LS 174T人結直(zhi)腸腺(xian)癌(ai)細(xi)胞系(xi)
LS 174T人結直(zhi)腸腺(xian)癌(ai)細(xi)胞系(xi)源自男性結腸腺(xian)癌(ai)患(huan)者(zhe)的腫(zhong)瘤(liu)組(zu)織，於(yu) 20 世(shi)紀 70 年(nian)代初(chu)被成(cheng)功(gong)建立(li)。在顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)觀察，其(qi)細(xi)胞呈現(xian)典(dian)型的上(shang)皮樣形(xing)態(tai)，細(xi)胞相(xiang)互(hu)連(lian)接(jie)，形成(cheng)緊密(mi)的單層(ceng)或(huo)簇(cu)狀結構，細(xi)胞大(da)小和形態存(cun)在壹(yi)定差異(yi)，這種(zhong)異(yi)質(zhi)性與(yu)人體結直(zhi)腸腺(xian)癌(ai)腫(zhong)瘤(liu)組(zu)織的細胞特(te)征高度(du)相(xiang)似(si)。其(qi)核型為超(chao)二倍(bei)體，存(cun)在多(duo)個(ge)染色體畸變(bian)，同(tong)時(shi)攜帶(dai)多種(zhong)關鍵(jian)基(ji)因(yin)突變(bian)，例(li)如 KRAS 基因突變(bian)、p53 通路相(xiang)關基因(yin)缺(que)失(shi)等(deng)，這些(xie)遺傳(chuan)特(te)征不(bu)僅賦予細胞惡(e)性增(zeng)殖的能力(li)，也(ye)為(wei)腫(zhong)瘤(liu)研(yan)究(jiu)提供(gong)了豐(feng)富(fu)的靶(ba)點。
HCT - 15 細(xi)胞的培(pei)養需特(te)定且精(jing)細(xi)的條件(jian)。常用(yong) RPMI - 1640 培(pei)養基，添(tian)加 10% 優質(zhi)胎牛血(xue)清(qing)和 1% 雙(shuang)抗，以(yi)滿足(zu)細(xi)胞生(sheng)長所(suo)需營(ying)養，維持無菌環境(jing)。其(qi)中(zhong)，胎牛血(xue)清(qing)富(fu)含(han)細(xi)胞生(sheng)長必(bi)需的生(sheng)長因子、激(ji)素、結合(he)蛋白等(deng)物(wu)質(zhi)，能(neng)有(you)效(xiao)促進(jin)細胞貼壁(bi)和增(zeng)殖；雙(shuang)抗則(ze)防止細菌和真(zhen)菌汙染，保(bao)障(zhang)細(xi)胞健(jian)康生(sheng)長。培(pei)養環境(jing)為 37℃、5% 二氧(yang)化碳(tan)與(yu) 95% 空氣的混(hun)合(he)氣體，濕(shi)度(du)保(bao)持(chi)在 70% - 80%。37℃模擬人體體溫(wen)，5% 二氧(yang)化碳(tan)可維持培(pei)養基的 pH 穩(wen)定，適宜的濕(shi)度(du)避(bi)免培(pei)養基過(guo)快(kuai)蒸發。
細(xi)胞貼壁(bi)生(sheng)長，當匯(hui)合(he)度(du)達(da) 80% - 90% 時(shi)需傳(chuan)代(dai)。傳代(dai)使用 0.25％（w/v）胰(yi)dan白酶(mei) - 0.53mM EDTA 消化，由於(yu)細(xi)胞貼壁(bi)較緊(jin)，消(xiao)化時(shi)間相(xiang)對(dui)較(jiao)長(chang)，約(yue) 1 - 2 分鐘(zhong)。在消(xiao)化過(guo)程(cheng)中，需在顯(xian)微(wei)鏡(jing)下(xia)密(mi)切(qie)觀察細胞形(xing)態變(bian)化，當細(xi)胞變(bian)圓、間(jian)隙(xi)增大時(shi)，及時(shi)終止消化，避(bi)免過(guo)度(du)消(xiao)化損傷(shang)細胞。若(ruo)出現(xian)消化困難的情(qing)況，可(ke)適當(dang)提高胰(yi)dan白酶(mei)濃度(du)或(huo)延長消(xiao)化時(shi)間，但需格(ge)外(wai)註意(yi)觀察。消化後，需迅(xun)速(su)加入含(han)血(xue)清(qing)的培(pei)養基中(zhong)和(he)胰(yi)dan白酶(mei)活性，防止殘留(liu)胰(yi)dan白酶(mei)繼(ji)續(xu)作用。