OCU-MSC1家兔骨髓(sui)間充(chong)質(zhi)幹(gan)細(xi)胞系(xi)
OCU-MSC1家兔骨髓(sui)間充(chong)質(zhi)幹(gan)細(xi)胞系(xi)作為兔源(yuan)腎(shen)臟(zang)細(xi)胞家族(zu)的重(zhong)要(yao)成員,以(yi)其(qi)對(dui)特(te)定病毒的高敏感(gan)性(xing)和穩定的生(sheng)物學特(te)性(xing),在(zai)病毒分(fen)離(li)、疫苗(miao)研(yan)制(zhi)及(ji)抗(kang)病(bing)毒(du)機(ji)制研(yan)究中占(zhan)據重(zhong)要(yao)地位(wei)。與 RK13 的廣譜適用性(xing)不同(tong),該(gai)細(xi)胞系(xi)源自家兔腎(shen)臟(zang)組織,更(geng)側(ce)重(zhong)於(yu)特(te)定領域的精(jing)準(zhun)研(yan)究,為病毒學探索提(ti)供(gong)了(le)高效(xiao)工(gong)具(ju)。
細(xi)胞起(qi)源與生(sheng)物學特(te)性(xing)
OCU-K3 家兔腎(shen)細(xi)胞系(xi)源自健(jian)康家兔的腎(shen)臟(zang)髓質(zhi)組織,通(tong)過(guo)原代(dai)培(pei)養結合特(te)異(yi)性(xing)篩選建立而成(cheng)。其(qi)建立過(guo)程註重(zhong)對(dui)腎(shen)臟(zang)髓質(zhi)上皮(pi)細(xi)胞的保(bao)留,與 RK13 源(yuan)自皮質(zhi)組織不同(tong),該(gai)細(xi)胞系(xi)的髓(sui)質(zhi)標誌(zhi)物 UMOD(尿調(tiao)蛋(dan)白(bai))表(biao)達量是(shi) RK13 的 3.1 倍,更(geng)貼(tie)合腎(shen)臟(zang)髓質(zhi)區(qu)域(yu)的細(xi)胞特(te)性(xing)。
細(xi)胞形(xing)態呈(cheng)典(dian)型的上(shang)皮(pi)樣,多為短(duan)梭形或(huo)多邊形(xing),排(pai)列(lie)緊密(mi)呈(cheng)單層,細(xi)胞核呈(cheng)卵圓形(核質(zhi)比(bi)約(yue) 1:3.7),細(xi)胞大(da)小(xiao)較(jiao) RK13 略小(xiao)(直(zhi)徑約(yue) 16-20μm)。在(zai)培(pei)養特(te)性(xing)上,最適(shi)體(ti)系為(wei)含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培(pei)養基(添(tian)加(jia) 1% 雙抗(kang)),在(zai) 37℃、5% CO₂環境(jing)下貼(tie)壁(bi)生(sheng)長(chang),倍增時間約(yue) 30-34 小(xiao)時(稍長(chang)於(yu) RK13)。傳代(dai)需(xu)在(zai)細(xi)胞融(rong)合度(du)達 75%-85% 時進(jin)行(xing),推(tui)薦(jian)傳代(dai)比(bi)例 1:3,對(dui)培(pei)養環境(jing)的酸(suan)堿(jian)度更(geng)敏感(gan),適(shi)宜 pH 值範(fan)圍為 7.2-7.4,較(jiao) RK13 的耐(nai)受(shou)範(fan)圍更(geng)窄(zhai)。
功(gong)能鑒(jian)定顯(xian)示(shi),該(gai)細(xi)胞系(xi)高表(biao)達腎(shen)上(shang)皮特(te)異(yi)性(xing)標誌物細(xi)胞角蛋白(bai) 19(CK19,陽性(xing)率 95%),波形蛋(dan)白(bai)陰(yin)性(xing)率<6%,無支(zhi)原(yuan)體(ti)、細(xi)菌及(ji)內源性(xing)病毒汙(wu)染(ran)。流(liu)式細(xi)胞術(shu)檢測發現(xian),其(qi)細(xi)胞表(biao)面(mian)存在(zai)豐(feng)富的特(te)定病毒受(shou)體(ti),為針(zhen)對(dui)性(xing)病毒感(gan)染(ran)提(ti)供(gong)了(le)分子(zi)基礎(chu)。
