H-4-II-E大鼠(shu)肝細胞瘤(liu)細胞系(xi)
H-4-II-E大鼠(shu)肝細胞瘤(liu)細胞系(xi)作為源自(zi)大(da)鼠(shu)肝(gan)臟惡(e)性(xing)腫瘤(liu)的(de)細胞模(mo)型(xing)，因(yin)保(bao)留(liu)典型(xing)肝(gan)癌(ai)生(sheng)物(wu)學(xue)特(te)征(zheng)，在(zai)肝(gan)臟腫瘤(liu)發(fa)病機(ji)制與(yu)藥物研(yan)發(fa)領(ling)域(yu)應(ying)用(yong)廣泛(fan)，成(cheng)為探究肝細胞癌(ai)惡(e)性(xing)增(zeng)殖(zhi)、轉(zhuan)移(yi)及耐(nai)藥性的(de)重(zhong)要(yao)實(shi)驗工具(ju)。
細胞特(te)性(xing)與(yu)來源背(bei)景(jing)：該(gai)細胞系(xi)源自(zi)大(da)鼠(shu)肝(gan)癌(ai)組織，經(jing)原(yuan)代培養(yang)和(he)克(ke)隆化建(jian)立(li)。細胞形態(tai)呈(cheng)上(shang)皮(pi)樣，多(duo)為多(duo)邊(bian)形或(huo)不(bu)規則(ze)形，胞質內可見(jian)脂(zhi)滴(di)空(kong)泡，約(yue)占細胞總(zong)數的(de) 15%，細胞核(he)大而畸形，核(he)仁(ren)明顯，核(he)質比(bi)顯著升高，約(yue) 30% 細胞呈(cheng)現(xian)多(duo)核(he)現(xian)象(xiang)。生(sheng)長(chang)方式為貼壁生(sheng)長(chang)，排(pai)列疏(shu)松，無明顯接(jie)觸抑制(zhi)，傳代後 24 小(xiao)時(shi)貼壁率達 90%。核心參(can)數(shu)表(biao)現(xian)出腫瘤(liu)特(te)征(zheng)：倍(bei)增(zeng)時間約(yue) 48 小時，連(lian)續傳代 50 次後仍保持(chi)異(yi)常染(ran)色體(ti)核型(xing)（染(ran)色體(ti)數約(yue) 44-46 條）；肝癌(ai)相(xiang)關(guan)標誌物甲胎(tai)蛋白（AFP）、熱(re)休克蛋白 70（HSP70）免(mian)疫熒(ying)光染(ran)色(se)陽性(xing)率達 93%，白蛋白分(fen)泌(mi)量僅(jin)為正(zheng)常肝(gan)細胞的(de) 35%；無細菌(jun)、真(zhen)菌、支(zhi)原(yuan)體(ti)及病毒(du)汙染，細胞純(chun)度達 96%，保障實(shi)驗結果的(de)可靠性(xing)。
科研(yan)應(ying)用(yong)價(jia)值(zhi)：在(zai)肝(gan)癌(ai)增殖(zhi)機(ji)制研(yan)究(jiu)中，H-4-II-E 細胞高表(biao)達細胞周(zhou)期蛋白 Cyclin E，其(qi) mRNA 水(shui)平(ping)較正(zheng)常肝(gan)細胞升高 3.2 倍(bei)，經(jing)絲(si)裂(lie)原(yuan)活化蛋白激酶(mei)（MAPK）抑制(zhi)劑處(chu)理(li)後，增(zeng)殖(zhi)活性(xing)下降(jiang) 58%，可模擬(ni)肝癌(ai)細胞異(yi)常增(zeng)殖(zhi)的(de)分子(zi)過程(cheng)，為解(jie)析癌(ai)變信號(hao)通(tong)路提供(gong)理(li)想(xiang)模(mo)型(xing)。腫瘤(liu)轉(zhuan)移(yi)研(yan)究(jiu)方面(mian)，該(gai)細胞在(zai) Transwell 實(shi)驗中穿膜細胞數(shu)是正(zheng)常肝(gan)細胞的(de) 8.7 倍(bei)，基(ji)質金(jin)屬(shu)蛋白酶(mei) - 9（MMP-9）分泌(mi)量增加 4.3 倍(bei)，經(jing)整(zheng)合(he)素(su)抗體(ti)幹預後轉(zhuan)移(yi)能力(li)降(jiang)低(di) 62%，能很(hen)好地(di)模擬肝癌(ai)侵襲(xi)轉(zhuan)移(yi)特(te)性(xing)，助力(li)轉(zhuan)移(yi)相(xiang)關(guan)基(ji)因(yin)功(gong)能的(de)探究。