傳代比(bi)例(li)壹(yi)般(ban)為(wei) 1:2 - 1:4 ，傳(chuan)代(dai)後(hou)需定期更換培(pei)養基，保(bao)證(zheng)細胞有(you)充(chong)足(zu)的營(ying)養供應(ying)。凍(dong)存(cun)時(shi)，凍存(cun)液(ye)采用(yong) 90% 胎牛血(xue)清(qing)加 10% 二甲基(ji)亞碸(feng)，按(an) 4℃ 10 分鐘(zhong)、-20℃ 2 小(xiao)時(shi)、-80℃過(guo)夜(ye)後(hou)轉(zhuan)至(zhi)液(ye)氮(dan)的程(cheng)序(xu)保(bao)存(cun)，每(mei)壹(yi)步降(jiang)溫(wen)都(dou)能減(jian)少(shao)細胞內(nei)冰晶形成(cheng)，保(bao)護(hu)細(xi)胞活(huo)性。值(zhi)得(de)註(zhu)意的是，復蘇細胞時(shi)，需將(jiang)凍存(cun)管(guan)迅(xun)速(su)放(fang)入 37℃水浴(yu)中(zhong)快(kuai)速(su)解凍，以(yi)減(jian)少(shao)低溫對(dui)細(xi)胞的損傷(shang)。若復蘇後細(xi)胞活(huo)力(li)不佳，可嘗試降低(di)傳代(dai)密(mi)度(du)，給(gei)予細胞更寬松(song)的生(sheng)長環境(jing)。
在科(ke)學(xue)研(yan)究(jiu)中(zhong)，HCT - 15 細(xi)胞系(xi)應(ying)用(yong)廣(guang)泛。利(li)用該(gai)細(xi)胞系(xi)構(gou)建(jian)的耐藥(yao)模型，如 HCT - 15/5FU 細胞系(xi)，是研(yan)究(jiu)氟(fu)尿*啶耐藥(yao)機(ji)制(zhi)的重要工具(ju)。研究(jiu)發(fa)現(xian)，HCT - 15/5FU 細胞的耐藥(yao)涉及胸苷酸(suan)合(he)成(cheng)酶(mei)上(shang)調、二氫(qing)嘧啶脫氫(qing)酶(mei)活性增(zeng)強、藥物(wu)外(wai)排(pai)與(yu)解毒系(xi)統激活等多(duo)個(ge)方面。通過(guo)對(dui) HCT - 15 細(xi)胞的研究(jiu)，不(bu)僅(jin)能深(shen)入探索(suo)腫(zhong)瘤(liu)發(fa)生(sheng)發展機(ji)制(zhi)，還能(neng)進(jin)行抗癌藥物(wu)篩(shai)選、評(ping)估(gu)藥物(wu)療(liao)效(xiao)。例(li)如，在前(qian)沿研究(jiu)中(zhong)，科(ke)研團(tuan)隊(dui)將(jiang)新型免疫檢查點抑制劑(ji)與(yu)傳統hua療(liao)藥(yao)物(wu)聯合(he)作用於(yu) HCT - 15 細(xi)胞，觀察到兩(liang)者(zhe)協同(tong)作用顯著增(zeng)強了對(dui)癌(ai)細(xi)胞的殺傷(shang)效(xiao)果(guo)，為結直(zhi)腸癌(ai)的免疫 - hua療(liao)聯合(he)治療(liao)策(ce)略提供(gong)了理(li)論依據(ju)。還有(you)研(yan)究(jiu)團(tuan)隊(dui)運(yun)用 HCT - 15 細(xi)胞測試新型納(na)米靶(ba)向藥(yao)物(wu)，該(gai)藥(yao)物(wu)能(neng)夠(gou)精(jing)準(zhun)識(shi)別(bie)並作用於(yu)癌(ai)細胞表(biao)面的特(te)定受體，相(xiang)比(bi)傳(chuan)統藥物(wu)，其(qi)對(dui) HCT - 15 細(xi)胞的抑制效(xiao)果(guo)更好且副(fu)作用更小。此(ci)外(wai)，通過(guo)基(ji)因(yin)編(bian)輯(ji)技術對(dui) HCT - 15 細(xi)胞的特(te)定基因(yin)進(jin)行敲除或(huo)過(guo)表(biao)達(da)，可(ke)探(tan)究(jiu)基(ji)因(yin)在腫(zhong)瘤(liu)發(fa)展(zhan)中(zhong)的功(gong)能，從(cong)而發現(xian)新的治療(liao)靶(ba)點，為(wei)結直(zhi)腸癌(ai)的臨床(chuang)治(zhi)療(liao)提供(gong)更多潛在方向。
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