ITH48永生化(hua)滇(dian)西亞種(zhong)樹鼩(鼩)肝(gan)細(xi)胞(bao)系
ITH48永生化(hua)滇(dian)西亞種(zhong)樹鼩(鼩)肝(gan)細(xi)胞(bao)系在(zai)樹(shu)鼩(鼩)肝(gan)臟(zang)生物(wu)學研(yan)究(jiu)領(ling)域有(you)著(zhe)重要地位，為(wei)深(shen)入(ru)探(tan)究(jiu)滇西(xi)亞種(zhong)樹鼩(鼩)肝(gan)細(xi)胞(bao)的特(te)性與功(gong)能提(ti)供了可靠(kao)的體(ti)外研(yan)究(jiu)工(gong)具，助(zhu)力(li)科研(yan)人員揭(jie)開(kai)樹鼩(鼩)肝(gan)臟(zang)的諸多奧秘(mi)。
滇西(xi)亞種(zhong)樹鼩(鼩)作為(wei)壹種(zhong)分布於(yu)特(te)定區(qu)域的(de)小(xiao)型哺(bu)乳動物(wu)，其肝(gan)臟(zang)在(zai)物(wu)質代(dai)謝(xie)、解(jie)毒以及(ji)維持機體(ti)穩(wen)態(tai)等(deng)方(fang)面(mian)發揮(hui)著關(guan)鍵作用。肝(gan)細(xi)胞(bao)作為(wei)肝(gan)臟(zang)結構(gou)與功(gong)能的(de)基本(ben)單(dan)位，其特性與滇西亞種(zhong)樹鼩(鼩)的生(sheng)存和健(jian)康緊(jin)密(mi)相關(guan)。以往對(dui)樹鼩(鼩)肝(gan)臟(zang)的研(yan)究(jiu)多依賴(lai)整(zheng)體(ti)動物(wu)實驗(yan)，難(nan)以在(zai)細(xi)胞(bao)層(ceng)面(mian)精(jing)準(zhun)解(jie)析(xi)肝(gan)臟(zang)的生(sheng)理與病(bing)理機制(zhi)。原代肝(gan)細(xi)胞(bao)培養(yang)存在(zai)存活時間(jian)短、功(gong)能不穩(wen)定(ding)、傳代困難等問(wen)題，限(xian)制了相關(guan)研究(jiu)的深(shen)入(ru)開(kai)展。因(yin)此(ci)，ITH48 永生化(hua)滇(dian)西亞種(zhong)樹鼩(鼩)肝(gan)細(xi)胞(bao)系的建立，為(wei)突(tu)破這些(xie)研(yan)究(jiu)瓶(ping)頸(jing)帶(dai)來了(le)新的可(ke)能。
ITH48 永生化(hua)滇(dian)西亞種(zhong)樹鼩(鼩)肝(gan)細(xi)胞(bao)系來源於(yu)滇(dian)西亞種(zhong)樹鼩(鼩)的肝(gan)臟(zang)組(zu)織(zhi)，通過特定的永生化(hua)技(ji)術處(chu)理後(hou)建立而(er)成(cheng)。建立過程嚴格(ge)遵循細(xi)胞(bao)培養(yang)規範，在(zai)無菌(jun)條(tiao)件(jian)下(xia)獲取(qu)滇西(xi)亞種(zhong)樹鼩(鼩)的肝(gan)臟(zang)組(zu)織(zhi)，仔細(xi)去除(chu)結(jie)締組(zu)織(zhi)和血(xue)管，將肝(gan)臟(zang)組(zu)zhi剪(jian)切(qie)成(cheng)約 1mm³ 的小(xiao)塊。隨後(hou)，用含雙(shuang)抗的磷酸(suan)鹽緩(huan)沖液(ye)多次沖洗(xi)，以徹(che)di清(qing)除(chu)血(xue)液(ye)和雜(za)質。接(jie)著(zhe)，加入(ru)專用(yong)肝(gan)細(xi)胞(bao)分散(san)液(ye)，在(zai) 37℃的(de)環(huan)境中(zhong)處(chu)理 25-35 分鐘(zhong)，期(qi)間每隔 8 分(fen)鐘(zhong)輕柔吹(chui)打，促使細(xi)胞(bao)充分(fen)分散(san)。