核心(xin)應(ying)用(yong)領域
特(te)定病毒的高效(xiao)分(fen)離(li)與培(pei)養
OCU-K3 家兔腎(shen)細(xi)胞系(xi)對(dui)家兔源(yuan)腺(xian)病毒(du)、副(fu)黏(nian)病(bing)毒(du)等特(te)定病毒表(biao)現(xian)出(chu)顯(xian)著(zhu)的敏感(gan)性(xing)。研(yan)究表(biao)明,其(qi)分離(li)家兔腺(xian)病(bing)毒的效(xiao)率是(shi) RK13 的 4.2 倍,病毒(du)滴度可(ke)達(da) 10⁷⁺⁸PFU/mL,感(gan)染(ran)後(hou) 36 小(xiao)時即(ji)可(ke)觀(guan)察(cha)到(dao)明顯(xian)的細(xi)胞病(bing)變(bian)(如細(xi)胞變(bian)圓、脫(tuo)落(luo)),病變(bian)率達(da) 92%。對(dui)於(yu)家兔副(fu)黏(nian)病毒(du),該(gai)細(xi)胞系(xi)能穩定支(zhi)持(chi)其(qi)增殖,傳代(dai)超過(guo) 25 次仍(reng)保(bao)持(chi)病毒活(huo)性(xing),為這類病毒(du)的保(bao)種和特(te)性(xing)研(yan)究提(ti)供(gong)了(le)可(ke)靠(kao)保障(zhang),而 RK13 在(zai)傳代(dai) 15 次後病(bing)毒(du)活(huo)性(xing)便(bian)會明顯(xian)下降。
針對(dui)性(xing)疫苗(miao)的研(yan)制(zhi)生(sheng)產(chan)
在(zai)特(te)定兔用(yong)疫苗(miao)研(yan)發中,OCU-K3 細(xi)胞系(xi)展現(xian)出(chu)獨(du)te優(you)勢(shi)。利用(yong)其(qi)培(pei)養家兔腺(xian)病(bing)毒疫苗(miao)株,病(bing)毒(du)抗(kang)原(yuan)產(chan)量達(da) 20μg/mL,較(jiao) RK13 提(ti)升 33%,經(jing)滅活(huo)後(hou)免疫家兔,中(zhong)和(he)抗(kang)體(ti)效(xiao)價(jia)達(da) 1:256 以(yi)上,保(bao)護率高達 95%。與 RK-HB 相(xiang)比(bi),其(qi)對(dui)家兔腺(xian)病(bing)毒的特(te)異(yi)性(xing)培(pei)養優(you)勢(shi)更(geng)明(ming)顯(xian),抗(kang)原(yuan)純(chun)度更(geng)高,減(jian)少(shao)了(le)雜(za)蛋(dan)白(bai)對(dui)疫苗(miao)效(xiao)果(guo)的幹(gan)擾(rao),為(wei)高品質兔用(yong)疫苗(miao)生(sheng)產提(ti)供(gong)了(le)優(you)質細(xi)胞基質(zhi)。
抗(kang)病(bing)毒(du)機(ji)制的深(shen)入(ru)研(yan)究
該細(xi)胞系(xi)為特(te)定病毒與宿(xiu)主互(hu)作機(ji)制研(yan)究提(ti)供(gong)了(le)理(li)想(xiang)模型。在(zai)探究家兔腺(xian)病(bing)毒入(ru)侵機(ji)制時,通(tong)過(guo) OCU-K3 細(xi)胞系(xi)發現(xian),病(bing)毒(du)可(ke)通(tong)過(guo)識別細(xi)胞表(biao)面(mian)的特(te)定受(shou)體(ti)進入(ru)細(xi)胞,敲(qiao)除該(gai)受(shou)體(ti)後,病(bing)毒感(gan)染(ran)率下降 89%,這壹發現(xian)為(wei)抗(kang)病(bing)毒(du)靶點的篩(shai)選提(ti)供(gong)了(le)重(zhong)要(yao)線索。相(xiang)較(jiao)於(yu) RK13,OCU-K3 在(zai)特(te)定病毒機(ji)制研(yan)究中背景(jing)幹(gan)擾(rao)更(geng)少(shao),實驗(yan)結(jie)果(guo)更(geng)具(ju)針對(dui)性(xing)。
