上(shang)海(hai)乾思生(sheng)物Expedeon​品(pin)牌代理專業(ye)經(jing)營(ying)進口(kou)胎牛(niu)血清、細(xi)胞因(yin)子(zi)、ELISA試(shi)劑(ji)盒、細胞、抗(kang)體、生(sheng)物試(shi)劑(ji)、耗材(cai)、培(pei)養基、壹抗(kang)、二(er)抗(kang)、其(qi)產(chan)品吸(xi)附(fu)均(jun)勻，吸(xi)附(fu)性好(hao)，空(kong)白(bai)值(zhi)低(di)，孔(kong)底(di)透(tou)明(ming)度(du)高，代做(zuo)ELISA實(shi)驗(yan)等(deng)。完(wan)善的(de)庫(ku)存(cun)及(ji)供(gong)應體系(xi)以(yi)及(ji)高(gao)效(xiao)穩(wen)定(ding)的(de)純(chun)化技術(shu)，保(bao)證(zheng)產品均(jun)能(neng)現(xian)貨(huo)供應(ying)和(he)產(chan)品質量(liang)的(de)穩(wen)定(ding)性(xing)。

Expedeon

上海(hai)乾思生(sheng)物Expedeon品(pin)牌代理專業(ye)經(jing)營(ying)進口(kou)胎牛(niu)血清、細(xi)胞因(yin)子(zi)、ELISA試(shi)劑(ji)盒、細胞、抗(kang)體、生(sheng)物試(shi)劑(ji)、耗材(cai)、培(pei)養基、壹抗(kang)、二(er)抗(kang)、其(qi)產(chan)品吸(xi)附(fu)均(jun)勻，吸(xi)附(fu)性好(hao)，空(kong)白(bai)值(zhi)低(di)，孔(kong)底(di)透(tou)明(ming)度(du)高，代做(zuo)ELISA實(shi)驗(yan)等(deng)。完(wan)善的(de)庫(ku)存(cun)及(ji)供(gong)應體系(xi)以(yi)及(ji)高(gao)效(xiao)穩(wen)定(ding)的(de)純(chun)化技術(shu)，保(bao)證(zheng)產品均(jun)能(neng)現(xian)貨(huo)供應(ying)和(he)產(chan)品質量(liang)的(de)穩(wen)定(ding)性(xing)。

怎(zen)樣查到壹個(ge)特定(ding)細(xi)胞(bao)株(zhu)的(de)相(xiang)關知識和(he)培養條件？
ATCC（American Type Culture Collection）收(shou)集了(le)絕大多(duo)數細(xi)胞的(de)詳細(xi)資料。打開ATCC網(wang)頁(ye)的(de)Cells and hybridomas鏈(lian)接，輸入(ru)細胞名(ming)稱(cheng)就(jiu)可以(yi)搜索ATCC的(de)細(xi)胞數據(ju)庫(ku)。數(shu)據(ju)庫(ku)中(zhong)有(you)每(mei)壹種(zhong)細胞(bao)的(de)詳細(xi)描(miao)述，包(bao)括(kuo)細胞的(de)來(lai)源，培養和凍(dong)存(cun)條件，以(yi)及(ji)相(xiang)關文獻等(deng)資料。
如(ru)何(he)選(xuan)用(yong)特殊細胞系(xi)培(pei)養基？
培(pei)養某類型(xing)細胞沒有固(gu)定(ding)的(de)培(pei)養條件。MEM中(zhong)培(pei)養的(de)細(xi)胞，很可能(neng)在DMEM或M199中(zhong)同(tong)樣容(rong)易(yi)生(sheng)長。總(zong)之，*MEM、DMEM做(zuo)貼(tie)壁(bi)細胞培養；RPMI1640做(zuo)懸(xuan)浮(fu)細(xi)胞(bao)培養；各(ge)種(zhong)目的(de)無(wu)血(xue)清培(pei)養*AIMV培養基（SFM）。

