LCM10/大黃(huang)魚(yu)巨(ju)噬細(xi)胞(bao)系(xi)
LCM10/大黃(huang)魚(yu)巨(ju)噬細(xi)胞(bao)系(xi)作(zuo)為專(zhuan)註於(yu)大黃(huang)魚(yu)免疫細(xi)胞(bao)研(yan)究的模(mo)型，在(zai)海水(shui)魚(yu)類(lei)免疫學及病害(hai)防(fang)控領(ling)域有著舉足(zu)輕(qing)重(zhong)的地(di)位。它(ta)的建立(li)為深(shen)入探(tan)究大黃(huang)魚(yu)的免疫機(ji)制、病(bing)原(yuan)菌感染(ran)過(guo)程等提(ti)供了(le)穩(wen)定(ding)可(ke)靠的體(ti)外研(yan)究平(ping)臺(tai)，對大黃(huang)魚(yu)養(yang)殖(zhi)產(chan)業的健(jian)康發展意義(yi)重大。
大黃(huang)魚(yu)是(shi)我(wo)國(guo)東南(nan)沿海重(zhong)要(yao)的海(hai)水(shui)養(yang)殖(zhi)經(jing)濟魚(yu)類(lei)，肉(rou)質(zhi)鮮(xian)美(mei)，深(shen)受消費(fei)者(zhe)喜愛(ai)，養(yang)殖(zhi)規(gui)模(mo)龐(pang)大。然而(er)，隨著(zhe)養(yang)殖(zhi)產(chan)業的快(kuai)速發展，各種(zhong)細(xi)菌性、病(bing)毒性疾(ji)病(bing)頻發，給養(yang)殖(zhi)戶(hu)帶(dai)來(lai)了巨(ju)大的經(jing)濟損(sun)失(shi)。巨(ju)噬細(xi)胞(bao)作(zuo)為魚(yu)類(lei)免疫系(xi)統(tong)中至(zhi)關重(zhong)要(yao)的細(xi)胞(bao)，具(ju)有吞(tun)噬病原(yuan)體、呈(cheng)遞(di)抗原(yuan)、分(fen)泌細(xi)胞(bao)因(yin)子等(deng)多種(zhong)功能，是機體抵(di)禦(yu)病(bing)原體(ti)入(ru)侵(qin)的第壹(yi)道防(fang)線。因(yin)此，建立(li)大黃(huang)魚(yu)巨(ju)噬細(xi)胞(bao)系(xi)，對(dui)於研究其免疫防(fang)禦機(ji)制具(ju)有重要的理(li)論和實踐價值(zhi)。
LCM10 大黃(huang)魚(yu)巨(ju)噬細(xi)胞(bao)系(xi)的建立(li)經(jing)過了(le)壹(yi)系(xi)列(lie)嚴謹細(xi)致(zhi)的操(cao)作。選取健康的大黃(huang)魚(yu)，經(jing)嚴格(ge)的無(wu)菌處理(li)後(hou)，在(zai)超(chao)凈工(gong)作(zuo)臺中(zhong)解剖(pou)分離出(chu)頭(tou)腎(shen)組(zu)織(zhi)，因(yin)為頭(tou)腎(shen)是(shi)魚(yu)類(lei)重(zhong)要的免疫器(qi)官(guan)，富(fu)含巨(ju)噬細(xi)胞(bao)前(qian)體(ti)。將(jiang)頭腎(shen)組(zu)zhi剪碎(sui)成(cheng)細(xi)小的組(zu)織塊(kuai)，用(yong)含(han)抗菌成分(fen)的緩(huan)沖(chong)液(ye)反(fan)復(fu)沖(chong)洗，以(yi)去(qu)除(chu)雜(za)質和血(xue)細(xi)胞(bao)。隨(sui)後(hou)加入細(xi)胞(bao)分(fen)散(san)液(ye)處(chu)理(li) 30-40 分鐘，使細(xi)胞(bao)充(chong)分(fen)分(fen)散(san)。收(shou)集(ji)細(xi)胞(bao)懸液(ye)，經(jing)濾(lv)網(wang)過(guo)濾(lv)後(hou)離(li)心(xin)純(chun)化，用(yong)含(han) 10%-15% 胎牛(niu)血(xue)清(qing)的 L-15 培(pei)養(yang)液重(zhong)懸細(xi)胞(bao)，接種(zhong)到(dao)培(pei)養(yang)瓶中(zhong)，置於(yu) 22-25℃恒溫(wen)培(pei)養(yang)箱(xiang)中進(jin)行(xing)原(yuan)代(dai)培(pei)養(yang)。培(pei)養(yang)初期(qi)，每 2-3 天更(geng)換壹(yi)次培(pei)養(yang)液，待(dai)細(xi)胞(bao)匯(hui)合(he)度達(da)到(dao) 70% 左右時進(jin)行(xing)傳代(dai)培(pei)養(yang)。目(mu)前，該(gai)細(xi)胞(bao)系(xi)已穩(wen)定(ding)傳代(dai)至(zhi) 50 代(dai)以上，細(xi)胞(bao)活(huo)力始(shi)終(zhong)保(bao)持(chi)在較(jiao)高水(shui)平(ping)。
