒，應(ying)用(yong)價值(zhi)廣(guang)泛(fan)。

局限(xian)性(xing)：SLAM 表(biao)達可(ke)能(neng)受培養條(tiao)件(jian)影響(xiang)（如(ru)血(xue)清(qing)濃(nong)度），需(xu)嚴格控制(zhi)培養參數；作(zuo)為倉鼠(shu)細胞(bao)，與(yu)人源(yuan) SLAM 存在物種差(cha)異(yi)，部(bu)分(fen)人病(bing)毒研究(jiu)需(xu)結合(he)人源細(xi)胞(bao)驗證；對非(fei) SLAM 依(yi)賴(lai)型病(bing)毒敏感(gan)性低(di)，應用(yong)範圍存(cun)在(zai)局限(xian)。

培養條(tiao)件(jian)：常規使(shi)用(yong)含 10% 胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing)的 DMEM 培養基(ji)，添(tian)加(jia) 400μg/mL G418 維持抗性篩(shai)選，37℃、5% CO₂培養箱中(zhong)生長良(liang)好。傳代(dai)時控制(zhi)融(rong)合(he)度在 60%-70%，采(cai)用(yong)溫和(he)方(fang)法分(fen)離細(xi)胞(bao)，避免過(guo)度處理影響(xiang)受體表(biao)達。懸(xuan)浮培養可(ke)采(cai)用(yong)無血(xue)清(qing)培養基(ji)逐步馴化，最終細胞(bao)密度可(ke)達(da) 5×10⁶個 /mL，病(bing)毒產(chan)量(liang)無明顯(xian)下(xia)降。

質(zhi)控與(yu)安(an)全：定(ding)期(qi)通(tong)過(guo)流式(shi)細(xi)胞(bao)術(shu)檢測 SLAM 膜(mo)表(biao)達量(liang)，病毒感(gan)染(ran)實驗驗(yan)證敏感(gan)性；STR 鑒(jian)定(ding)確(que)保(bao)細(xi)胞(bao)純度，支(zhi)原(yuan)體檢測需(xu)為陰性。凍存使用(yong)含 10% DMSO 的wan全培養基(ji)，液(ye)氮(dan)保存(cun)可(ke)維(wei)持活(huo)性 5 年(nian)以(yi)上(shang)，復蘇後傳代(dai) 2 次待(dai)狀(zhuang)態穩(wen)定(ding)後再(zai)用(yong)於(yu)實驗，涉及(ji)高(gao)致病(bing)性(xing)病(bing)毒時需(xu)在相應生物安(an)全實驗室(shi)操(cao)作(zuo)。