MSMF鱸魚(yu)心(xin)臟成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)系(xi)
MSMF鱸魚(yu)心(xin)臟成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)系(xi)作(zuo)為針對鱸魚(yu)心(xin)臟成(cheng)纖(xian)維(wei)組織(zhi)的特異(yi)性細(xi)胞模型，在海(hai)水魚類心(xin)臟結構(gou)維(wei)持(chi)、損(sun)傷修復及心(xin)血管疾(ji)病(bing)研(yan)究領域具(ju)有(you)重(zhong)要(yao)價值(zhi)。它(ta)的(de)建(jian)立(li)為(wei)深入探(tan)究鱸魚(yu)心(xin)臟成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)的(de)生(sheng)理功(gong)能、與心(xin)肌(ji)細(xi)胞的(de)相互作(zuo)用以及病原(yuan)體感(gan)染機制等提供(gong)了(le)穩定的體(ti)外(wai)研(yan)究平(ping)臺，對(dui)鱸魚(yu)養(yang)殖(zhi)產業的健康發(fa)展(zhan)意義重(zhong)大(da)。
鱸魚(yu)是我國(guo)重要的(de)海(hai)水養(yang)殖(zhi)魚類，肉(rou)質(zhi)鮮(xian)美(mei)，生(sheng)長速(su)度快(kuai)，在沿海(hai)地區養(yang)殖(zhi)規(gui)模龐(pang)大(da)。心(xin)臟成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)作(zuo)為心(xin)臟組織(zhi)中(zhong)的主(zhu)要間質(zhi)細胞(bao)，雖(sui)不(bu)直(zhi)接(jie)參(can)與收(shou)縮功能(neng)，卻承(cheng)擔著(zhe)合(he)成細(xi)胞外基質(zhi)、維(wei)持(chi)心(xin)臟結構(gou)完(wan)整(zheng)性、參(can)與心(xin)臟損(sun)傷修復等關鍵作(zuo)用，其功能異(yi)常會導致(zhi)心(xin)臟纖(xian)維(wei)化(hua)等病變，影(ying)響心(xin)臟正(zheng)常功(gong)能(neng)。在養(yang)殖(zhi)過程中(zhong)，鱸魚(yu)的心(xin)臟易受水溫變化(hua)、水質(zhi)汙染、病(bing)原菌侵(qin)襲等因(yin)素影(ying)響，引(yin)發心(xin)臟疾(ji)病，導致(zhi)生(sheng)長受阻(zu)、死亡率(lv)上(shang)升。因(yin)此，建(jian)立(li) MSMF 鱸魚(yu)心(xin)臟成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)系(xi)，對於(yu)揭示心(xin)臟成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)的(de)生(sheng)理機(ji)制、研(yan)發(fa)心(xin)血管疾(ji)病(bing)防(fang)控技(ji)術(shu)具有(you)重(zhong)要(yao)的理論(lun)和實(shi)踐意義(yi)。
MSMF 鱸魚(yu)心(xin)臟成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)系(xi)的建(jian)立(li)經(jing)過了嚴謹規(gui)範(fan)的(de)操(cao)作(zuo)流程。選取(qu)健康的(de)鱸魚(yu)，經(jing)嚴格的(de)無(wu)菌處(chu)理(li)後，在超(chao)凈工(gong)作(zuo)臺中(zhong)小心(xin)解剖(pou)分(fen)離(li)出心(xin)臟組織(zhi)，去除心(xin)bao膜(mo)及大(da)血(xue)管。將心(xin)臟組zhi剪碎成 1mm³ 左(zuo)右(you)的小塊，用含(han)雙(shuang)抗(kang)的(de)磷(lin)酸鹽緩(huan)沖(chong)液(ye)反復(fu)沖(chong)洗(xi)，以清(qing)除(chu)血細胞和雜(za)質(zhi)。隨(sui)後加(jia)入 0.25% 胰(yi)dan白酶和 EDTA 混(hun)合(he)溶(rong)液(ye)，在 25℃條件(jian)下(xia)消(xiao)化(hua) 30-40 分(fen)鐘，使(shi)細(xi)胞(bao)分(fen)散。收(shou)集細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，經(jing) 70μm 細(xi)胞(bao)濾(lv)網過濾後，1000r/min 離(li)心(xin) 5 分(fen)鐘，棄(qi)上(shang)清(qing)，用含(han) 15% 胎(tai)牛血清(qing)的(de) DMEM/F12 培(pei)養(yang)液(ye)重懸(xuan)細(xi)胞，接(jie)種(zhong)於(yu)培(pei)養(yang)瓶(ping)中(zhong)，置於(yu) 25℃恒溫(wen)培(pei)養(yang)箱(xiang)中(zhong)進行(xing)原代(dai)培(pei)養(yang)。培(pei)養(yang)初(chu)期，每(mei) 2-3 天更換(huan)壹半(ban)培(pei)養(yang)液(ye)，待細胞匯合(he)度達到(dao) 70%-80% 時進行(xing)傳代(dai)，目(mu)前(qian)該細胞(bao)系(xi)已穩(wen)定傳代(dai)至(zhi) 45 代(dai)以上(shang)，細(xi)胞(bao)活(huo)力(li)保(bao)持(chi)在 85% 以上(shang)。