該(gai)細(xi)胞(bao)系(xi)具(ju)有典型的巨(ju)噬細(xi)胞(bao)形態(tai)特征(zheng)，細(xi)胞(bao)呈(cheng)圓形或(huo)不規(gui)則(ze)形，胞體(ti)較(jiao)大，細(xi)胞(bao)質(zhi)豐(feng)富(fu)，部(bu)分細(xi)胞(bao)帶(dai)有偽(wei)足(zu)，具(ju)有較(jiao)強的貼(tie)壁生長能力。生(sheng)長(chang)特性研(yan)究表(biao)明(ming)，LCM10 細(xi)胞(bao)在(zai) L-15 培(pei)養(yang)液中(zhong)生長狀(zhuang)態(tai)優良(liang)，最(zui)適(shi)培(pei)養(yang)溫(wen)度(du)為 23-24℃，這(zhe)與大黃(huang)魚(yu)的生(sheng)存(cun)水(shui)溫(wen)相(xiang)契合。當(dang)胎牛(niu)血(xue)清(qing)濃度為 12% 時(shi)，細(xi)胞(bao)的增(zeng)殖(zhi)速(su)度(du)最(zui)快(kuai)，群體(ti)倍增(zeng)時(shi)間(jian)約(yue)為 72 小時(shi)。傳代(dai)至(zhi) 35 代(dai)後(hou)，細(xi)胞(bao)的形態(tai)和增(zeng)殖(zhi)能(neng)力依(yi)然穩(wen)定(ding)，核型(xing)分析顯(xian)示其染(ran)色(se)體數(shu)目(mu)正(zheng)常(chang)，遺(yi)傳穩(wen)定(ding)性良(liang)好(hao)。
在(zai)功能特性方(fang)面(mian)，LCM10 大黃(huang)魚(yu)巨(ju)噬細(xi)胞(bao)系(xi)展現(xian)出(chu)顯(xian)著(zhu)的巨(ju)噬細(xi)胞(bao)功能。通過吞(tun)噬實驗發現，該(gai)細(xi)胞(bao)能(neng)夠高(gao)效吞(tun)噬熒(ying)光標記(ji)的細(xi)菌，吞(tun)噬率可(ke)達(da) 60% 以上，表明(ming)其具(ju)有強大的吞(tun)噬能力。同時(shi)，在(zai)受到(dao)脂(zhi)多糖(tang)等(deng)病原(yuan)體相(xiang)關分子模(mo)式刺(ci)激(ji)時，細(xi)胞(bao)會(hui)大量分泌腫瘤壞死因(yin)子、白細(xi)胞(bao)介(jie)素(su)等細(xi)胞(bao)因(yin)子，參(can)與免疫調(tiao)節過程(cheng)。此(ci)外(wai)，該細(xi)胞(bao)系(xi)對(dui)多種(zhong)大黃(huang)魚(yu)常(chang)見病原菌如(ru)副溶(rong)血(xue)弧(hu)菌、溶(rong)藻弧(hu)菌等具(ju)有高度敏(min)感(gan)性，感(gan)染(ran)後(hou)會(hui)出(chu)現(xian)明(ming)顯(xian)的細(xi)胞(bao)形態(tai)變化和活性降低(di)，為研(yan)究病(bing)原(yuan)菌與巨(ju)噬細(xi)胞(bao)的相(xiang)互作用(yong)機制提(ti)供了(le)理(li)想的模(mo)型。
LCM10 大黃(huang)魚(yu)巨(ju)噬細(xi)胞(bao)系(xi)在(zai)多個(ge)研(yan)究領(ling)域都(dou)有廣(guang)泛的應(ying)用。在(zai)免疫機(ji)制研(yan)究中(zhong)，利(li)用該(gai)細(xi)胞(bao)系(xi)探(tan)究了(le)大黃(huang)魚(yu) Toll 樣受體(ti)信(xin)號通路(lu)在對(dui)抗病(bing)原(yuan)菌感染(ran)中(zhong)的作(zuo)用，為理(li)解魚(yu)類(lei)天然免疫應(ying)答(da)提供了(le)重(zhong)要依(yi)據；在(zai)病原菌致(zhi)病(bing)機(ji)制研(yan)究方(fang)面(mian)，通過分(fen)析病原菌對該(gai)細(xi)胞(bao)的黏附(fu)、入(ru)侵(qin)及胞內(nei)增(zeng)殖(zhi)過(guo)程(cheng)，明(ming)確了(le)多種(zhong)病(bing)原菌的致(zhi)病(bing)關(guan)鍵(jian)基因(yin)；在漁藥篩選中，建立(li)了(le)基於細(xi)胞(bao)活(huo)性和(he)細(xi)胞(bao)因(yin)子分(fen)泌的藥物評(ping)價模(mo)型，已篩(shai)選出(chu)多種(zhong)具(ju)有免疫增(zeng)強(qiang)作用(yong)的漁用添加劑(ji)。
作為首ge穩(wen)定(ding)建立(li)的大黃(huang)魚(yu)巨(ju)噬細(xi)胞(bao)系(xi)，LCM10 不(bu)僅填bu了大黃(huang)魚(yu)免疫細(xi)胞(bao)模(mo)型的空白，更為海(hai)水(shui)魚(yu)類(lei)免疫學研究提(ti)供了(le)重(zhong)要的工(gong)具(ju)，為大黃(huang)魚(yu)病(bing)害(hai)的有效防(fang)控和(he)健(jian)康養(yang)殖(zhi)提(ti)供了(le)堅(jian)實的理(li)論基礎和技術支持。
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