GT26山羊睪(gao)丸(wan)細胞(bao)系
GT26山羊睪(gao)丸(wan)細胞(bao)系作(zuo)為針對山羊睪(gao)丸(wan)組(zu)織(zhi)的(de)綜(zong)合(he)性細胞(bao)模(mo)型(xing)，在山羊生(sheng)殖發(fa)育機(ji)制(zhi)、精子發(fa)生(sheng)調(tiao)控及(ji)生(sheng)殖疾(ji)病研(yan)究領(ling)域具(ju)有重要價值。它(ta)的建立(li)為深(shen)入探究山羊睪(gao)丸(wan)內(nei)多(duo)種(zhong)細胞(bao)的協同(tong)作(zuo)用(yong)、生(sheng)精微(wei)環(huan)境動(dong)態(tai)平衡以及(ji)生(sheng)殖系(xi)統疾(ji)病的(de)發生(sheng)機(ji)制(zhi)等(deng)提供(gong)了穩定的體(ti)外(wai)研究平臺(tai)，對(dui)山羊生(sheng)殖機(ji)能優(you)化(hua)和繁育(yu)效(xiao)率提升意(yi)義(yi)重(zhong)大(da)。
山羊睪(gao)丸(wan)是(shi)雄(xiong)性(xing)生(sheng)殖系(xi)統的核(he)心(xin)器(qi)官，由(you)支(zhi)持細胞(bao)、生(sheng)精細胞(bao)、間(jian)質細胞(bao)等(deng)多(duo)種(zhong)細胞(bao)類型構(gou)成復(fu)雜(za)的生(sheng)精微(wei)環(huan)境，這些細胞(bao)相互作(zuo)用(yong)共(gong)同(tong)調(tiao)控精子發(fa)生(sheng)全過(guo)程(cheng)。睪丸(wan)細胞(bao)的正常增(zeng)殖(zhi)、分(fen)化(hua)及(ji)功能表(biao)達直接(jie)影響山羊的(de)繁(fan)殖(zhi)性能，而傳(chuan)統(tong)的(de)體(ti)內(nei)研(yan)究難(nan)以(yi)同(tong)時(shi)解析多(duo)種(zhong)細胞(bao)的動(dong)態(tai)變化(hua)及(ji)互作(zuo)關(guan)系，原代(dai)混(hun)合(he)細胞(bao)培(pei)養又(you)存在(zai)成分(fen)不穩定、傳(chuan)代(dai)能力有限等(deng)問題。因(yin)此，建立 GT26 山羊睪(gao)丸(wan)細胞(bao)系，成(cheng)為系統研(yan)究山羊睪(gao)丸(wan)生(sheng)理功能及(ji)病理變化(hua)的重(zhong)要(yao)突破(po)口。
GT26 山羊睪(gao)丸(wan)細胞(bao)系的(de)建立(li)經(jing)過(guo)了嚴謹(jin)規(gui)範(fan)的操(cao)作(zuo)流程(cheng)。選取(qu)健(jian)康(kang)的(de)成年山羊，在(zai)無(wu)菌條(tiao)件下(xia)取(qu)出睪丸(wan)組(zu)織(zhi)，去(qu)除被膜(mo)、血(xue)管及(ji)結締組(zu)織(zhi)。將睪丸(wan)實(shi)質剪(jian)切(qie)成(cheng) 1mm³ 左(zuo)右的(de)小塊(kuai)，用(yong)含(han)雙(shuang)抗的磷酸鹽緩(huan)沖(chong)液(ye)反復(fu)沖(chong)洗以(yi)清除血液(ye)和雜(za)質。加入(ru)細胞(bao)分(fen)散(san)液(ye)，在 37℃條(tiao)件下(xia)處(chu)理 35-45 分(fen)鐘(zhong)，期間(jian)每隔(ge) 8 分(fen)鐘(zhong)輕輕(qing)吹(chui)打(da)壹(yi)次使(shi)細胞(bao)充(chong)分(fen)分(fen)散(san)。