收集(ji)細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)後(hou)，經 70μm 細(xi)胞(bao)濾(lv)網(wang)過濾(lv)，再以 1000r/min 的(de)轉(zhuan)速離心 8 分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)去(qu)上清(qing)液(ye)，用含有(you) 10% 胎牛血清(qing)的 DMEM 培養(yang)液(ye)重懸(xuan)細(xi)胞(bao)，並(bing)接(jie)種(zhong)於(yu)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，放(fang)置(zhi)在(zai) 37℃、5% CO₂的(de)恒溫(wen)培(pei)養(yang)箱(xiang)內(nei)進(jin)行原代培(pei)養(yang)。在(zai)培(pei)養(yang)初期(qi)，每 24 小時(shi)更(geng)換(huan)培(pei)養(yang)液(ye)以去(qu)除(chu)非(fei)貼壁(bi)細(xi)胞(bao)，當細(xi)胞(bao)匯合度(du)達(da)到 80% 左(zuo)右時(shi)進(jin)行傳(chuan)代(dai)操(cao)作。目前(qian)，該(gai)細(xi)胞(bao)系已穩(wen)定(ding)傳代至 50 代以上(shang)，細(xi)胞(bao)活力始終(zhong)保(bao)持在(zai) 85% 以上(shang)。
該(gai)細(xi)胞(bao)系呈現典型的上皮樣形(xing)態(tai)，細(xi)胞(bao)呈多邊(bian)形(xing)，胞(bao)體(ti)飽滿，排(pai)列(lie)緊(jin)密(mi)呈鋪路(lu)石(shi)樣，胞(bao)質豐(feng)富(fu)，細(xi)胞(bao)核呈(cheng)圓(yuan)形(xing)或(huo)橢圓(yuan)形(xing)，位於(yu)細(xi)胞(bao)中央(yang)，具(ju)有(you)較(jiao)強(qiang)的(de)貼壁(bi)生長(chang)特性。在(zai)生(sheng)長(chang)特性方(fang)面(mian)，研究(jiu)發現 ITH48 細(xi)胞(bao)在(zai) DMEM 培(pei)養(yang)液(ye)中生長(chang)狀(zhuang)態(tai)最(zui)為(wei)理(li)想(xiang)，相(xiang)較(jiao)於(yu)其他培(pei)養(yang)液(ye)，其細(xi)胞(bao)增殖(zhi)速度(du)提高約 20%。最(zui)適(shi)宜(yi)的(de)培養(yang)溫(wen)度(du)為(wei) 37℃，與多數哺(bu)乳動物(wu)體(ti)溫(wen)壹致(zhi)；當(dang)胎牛血清(qing)濃(nong)度(du)為(wei) 10% 時(shi)，細(xi)胞(bao)群體(ti)倍增時間最(zui)短(duan)，約為(wei) 55 小(xiao)時(shi)。歷經 40 代傳代後(hou)，細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)和增殖(zhi)速率(lv)未(wei)出現明(ming)顯(xian)變(bian)化，核型分析顯示(shi)其染色體(ti)數目(mu)穩(wen)定(ding)，維持滇西亞種(zhong)樹鼩(鼩)正(zheng)常(chang)的染(ran)色體(ti)數目(mu)，遺(yi)傳(chuan)背(bei)景(jing)可靠，穩(wen)定(ding)保留了(le)肝(gan)細(xi)胞(bao)的固有(you)特(te)性。