測(ce)序實(shi)驗(yan)流(liu)程：
1 收(shou)集樣品
2 相(xiang)關(guan)試(shi)劑(ji) 總RNA提取試(shi)劑(ji)TREzol Reagent (RNA提取試(shi)劑(ji)), M-MLV(cDNA逆轉(zhuan)錄(lu)酶(mei)), RNA 純化試(shi)劑(ji), RealqPCR MasterMix (熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)PCR預(yu)混試(shi)劑(ji))。
3 實(shi)驗(yan)儀(yi)器 熒(ying)光(guang)定(ding)量(liang)PCR儀(yi); PCR儀(yi);低溫(wen)離(li)心(xin)機(ji)。
4 總RNA提(ti)取(qu)
5 cDNA合(he)成 在0.5ml的(de)離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)加(jia)入1µl模(mo)板總(zong)RNA(1µg/µl); 2µl隨機(ji)引物(wu)(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加(jia)水至(zhi)15µl體系(xi)。混(hun)勻後(hou)70℃變(bian)性RNA 5分(fen)鐘(zhong)，冰(bing)上(shang)速冷(leng)1分(fen)鐘(zhong)，離(li)心(xin)將(jiang)溶(rong)液(ye)收集(ji)至(zhi)管底(di)加(jia)入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水至(zhi)30µl體系(xi)。PCR儀(yi)中(zhong)反(fan)應條(tiao)件設(she)置(zhi) 37℃延(yan)伸(shen)60min，70℃保(bao)溫(wen)15min終(zhong)止(zhi)反應(ying)。合成(cheng)好的(de)cDNA置(zhi)於(yu) -20 ℃保(bao)存(cun)備(bei)用(yong)。
6 引物(wu)設(she)計與(yu)thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成(cheng)
7 實(shi)時(shi)定(ding)量(liang)PCR 按(an)以下(xia)反應(ying)體系(xi)進(jin)行(xing): 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上遊引物(wu)F 1 ul，下(xia)遊引物(wu)R 1 ul;cDNA template 2ul。定(ding)量(liang)PCR儀(yi)擴(kuo)增反應(ying)條件設(she)置(zhi):50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個(ge)循環(huan))。
8 PCR產物(wu)溶(rong)解(jie)曲(qu)線(xian)分(fen)析(xi) 將(jiang)所(suo)擴(kuo)增的(de)PCR 產(chan)物進行(xing)溶(rong)解(jie)曲(qu)線(xian)分(fen)析(xi)，單(dan)峰(feng)溶(rong)解(jie)曲(qu)線(xian)表示(shi)擴(kuo)增產物(wu)單壹，無(wu)非(fei)特異(yi)性擴(kuo)增產物(wu)。溶(rong)解(jie)曲(qu)線(xian)生(sheng)成的(de)反(fan)應程序為(wei): 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。

 註(zhu)意事項：收(shou)集標(biao)本(ben)前必須(xu)清楚要(yao)檢(jian)測(ce)的(de)成(cheng)份(fen)是(shi)否足夠穩(wen)定(ding)，對(dui)收(shou)集(ji)後當(dang)天進(jin)行(xing)檢(jian)測(ce)的(de)標(biao)本(ben)，儲(chu)存(cun)在4℃備(bei)用(yong)，如(ru)有(you)特殊原(yuan)因(yin)需(xu)要(yao)周(zhou)期收(shou)集標(biao)本(ben)，將標(biao)本(ben)及(ji)時(shi)分(fen)裝(zhuang)後放(fang)在-20℃或-70℃條(tiao)件下(xia)保(bao)存(cun)。避免(mian)反復(fu)凍融(rong)，標(biao)本(ben)2-8℃可保(bao)存(cun)48小時(shi)，-20℃可保(bao)存(cun)1個月(yue)，-70度(du)可保(bao)存(cun)6個月(yue)，部分(fen)標(biao)本(ben)需添(tian)加抑肽酶(mei)。我(wo)公(gong)司(si)是(shi)國(guo)內信譽雙(shuang)收的(de)放(fang)心(xin)企(qi)業(ye)代理商(shang)，具有良好的(de)市(shi)場信譽與(yu)口碑(bei)，專(zhuan)業的(de)銷售(shou)和(he)技(ji)術(shu)服(fu)務團(tuan)隊，歡(huan)迎廣大師(shi)生(sheng)、研究(jiu)機(ji)構等(deng)，洽商(shang)。

細胞出(chu)現問(wen)題，可重發的(de)情(qing)況有哪些？判定(ding)標(biao)準(zhun)是什麽(me)？
　　（1）細胞(bao)運(yun)輸途(tu)中(zhong)遭遇的(de)各(ge)種(zhong)問(wen)題，細胞丟失、破(po)損(sun)、漏液(ye)等(deng)，重發；
　　（2）凍存(cun)的(de)細(xi)胞復(fu)蘇後，絕大多(duo)數細(xi)胞未(wei)存(cun)活，重發；
　　（3）存(cun)活的(de)細(xi)胞靜置(zhi)24小(xiao)時(shi)後，絕大多(duo)數細(xi)胞未(wei)存(cun)活，重發；
　　（4）凍存(cun)的(de)細(xi)胞復(fu)蘇後或存(cun)活的(de)細(xi)胞靜置(zhi)4小(xiao)時(shi)後並且(qie)未(wei)開封，出(chu)現汙(wu)染，重發；
　　（5）視(shi)具體情(qing)況而定(ding)。
細(xi)胞(bao)出(chu)現問(wen)題，不(bu)予以(yi)重發的(de)情(qing)況有哪些？
　　（1）客戶造成(cheng)細(xi)胞(bao)汙(wu)染，不(bu)重發；
　　（2）客戶不(bu)正確(que)操(cao)作(zuo)致(zhi)細(xi)胞(bao)狀態不(bu)好，不(bu)重發；
　　（3）細胞狀態不(bu)好，未(wei)提供細胞(bao)培(pei)養前3天照(zhao)片的(de)，不(bu)重發；
　　（4）細胞培(pei)養時(shi)經(jing)其(qi)它處(chu)理的(de)，不(bu)重發；
　　（5）細胞收(shou)到2天(tian)內，未(wei)告知，不(bu)重發；
　　（6）視(shi)具體情(qing)況而定(ding)。