收集(ji)細胞(bao)懸液(ye)，經(jing) 70μm 細胞(bao)濾網過(guo)濾後，1200r/min 離(li)心(xin) 8 分(fen)鐘(zhong)，棄(qi)上(shang)清(qing)，用(yong)含(han) 12% 胎牛(niu)血(xue)清(qing)的 DMEM/F12 培(pei)養液(ye)重懸(xuan)細胞(bao)，接種(zhong)於培(pei)養瓶(ping)中(zhong)，置(zhi)於 37℃、5% CO₂恒(heng)溫(wen)培(pei)養箱中(zhong)進(jin)行原代(dai)培(pei)養。培(pei)養初(chu)期，每 24-48 小時(shi)更(geng)換(huan)壹(yi)次培(pei)養液(ye)，待細胞(bao)匯合(he)度達 80% 時(shi)進(jin)行傳(chuan)代(dai)，目前該細胞(bao)系已(yi)穩定傳(chuan)代(dai)至(zhi) 45 代(dai)以(yi)上，細胞(bao)活力(li)保持在 85% 以(yi)上(shang)。
該細胞(bao)系呈(cheng)現(xian)典型(xing)的上皮樣與(yu)成(cheng)纖(xian)維(wei)樣(yang)混(hun)合(he)形態(tai)，兩種(zhong)細胞(bao)類型比例約(yue)為 3:2。上皮樣(yang)細胞(bao)呈多(duo)邊(bian)形或(huo)不規(gui)則圓(yuan)形，排列緊密，胞(bao)質豐(feng)富，細胞(bao)核(he)呈(cheng)圓(yuan)形；成纖(xian)維(wei)樣(yang)細胞(bao)呈長(chang)梭形，排列疏(shu)松(song)且(qie)有壹(yi)定方(fang)向(xiang)性，胞(bao)質均勻，細胞(bao)核(he)呈(cheng)橢(tuo)圓(yuan)形。兩種(zhong)細胞(bao)相互交(jiao)織(zhi)形成立體(ti)生(sheng)長(chang)結構(gou)，具(ju)有較(jiao)強(qiang)的(de)貼壁生(sheng)長(chang)能力。生(sheng)長(chang)特(te)性研究顯(xian)示(shi)，GT26 細胞(bao)在 DMEM/F12 培(pei)養液(ye)中(zhong)生(sheng)長(chang)狀態(tai)最佳(jia)，相(xiang)較(jiao)於其(qi)他(ta)培(pei)養液(ye)，細胞(bao)增(zeng)殖(zhi)速(su)度提(ti)高約 20%；最適(shi)培(pei)養溫(wen)度(du)為 37℃，與(yu)哺乳(ru)動物(wu)體(ti)溫(wen)壹(yi)致(zhi)；當(dang)胎牛(niu)血(xue)清(qing)濃度(du)為 12% 時(shi)，細胞(bao)群體(ti)倍(bei)增(zeng)時(shi)間(jian)最短，約(yue)為 68 小時(shi)。傳(chuan)代(dai)至(zhi) 35 代(dai)後，細胞(bao)形態(tai)比(bi)例(li)和增(zeng)殖(zhi)速(su)率無(wu)明顯(xian)變化(hua)，核(he)型(xing)分(fen)析表(biao)明其(qi)染(ran)色(se)體(ti)數(shu)目穩定（保持山羊正常的 60 條染(ran)色(se)體(ti)），遺(yi)傳(chuan)背(bei)景(jing)可(ke)靠，仍保留(liu)睪丸(wan)組(zu)織(zhi)多(duo)種(zhong)細胞(bao)的協同(tong)功(gong)能特(te)性。