在(zai)功(gong)能特(te)性方(fang)面(mian)，免(mian)疫熒光檢(jian)測(ce)清(qing)晰顯示(shi)，ITH48 細(xi)胞(bao)高表達(da)肝(gan)細(xi)胞(bao)特異(yi)性標(biao)誌(zhi)物，如(ru)白蛋白、細(xi)胞(bao)角蛋白 18，確(que)鑿(zao)證(zheng)實(shi)了(le)其肝(gan)細(xi)胞(bao)屬性。該(gai)細(xi)胞(bao)系具備(bei)較(jiao)強(qiang)的(de)代謝功(gong)能，能(neng)參與多種(zhong)物質的(de)合成(cheng)與分解(jie)，對(dui)葡萄(tao)糖(tang)、脂(zhi)肪等的代謝能力(li)穩(wen)定(ding)，在(zai)維持機體(ti)的能(neng)量(liang)平衡(heng)中(zhong)發揮(hui)著重要作用。當(dang) ITH48 細(xi)胞(bao)受(shou)到化學毒物刺(ci)激(ji)時(shi)，解(jie)毒相關(guan)基因如(ru) CYP450 的表達(da)量(liang)顯著(zhu)上(shang)調，展現出良好的應激反(fan)應能力(li)，為(wei)研(yan)究(jiu)滇西(xi)亞種(zhong)樹鼩(鼩)肝(gan)臟(zang)的解(jie)毒機制(zhi)提供了關(guan)鍵線索。此(ci)外(wai)，該(gai)細(xi)胞(bao)系對(dui)常(chang)見的肝(gan)臟(zang)病(bing)原體(ti)表現出敏(min)感性，感染(ran)後(hou)細(xi)胞(bao)活力下(xia)降(jiang)，炎(yan)癥(zheng)因(yin)子(zi)分泌增加，為(wei)深(shen)入(ru)探(tan)究(jiu)病(bing)原體(ti)與肝(gan)細(xi)胞(bao)的相(xiang)互作用機制(zhi)提供了良好的實(shi)驗(yan)材(cai)料。
ITH48 永生化(hua)滇(dian)西亞種(zhong)樹鼩(鼩)肝(gan)細(xi)胞(bao)系在(zai)多個研(yan)究(jiu)領(ling)域展現出廣泛的(de)應用價(jia)值(zhi)。在(zai)肝(gan)臟(zang)發育(yu)研(yan)究(jiu)中，通(tong)過對(dui)該(gai)細(xi)胞(bao)系進(jin)行基因編輯實驗(yan)，成(cheng)功(gong)揭(jie)示(shi)了(le)相關(guan)基因在(zai)滇(dian)西(xi)亞種(zhong)樹鼩(鼩)肝(gan)細(xi)胞(bao)分化(hua)過程中的關(guan)鍵調控(kong)作用。在(zai)比(bi)較(jiao)生理(li)學(xue)研(yan)究(jiu)方(fang)面(mian)，借助(zhu)該(gai)細(xi)胞(bao)系與其他動(dong)物(wu)肝(gan)細(xi)胞(bao)系的對(dui)比分(fen)析，清(qing)晰闡明(ming)了(le)不同動(dong)物(wu)肝(gan)臟(zang)功(gong)能的(de)差異(yi)及(ji)其調控(kong)機制(zhi)。在(zai)醫(yi)學研(yan)究(jiu)領(ling)域，基於(yu)該(gai)細(xi)胞(bao)系建立的藥物(wu)篩(shai)選(xuan)模(mo)型，已用於(yu)評(ping)估多種(zhong)藥物對(dui)肝(gan)臟(zang)細(xi)胞(bao)的影響(xiang)，為(wei)肝(gan)臟(zang)疾病(bing)的防治(zhi)提供了有(you)力(li)支持。
作為(wei)穩(wen)定(ding)可靠的(de)滇西亞種(zhong)樹鼩(鼩)肝(gan)細(xi)胞(bao)模(mo)型，ITH48 不僅為(wei)樹(shu)鼩(鼩)肝(gan)臟(zang)生物(wu)學研(yan)究(jiu)提供了重要的技術支撐，推動(dong)了相關(guan)學術研究(jiu)的深(shen)入(ru)發展，還(hai)有(you)助(zhu)於(yu)提(ti)升對(dui)滇西(xi)亞種(zhong)樹鼩(鼩)的研(yan)究(jiu)水平(ping)，為(wei)該(gai)物(wu)種(zhong)的保護(hu)和相(xiang)關(guan)領(ling)域的(de)研(yan)究(jiu)貢獻重要力量(liang)。
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