該細胞(bao)系(xi)呈現(xian)典型的成(cheng)纖(xian)維(wei)樣細胞(bao)形態(tai)，細(xi)胞(bao)呈(cheng)長梭形，排(pai)列疏松(song)，胞質(zhi)豐(feng)富(fu)，具(ju)有(you)明顯的極性和較強的貼(tie)壁生(sheng)長能(neng)力(li)。生(sheng)長特性研(yan)究顯示，MSMF 細胞(bao)在 DMEM/F12 培(pei)養(yang)液(ye)中(zhong)生(sheng)長狀態(tai)優(you)良(liang)，相較於(yu)其(qi)他培(pei)養(yang)基(ji)，細胞增殖速(su)度提(ti)高(gao)約(yue) 25%；最適(shi)培(pei)養(yang)溫(wen)度為 24-26℃，與鱸魚(yu)的自(zi)然生(sheng)存(cun)水溫相符；當胎(tai)牛血清(qing)濃度為(wei) 10% 時，細(xi)胞群體(ti)倍(bei)增時間最短(duan)，約為 60 小時。傳代(dai)至(zhi) 35 代(dai)後，細胞(bao)形態(tai)和增殖速(su)率(lv)無(wu)明顯變化(hua)，核(he)型分(fen)析表(biao)明其染(ran)色(se)體數目(mu)穩定，遺傳穩(wen)定性良(liang)好(hao)。
在功能特性方面，MSMF 鱸魚(yu)心(xin)臟成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)系(xi)展(zhan)現出豐(feng)富(fu)的(de)成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)功(gong)能。免疫(yi)熒光檢(jian)測發(fa)現，細(xi)胞(bao)表(biao)達成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)特異(yi)性標(biao)誌物如(ru)波形蛋白、Ⅰ 型膠原(yuan)蛋(dan)白，進壹步(bu)證實(shi)了其成纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)屬(shu)性。該細胞(bao)系(xi)具有(you)較強的分(fen)泌(mi)功(gong)能(neng)，能合成和分(fen)泌(mi)多(duo)種(zhong)細胞外基(ji)質(zhi)成分(fen)，模擬體內心(xin)臟間質(zhi)的構(gou)建(jian)過程，這對研(yan)究心(xin)臟結構(gou)維(wei)持(chi)機制(zhi)具有(you)重(zhong)要(yao)意義。同(tong)時，MSMF 細(xi)胞在心(xin)肌(ji)細(xi)胞損(sun)傷模型中(zhong)能表(biao)現(xian)出增殖活(huo)躍(yue)、遷移(yi)能力(li)增強等特性，模擬心(xin)臟損(sun)傷後的修復反(fan)應(ying)，為(wei)研(yan)究心(xin)臟修復機(ji)制(zhi)提供(gong)了(le)理想模型。此外(wai)，該細胞(bao)系(xi)對鱸魚(yu)常見的(de)病(bing)原菌如(ru)鰻弧(hu)菌、溶(rong)藻(zao)弧(hu)菌等表(biao)現(xian)出敏感性，感(gan)染(ran)後會出現細胞形態(tai)改(gai)變、分(fen)泌(mi)功(gong)能(neng)異(yi)常等病變特征，為研(yan)究病原(yuan)菌對(dui)心(xin)臟間質(zhi)組織(zhi)的影響機(ji)制提(ti)供(gong)了(le)良(liang)好(hao)材料(liao)。
MSMF 鱸魚(yu)心(xin)臟成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)系(xi)在多個研(yan)究領域應(ying)用廣泛。在心(xin)臟纖(xian)維(wei)化(hua)機(ji)制(zhi)研(yan)究中(zhong)，通過檢(jian)測細(xi)胞在不(bu)同(tong)刺激下(xia)的(de)基(ji)質(zhi)分(fen)泌(mi)變化(hua)，揭示了鱸魚(yu)心(xin)臟纖(xian)維(wei)化(hua)的(de)發(fa)生(sheng)途徑(jing)；在環境適應(ying)研(yan)究中(zhong)，利用該細胞(bao)系(xi)評估了水溫、鹽度等環境(jing)因(yin)素對(dui)心(xin)臟成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)功(gong)能的影(ying)響，為(wei)鱸魚(yu)養(yang)殖(zhi)環境優化(hua)提(ti)供(gong)了(le)依(yi)據(ju)；在藥物篩選(xuan)方面，建(jian)立(li)了(le)基於(yu)細(xi)胞(bao)活(huo)性(xing)和基(ji)質(zhi)分(fen)泌(mi)功(gong)能(neng)的篩選模型，已篩(shai)選(xuan)出多種具有(you)抑制心(xin)臟纖(xian)維(wei)化(hua)作(zuo)用的化合物。
作(zuo)為穩定可靠(kao)的(de)鱸魚(yu)心(xin)臟成(cheng)纖(xian)維(wei)細(xi)胞(bao)模型，MSMF 不(bu)僅填(tian)bu了鱸魚(yu)心(xin)臟間質(zhi)細胞(bao)研(yan)究的空(kong)白，更為(wei)海(hai)水魚類心(xin)臟支(zhi)持(chi)組織(zhi)生(sheng)物學研(yan)究提供(gong)了(le)重要(yao)工(gong)具，推(tui)動(dong)了(le)鱸魚(yu)心(xin)血管疾(ji)病(bing)防(fang)控技(ji)術(shu)的研(yan)發(fa)，對(dui)保(bao)障(zhang)鱸魚(yu)養(yang)殖(zhi)產業的可持(chi)續發展(zhan)具有(you)重(zhong)要(yao)意義。
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