在功(gong)能特(te)性方(fang)面，GT26 山羊睪(gao)丸(wan)細胞(bao)系展(zhan)現(xian)出豐(feng)富的(de)生(sheng)殖相(xiang)關功能。免疫熒(ying)光(guang)檢(jian)測(ce)發(fa)現(xian)，細胞(bao)同時(shi)表(biao)達支持細胞(bao)標誌(zhi)物(wu)（波形蛋白、FSH 受(shou)體(ti)）、間(jian)質細胞(bao)標誌(zhi)物(wu)（睪酮合(he)成酶(mei)、LH 受(shou)體(ti)）及(ji)生(sheng)精細胞(bao)早期標誌(zhi)物(wu)（c-Kit），證實(shi)其(qi)混(hun)合(he)細胞(bao)群屬(shu)性。該細胞(bao)系具(ju)有分(fen)泌(mi)睪酮和雄(xiong)激(ji)素結(jie)合(he)蛋白（ABP）的(de)能力，ELISA 檢測(ce)顯(xian)示(shi)培(pei)養液(ye)中(zhong)睪酮濃度(du)可(ke)達 35ng/mL，ABP 濃度(du)達 22ng/mL，能有效模(mo)擬體(ti)內(nei)生(sheng)精微(wei)環(huan)境的(de)激(ji)素調(tiao)節網絡(luo)。同時(shi)，GT26 細胞(bao)在體(ti)外(wai)培(pei)養條(tiao)件(jian)下(xia)可(ke)維(wei)持壹(yi)定的精子發(fa)生(sheng)相關(guan)基因(yin)表(biao)達，如 Stra8、Sycp3 等(deng)，為研究精子發(fa)生(sheng)的分(fen)子調(tiao)控機(ji)制(zhi)提(ti)供(gong)了理想模(mo)型(xing)。此外(wai)，該細胞(bao)系對(dui)山羊生(sheng)殖系(xi)統常見(jian)病(bing)原體(ti)如衣(yi)原體(ti)表(biao)現(xian)出敏感(gan)性(xing)，感染(ran)後會出現(xian)細胞(bao)形態(tai)異(yi)常(chang)和分(fen)泌(mi)功能紊亂(luan)，為研究病(bing)原體(ti)致(zhi)生(sheng)殖障(zhang)礙(ai)的(de)機(ji)制(zhi)提(ti)供(gong)了良(liang)好(hao)材(cai)料(liao)。
GT26 山羊睪(gao)丸(wan)細胞(bao)系在(zai)多(duo)個研(yan)究領(ling)域應(ying)用(yong)廣泛(fan)。在生(sheng)殖生(sheng)理研究中(zhong)，通過(guo)對該細胞(bao)系進(jin)行共(gong)培(pei)養實(shi)驗(yan)，揭(jie)示(shi)了支持細胞(bao)與(yu)間(jian)質細胞(bao)在睪(gao)酮合(he)成中(zhong)的協同(tong)調(tiao)控作(zuo)用(yong)；在(zai)繁(fan)育技(ji)術(shu)方(fang)面，利用(yong)該細胞(bao)系篩(shai)選出促進(jin)生(sheng)精細胞(bao)分(fen)化(hua)的關(guan)鍵因(yin)子(zi)，為山羊人工授精技術(shu)優(you)化(hua)提供(gong)了理論依據(ju)；在(zai)獸醫臨(lin)床研究中(zhong)，建立了基於該細胞(bao)系的(de)藥物(wu)篩選(xuan)模(mo)型(xing)，已(yi)用(yong)於多(duo)種(zhong)治療(liao)睪(gao)丸(wan)炎(yan)藥(yao)物(wu)的效(xiao)力(li)評估(gu)。
作為穩定可(ke)靠的山羊睪(gao)丸(wan)混(hun)合(he)細胞(bao)模(mo)型(xing)，GT26 不僅(jin)填bu了山羊睪(gao)丸(wan)多(duo)種(zhong)細胞(bao)協同(tong)研(yan)究的(de)體(ti)外(wai)模(mo)型(xing)空白，更(geng)為山羊生(sheng)殖生(sheng)物(wu)學及(ji)繁育(yu)技術(shu)研究提(ti)供(gong)了重要工具(ju)，推動了山羊生(sheng)殖機(ji)能調(tiao)控和優(you)良(liang)品(pin)種(zhong)培(pei)育技(ji)術(shu)的發展(zhan)，對(dui)提升山羊養(yang)殖(zhi)產(chan)業(ye)的(de)經(jing)濟效(xiao)益(yi)具(ju)有重要意(yi)義(yi)。
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