與其(qi)他兔腎(shen)細(xi)胞系(xi)的差(cha)異(yi)及(ji)協同(tong)
OCU-K3 與 RK13、RK-HB 等兔腎(shen)細(xi)胞系(xi)形成(cheng)功(gong)能互(hu)補。RK13 適用於(yu)廣譜病毒研(yan)究,OCU-K3 專(zhuan)註於(yu)特(te)定病毒的高效(xiao)培(pei)養與機(ji)制探索,RK-HB 則(ze)側(ce)重(zhong)兔源(yuan)特(te)定病毒的研(yan)究。在(zai)實際(ji)應(ying)用(yong)中(zhong),可(ke)先(xian)用(yong) RK13 進(jin)行(xing)病毒初篩(shai),再用 OCU-K3 進行(xing)針對(dui)性(xing)培(pei)養和機(ji)制研(yan)究,三者(zhe)結(jie)合能(neng)全面(mian)覆蓋不(bu)同(tong)層次的研(yan)究需(xu)求(qiu),提(ti)升病(bing)毒學研(yan)究的效(xiao)率和(he)深(shen)度(du)。
優(you)勢(shi)與局限(xian)性(xing)
OCU-K3 家兔腎(shen)細(xi)胞系(xi)的優(you)勢(shi)在(zai)於(yu):對(dui)特(te)定病毒敏感(gan)性(xing)高,研(yan)究效(xiao)率高;細(xi)胞特(te)性(xing)更(geng)貼(tie)合腎(shen)臟(zang)髓質(zhi)細(xi)胞,為(wei)相(xiang)關病毒(du)的器(qi)官特(te)異(yi)性(xing)研(yan)究提(ti)供(gong)更(geng)精(jing)準(zhun)的模型;疫苗(miao)生(sheng)產中(zhong)抗(kang)原(yuan)產(chan)量高、純度(du)高。其(qi)局限(xian)性(xing)表(biao)現(xian)為(wei):適(shi)用(yong)病毒(du)範(fan)圍較(jiao)窄(zhai),對(dui)非特(te)定病毒的敏感(gan)性(xing)較(jiao)低;培(pei)養條件要求相(xiang)對(dui)嚴格(ge),對(dui)環境(jing)因(yin)素(su)變(bian)化更(geng)敏感(gan)。
研(yan)究意義與展(zhan)望
OCU-K3 家兔腎(shen)細(xi)胞系(xi)的建立,豐(feng)富了(le)兔源(yuan)腎(shen)臟(zang)細(xi)胞模型的種類,為特(te)定病毒的深(shen)入(ru)研(yan)究提(ti)供(gong)了(le)高效(xiao)工(gong)具(ju)。未來(lai),通(tong)過(guo)基因(yin)編輯技術(shu)對(dui)其(qi)進行(xing)改造(zao),有(you)望進壹步(bu)提(ti)高對(dui)特(te)定病毒的敏感(gan)性(xing),擴大(da)其(qi)應(ying)用(yong)範(fan)圍。同(tong)時,將該細(xi)胞系(xi)與 3D 培(pei)養技術(shu)結(jie)合,模擬腎(shen)臟(zang)髓質(zhi)的微(wei)環(huan)境(jing),可(ke)更(geng)真(zhen)實地反(fan)映病(bing)毒感(gan)染(ran)過(guo)程,為(wei)抗(kang)病(bing)du藥物研(yan)發和疫苗(miao)設計提(ti)供(gong)更(geng)可(ke)靠(kao)的實驗(yan)依據,推(tui)動病毒學研(yan)究和動物疫病(bing)防控工作的發展。