藥物篩(shai)選領(ling)域(yu)，該(gai)細胞對(dui)不(bu)同抗腫瘤(liu)藥物敏(min)感(gan)性存(cun)在(zai)差(cha)異(yi)，經(jing)相(xiang)關(guan)藥物處(chu)理(li)後雕(diao)亡(wang)率差異(yi)顯著（18%-45%），適用於評(ping)估抗(kang)腫瘤(liu)藥物的(de)療效(xiao)及耐(nai)藥機(ji)制。此(ci)外，將細胞與(yu)肝星狀細胞共培養(yang)，可構(gou)建(jian)體(ti)外肝(gan)癌(ai)微環境(jing)模(mo)型(xing)，用(yong)於研(yan)究(jiu)腫瘤(liu)微環境(jing)對(dui)肝癌(ai)進展(zhan)的(de)影(ying)響(xiang)。
培養(yang)與(yu)保存(cun)規(gui)範：推(tui)薦使(shi)用含(han) 10% 胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing)的(de) MEM 培養(yang)基(ji)，添加(jia) 1% 非必(bi)需氨(an)基(ji)酸、1mM 丙(bing)酮酸鈉及 1% 抗(kang)生(sheng)素(su)混(hun)合(he)液，培養(yang)環境(jing)為 37℃、5% CO₂飽和濕(shi)度的(de)恒溫(wen)培養(yang)箱。培養(yang)基(ji)需每 2-3 天(tian)更換(huan)壹(yi)次，避免代(dai)謝(xie)廢物堆(dui)積(ji)。傳代時采用(yong)含(han) EDTA 的(de)消化液處(chu)理(li)，37℃孵育 5-7 分鐘，待(dai)細胞邊(bian)緣回縮後加(jia)入(ru)含(han)血(xue)清(qing)的(de)培養(yang)基(ji)終止(zhi)消(xiao)化，傳代比(bi)例(li)為 1:3-1:5，每 3-4 天(tian)傳代壹(yi)次，維持(chi)細胞融(rong)合度在(zai) 70%-80% 以(yi)保持(chi)腫瘤(liu)特(te)性(xing)。凍存(cun)液配(pei)方為基(ji)礎培養(yang)基(ji) + 10% DMSO+20% 胎(tai)牛(niu)血(xue)清(qing)，經(jing)程(cheng)序(xu)降(jiang)溫(wen)（-20℃1 小時→-80℃過夜→液氮(dan)保(bao)存(cun)）後，復蘇細胞存(cun)活率達 88% 以(yi)上(shang)，2-3 代(dai)內可恢復正(zheng)常增(zeng)殖(zhi)能力(li)。運輸采(cai)用幹冰凍存(cun)管(guan)或(huo) T-25 培養(yang)瓶活細胞運輸，收(shou)到(dao)細胞後需靜(jing)置培養(yang) 24 小(xiao)時(shi)，更換培養(yang)基(ji)後觀(guan)察(cha)細胞形態(tai)，確(que)認無(wu)異(yi)常漂(piao)浮物後進(jin)行(xing)後續實(shi)驗。該(gai)細胞系(xi)僅(jin)限科(ke)研(yan)使(shi)用，操作(zuo)時需嚴(yan)格(ge)遵(zun)循(xun)腫瘤(liu)細胞生(sheng)物(wu)安(an)全規範。
H-4-II-E 大鼠肝細胞瘤(liu)系(xi)以(yi)其(qi)穩(wen)定(ding)的(de)惡(e)性(xing)表(biao)型(xing)、明(ming)確的(de)分子(zi)特(te)征(zheng)及易(yi)於培養(yang)的(de)優(you)勢(shi)，在(zai)肝癌(ai)基(ji)礎研(yan)究(jiu)與(yu)藥物開發(fa)中發(fa)揮著(zhe)重(zhong)要(yao)作用(yong)，為揭示肝(gan)臟腫瘤(liu)的(de)發(fa)病機(ji)制和(he)開發(fa)新型(xing)靶(ba)向治(zhi)療策(ce)略提供(gong)了(le)可靠的(de)實(shi)驗平臺。
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